温度对两种鲤耗氧率、排氨率及窒息点的影响

为了揭示温度对鲤呼吸代谢影响,采用密闭流水法测定了不同温度下两种规格松浦鲤(Cyprinus carpio Songpu)与松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu mirror)的耗氧率与排氨率,密封进出水口测定窒息点。结果显示:两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点均随水温上升而增加,1龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率显著高于1龄松浦鲤的耗氧率与排氨率,2龄松浦镜鲤的耗氧率与排氨率低于2龄松浦鲤,但差异不显著。两种鲤的昼夜耗氧率与排氨率变化趋势基本一致。1龄松浦鲤与1龄松浦镜鲤的窒息点为0.38~0.60 mg/L,2龄松浦鲤与2龄松浦镜鲤的窒息点为0.11~0.37 mg/L,且各组间差异显著。结果表明温度对两种鲤的耗氧率、排氨率与窒息点影响较大,且1龄时期松浦镜鲤比1龄松浦鲤代谢旺盛,2龄时期两种鲤代谢程度相近。

鱼类同工酶电泳方法的改进

以鲤鱼肝脏为样本,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行同工酶分析,对已有样品处理和电泳方法进行改进优化,采用氯仿脱脂防止谱带出现拖尾现象;提高电泳电压防止扩散、缩短时间,最终获得了较理想的实验结果。

大鳞鲃鱼同工酶的研究

本实验采用聚丙烯酰胺垂直平板电泳方法,分析了大鳞鲃鱼的肝、肾、眼3种组织中的醋酶(EST)、淀粉酶(AMY)、乳脱酸氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)4种同工酶。结果表明各种同工酶具有明显的组织特异性,肝脏酶活性最高,具有所有酶带。

银鲫的生殖方式

银鲫Carassius auratus gibelio同系繁殖或近缘杂交时,有80%的雌核发育、15%的两性生殖和5%的雄核发育过程。银鲫可产生不减数雌雄配子(或减数后加倍而不减数),雌雄配子排除对方配子而进行雌核发育或雄核发育,雌雄配子均存活且不融合形成嵌合体。伪雌鱼雌核发育和雄鱼雄核发育的后代性比证明,银鲫中具有较多的嵌合体,不排除减数配子融合形成纯合体的可能性。雌银鲫远缘杂交时进行雌核发育产生全雌后代,但是,雌性不稳定性使大约5%的雌鱼逆转为伪雄鱼,可在多代间稳定产生小比例的雄性,不排除雄性和嵌合体不稳定性。银鲫同系繁殖中的两性生殖和雄核发育途径使其雄性比例比雌鱼远缘杂交高10%。雄银鲫远缘杂交时,雌核保留,不减数雄核不同程度丢失染色体而形成非整倍体胚胎,不能存活。也有5%以下的存活个体,为倍性相加的4N杂交个体或恰巧丢失了1套或2套整倍基因组的3N或2N杂交个体和少量的雄核发育个体,可产生2N雌核发育后代。如果存在3N或2N杂交后代,就可以证明2N鲫和3N银鲫间可相互转化而保持基因组高度相似性。

一种简易的水质梯度发生装置

为了检测水质指标对鱼类孵化、生长和发育的影响,作者设计了一种简易的梯度发生装置。它由相邻的两个半圆柱腔体组成。一腔体上排列递减数量的小孔,另一腔体对应位置排列递增数量的小孔,腔体间对应小孔形成几个组合。向两腔体等压注入不同水源,每个组合汇流后引出一个等流量子水源,子水源呈现梯度性质。这种装置可以产生药剂、溶氧浓度和温度梯度等,以减少实验规模和操作误差。

用全血短时离心培养法制备鲤鱼染色体

本实验改进了鱼类淋巴细胞培养方法,采取全血短时离心方法纯化淋巴细胞,分离效果较好,使鱼血清保留在培养液中,促进了淋巴细胞的增殖。进行染色体制片时,背景清晰,分裂相多,满足了核型分析和原位杂交等研究需要。

显微介导的远缘基因渐渗技术在鲤育种中的应用

以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为外源DNA供体,运用显微介导的远缘杂交技术,将中国明对虾总DNA直接导入鲤(Cyprinus carpioL.)受精卵内,创建鲤外源DNA导入系,并利用AFLP分子标记技术和肌肉营养成分分析,对显微介导中国明对虾基因鲤进行外源DNA检测与蛋白质和氨基酸含量进行测定,结果表明:(1)在30对AFLP引物中,有8对所扩增带,其显微介导中国明对虾基因鲤亲本和子代中都有和中国明对虾基因相同而对照鲤没有的带。说明受体鱼中,肯定有一段序列与目的基因序列一致,研究证明了亲缘关系甚远的异源DNA片段的超远缘杂交的可行性。(2)导入中国明对虾总DNA片段的显微介导中国明对虾基因鲤的蛋白质含量分别为18.37%、18.47%、17.99%,均高于对照组(17.06%);而氨基酸的总量分别为17.16%、17.56%、16.92%,也高于对照组(16.13%),其中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸等4种鲜味氨基酸含量明显超过对照组,经数理统计分析,均有显著差异(P<0.05)。说明直接导入中国明对虾总DNA对显微介导中国明对虾基因鲤的营养成分和氨基酸含量均产生影响,这可对鲤的品质改进,丰富鲤的遗传基础,为显微介导的超远缘杂交技术的应用提供思路。

黑龙江水产研究所鲤育种概要

本文主要概述黑龙江水产研究所鲤Cyprinus carpio育种工作历史,介绍杂交选育亲本的来源与生物学特点以及育成品种的选育方法、技术路线和优良性状。通过引入国内外名优鲤,采用常规杂交选育、多性状遗传分析和分子辅助育种等方法,本土化培育出多个适合北方寒冷地区养殖的鲤新品种。采用的亲本包括黑龙江鲤C.C.amurensis、荷包红鲤C.C.var.wuyuanensis、散鳞镜鲤C.C.var.specularis amurensis、德国镜鲤C.C.var.S.germanensis和大头鲤C.pellegrini。育成品种包括荷包红鲤抗寒品系、松浦鲤C.C.'Songpu'、松荷鲤C.C.'Songhe、松浦红镜鲤C.C.'Songpu red mirror'、德国镜鲤选育系F_4、松浦镜鲤C.C.var.S.'Songpu'和易捕鲤。这些品种都具有抗寒、抗逆、易捕和快速生长等特性,适合北方以及全国各地养殖,其中松荷鲤、松浦镜鲤占有很大的市场份额,为我国的渔业发展做出了巨大的贡献。

利用微卫星标记高效鉴定松浦镜鲤的亲缘关系

用37尾雌和14尾雄松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu构建37个血统明确的全同胞家系,同池、同条件养殖。用筛选出的9个多态性微卫星标记和建立的多重PCR检测方法进行子代群体(1 318尾)的亲权鉴定。9个位点共检测到53个等位基因,各位点均为高度多态(PIC>0.5),平均期望杂合度为0.742,观测杂合度为0.755。亲本基因型信息的模拟分析显示,利用9个标记将子代分配到亲本对的成功率可达100%。实际鉴定结果:1 287尾个体准确鉴定到配组的亲本对,鉴定成功率为97.6%。以上结果表明:本研究提供的标记和检测方法可用于松浦镜鲤的亲本遗传距离分析和家系亲缘追溯,也适用于群体遗传多样性监测。

松浦红镜鲤形态学特征及主要经济性状的初步研究

将松浦红镜鲤(Cyprinus carpio Songpu red mirror)、散鳞镜鲤(Cyprinus carpio L.mirror)和荷包红鲤(Cyprinus carpio red var.Vuguanensis)抗寒品系乌仔各705尾放养到0.047hm^2池塘中,同塘培育到鱼种;春片鱼种各500尾放养到0.2hm^2池塘中;各池塘的投喂和饲养管理相同,按GB/T18654.2-2008和GB/T18654.3-2008标准测定鱼体质量和形态性状。结果显示,松浦红镜鲤体长/体高、体长/尾柄高、体长/头长、头长/吻长大于散鳞镜鲤和荷包红鲤抗寒品系;三个品种的8个可量比例性状主成分分析构建的3个主成分贡献率分别为:50.94%、17.08%、13.68%,累计贡献率达81.70%;主成分散点图显示,松浦红镜鲤聚成独立一簇,与其他品种明显区分;特定增重率、相对增重率、净增重、饲养成活率及越冬成活率等主要经济性状均显著高于荷包红鲤抗寒品系(P<0.05),但与散鳞镜鲤无明显差异。

小体鲟染色体核型及倍性的细胞遗传学研究

采用体内注射PHA和秋水仙素,肾细胞短期培养,常规空气干燥法制备小体鲟(Acipenser dabryanus Dumeril)的染色体,对肾细胞染色体数目统计分析表明,小体鲟染色体组是由116±4条染色体组成,核型公式为40m+34sm+26st+16t±mc,NF190±;采用德国PartecpasⅢ型流式细胞分析仪,以鸡红细胞为标准DNA(含量为2.3pg/N),测定小体鲟体细胞DNA含量为6.06pg/N,与染色体分析结果比较倍性一致。综合以上两项结果可以得出,小体鲟为四倍体鲟鱼。

两种鲤鲫杂交回交子代染色体核型分析及比较

采用PHA和秋水仙素体内注射制备两种鲤鲫杂交回交子代鱼(鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂;鲤鲫杂交♀×鲤♂)的染色体。结果表明:两种鲤鲫杂交回交子代染色体组由150条染色体组成,按着丝粒位置染色体组型可分为四组,每个染色体小组均由三条同源染色体组成。其中鲤鲫杂交♀×鲤♂回交的染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=234,其核型公式为:3n=60m+24sm+36st+30t;鲤鲫杂交♀×德国镜鲤♂回交染色体数目为3n=150,染色体臂数NF=258,其核型公式为:3n=63m+45sm+12st+30t。

黑龙江和长江散鳞镜鲤群体的种质差异分析

本文检测分析黑龙江和长江地区散鳞镜鲤Cyprinus carpio群体的主要生物学特征、生长性能、生化遗传特性。结果表明:长江群体后代鳞被分离较大;全长/体长、体长/体高、体长/体厚、体长/头长、体长/头高、头长/头高、尾柄长/尾柄高等可量性状差异显著。黑龙江群体较长江群体在1龄鱼阶段具有生长优势,2龄鱼生长无明显差异。2个群体1龄和2龄鱼的成活率无明显差异。测量不同酶在不同组织中的活性,结果发现长江散鳞镜鲤与黑龙江散鳞镜鲤在酯酶和乙醇脱氢酶的谱带活性具有一定的差异,淀粉酶、超氧化歧化酶、苹果酸脱氢酶及其他酶的带型和活性差异不明显。

不同家系松浦镜鲤生长性能比较及优良家系选择

在越冬前(145 d)、越冬后(332 d)和越冬后2个月(392 d),对同池、同条件养殖的36个家系(1287尾)松浦镜鲤Cyprinus carpio L.的体质量(body weight,BW)和越冬体质量损失率(overwintering weight loss rate,WLR)性状进行比较,以筛选生长性能优良的家系。结果显示,在3个检测时段,松浦镜鲤的BW和WLR的总体家系效应均达到了极显著水平(P<0.01),不同家系BW和WLR的最小二乘均值多重比较显示,BW145表现优良的家系为F36、F25、F31、F32和F34,BW332表现优良的家系为F36、F16、F25、F30、F31、F32和F34,BW392表现优良的家系为F36、F16、F30和F21;WLR表现优良的家系为F16、F30和F21。上述结果表明,各家系在3个检测时段生长表现并不完全一致,仅凭越冬前后的体质量性状进行选择可能会遗漏后期生长表现优良的个体;WLR适于作为越冬后生长潜力的评价指标,但最好与越冬后体质量性状相结合进行综合选择。

用微卫星标记鉴定和分析德国镜鲤的家系及遗传结构

为选育抗疱疹病毒的德国镜鲤(Cyprinus carpio var.mirror carp)新品种,2012年在F1抗病家系基础上,构建27个家系,同池养殖。本研究采集经疱疹病毒感染存活个体,应用多态性微卫星标记对构建的27个德国镜鲤家系进行鉴定和遗传结构分析。结果显示:(1)4个位点累计排除率为99.9%,亲本与子代的配对率为100%(P=0.05);(2)在27个家系的4个位点中检测到32个等位基因,每个位点7~10个等位基因,期望杂合度为0.6796~0.8019,平均期望杂合度为0.7510;(3)8个家系处于Hardy-Weinberg平衡状态下,19个家系处于不平衡状态下(P【0.05),其中有15个家系为极显著不平衡(P【0.01);(4)27个家系间遗传距离为0.1751~0.8772,平均值为0.4425,聚类分析中,27个家系主要聚在两个分支上,其它家系分散于不同分支。结果表明:27个家系具有较高的遗传多样性,家系间遗传分化明显,大部分家系因病毒选择作用偏离Hardy-Weinberg平衡。家系群体遗传结构研究结果将为下一步品种选育工作提供重要的理论依据和技术支持。

UPLC-MS/MS测定水产品中氟喹诺酮类药物前处理优化

建立了一种快速、灵敏的超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时定性和定量测定水产品中6种氟喹诺酮类（FQs）药物残留.考察了提取液类型、提取液甲酸体积分数、净化方式、脱水剂用量等影响浓缩富集效果的因素,确立了样品采用酸化乙腈溶液提取、正己烷脱脂并以无水硫酸钠除水等步骤.在电喷雾-多反应监测正离子模式下,色谱分离柱选用BEH C18色谱柱,流动相选用0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速为0.20 mL/min.结果表明,6种氟喹诺酮类标准品均在1~1 000μg/L内线性关系良好（R2均≥0.998）,在2~100μg/kg添加范围内平均回收率在76.9%~95.9%,相对标准偏差在4.8%~9.2%,最低检测限和定量限分别为0.1和0.2μg/kg.

五种鲤形态性状与体质量相关性及形态差异分析

本研究以体质量为因变量,形态性状为自变量,利用通径分析计算出的通径系数和决定系数,研究了黑龙江野鲤Cyprinus carpio、黄河鲤Cyprinus carpio haematopterus、松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu mirror、易捕鲤以及元江鲤Cyprinus carpio yuankiang体长、体高、体厚及头长对体质量的影响及其形态差异。结果表明,五种鲤的4个形态性状与体质量之间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01);表型性状中均为体质量变异系数最高。体长、体高和体厚是影响黑龙江野鲤和易捕鲤体质量的主要性状;体长和体高是影响黄河鲤、松浦镜鲤体质量的主要性状;体长是影响元江鲤体质量的主要性状。随后对五种鲤体高/体长、体厚/体长、头长/体长3种形态比例性状进行了单因素方差分析和聚类分析。单因素方差分析结果表明,五个鲤群体间三种形态比例形状差异显著(P<0.05)。聚类分析结果表明:黑龙江野鲤、黄河鲤、元江鲤及易捕鲤聚为一支,而松浦镜鲤与其他四种鲤群体的三种比例性状距离较远。五种鲤群体中有些群体的体高/体长和头长/体长的比例性状差异系数大于1.28,达到亚种水平。综上,本研究确定了影响五种鲤体质量的主要形态性状,确定了五种鲤群体在三种形态比例性状上的差异主要体现在体高/体长,其中松浦镜鲤较其余四种鲤具有较大差异。

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)性腺分化的组织学观察

每天采样观察3~60日龄人工养殖的黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco性腺分化和发育的组织学。结果表明:在水温(20±4)℃下,黄颡鱼卵巢的分化明显早于精巢,性腺的分化型为雌性异体型。孵出后14d卵巢开始分化,原始性腺在横切面出现组织突起,逐步形成卵巢腔;雄性分化始于孵出后54d,主要标志是形成输精管原基,进而形成输精管。本研究成果为黄颡鱼的人工繁殖提供了理论依据。

三种鲤表型性状与体质量的通径分析

本研究随机测定了二龄荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpio var.wananensis)、高寒鲤(Cyprinus carpio Songhe)、松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu mirror)的体质量(Y)、全长(X_(1))、体长(X_(2))、体高(X_(3))、体宽(X_(4))、尾柄长(X_(5))、尾柄高(X_(6))、头长(X_(7))、吻长(X_(8))、眼径(X_(9))、眼间距(X_(10))等11项性状,并以10项表型性状为自变量、体质量为因变量,利用相关系数分析、通径分析以及多元回归分析分别获得表型性状与体质量的相关系数、通径系数以及决定系数,建立表型性状影响体质量的多元回归方程。相关系数分析结果表明,三种鲤的部分表型性状均与体质量的相关性达到显著水平(P<0.05)。通径分析确定了影响体质量的主要表型性状,荷包红鲤抗寒品系为体长、体高、体宽、头长、眼间距;高寒鲤为体长、体高、体宽、尾柄高;松浦镜鲤为体长、体高、体宽、尾柄高、眼间距;均达到显著水平(P<0.05),三种鲤的体长对体质量的决定系数均最高。利用逐步多元回归分析,以体质量为因变量,剔除与体质量不显著相关的性状,以剩余性状为自变量构建最优线性回归方程,荷包红鲤抗寒品系:Y=20.788 X_(2)+4.037 X_(3)+9.508 X_(4)+3.091 X_(7)-3.887 X_(10)-1531.973;高寒鲤:Y=6.610 X_(2)+3.837 X_(3)+10.343 X_(4)+14.076 X_(6)-2207.838;松浦镜鲤:Y=13.87 X_(2)+6.979 X_(3)+8.254 X_(4)+3.877 X_(6)+12.544 X_(10)-2511.522。试验结果可为荷包红鲤抗寒品系、高寒鲤以及松浦镜鲤的选育提供重要理论支撑。

TLR18基因在鲤感染CyHV-3中的表达模式及信号通路

以抗病镜鲤选育系F4和德国镜鲤选育系为实验材料,通过RT-PCR技术确定鲤受CyHV-3感染过程两组鱼脾脏组织中TLR18、接头蛋白MyD88及相应配体TRAF6、下游因子IRF5及P65基因的表达模式,并分析其在抗病镜鲤选育系F4中的相关抗病机制。结果显示:TLR18、MyD88、TRAF6、IRF5基因在两组鱼间均呈先上升后下降并趋于平稳趋势,在48 h达到最高,而P65基因在未选育组呈先上升后下降并恢复初始水平趋势,在48 h达到最高,在选育组呈下降后恢复初始水平趋势。在未感染CyHV-3时,TLR18与IRF5基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组,MyD88、TRAF6与P65基因相对表达量在选育组极显著高于未选育组;到CyHV-3感染早期,TLR18与P65基因相对表达量在选育组极显著低于未选育组,MyD88、TRAF6及IRF5基因相对表达量在选育组显著高于未选育组。推测在CyHV-3感染过程中,TLR18基因通过依赖MyD88途径产生IRF5基因清除病毒的同时激活NF-κB信号通路,且选育组较未选育组通过产生较多IRF5基因清除病毒,而未选育组较选育组显著激活NF-κB信号通路产生相关炎症因子,这可能与选育组抗病性及抗病机制有关。该结果不仅验证了选育组在机体基础水平及先天免疫过程中对CyHV-3抗性的增强,还为深入研究选育组抗病机制及鱼类TLRs在病毒感染过程中的作用及其相关信号通路奠定基础。