登革病毒(NGC株)C与prM全长基因的扩增与克隆

目的 从登革病毒 (NGC株 )中快速分离基因组RNA ,RT -PCR扩增及克隆C和 prM全长基因 ,从而为研究蚊虫细胞对登革病毒的细胞内免疫研究奠定基础。方法 以Trizol试剂从C6 / 36细胞培养上清中提取基因组RNA ,RT -PCR扩增全长C和 prM基因 ,T -A重组入pGEM -T载体 ,重组质粒的双酶切、PCR与测序鉴定。 结果与结论 应用Trizol试剂从蚊细胞培养液上清中快速分离到高纯度和完整登革病毒RNA基因组 ,成功扩增与克隆出全长登革病毒C和

白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

【目的】PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌 Wolbachia16SrRNA序列 ,分析其种系发生关系及传播方式。【方法】从单只雌蚊中提取DNA ,PCR法扩增 16SrRNA序列 ,扩增产物进行克隆及测序。【结果】从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16SrRNA序列 ,并克隆入 pGEM T载体 ,测序证明两序列长度分别为 897bp。【结论】成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16SrRNA序列。测序和同源性分析表明 ,它们之间的同源性为 99 9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。

登革病毒prM基因真核表达载体的构建及在白纹伊蚊细胞C6/36中的表达

目的 构建登革病毒prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达。方法 将prM基因亚克隆入真核表达载体 pEGFP -N3,转化大肠杆菌JM 10 9,筛选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定 ,将获得的重组质粒以脂质体法转化白纹伊蚊C6 / 36细胞并使其表达 ,利用RT -PCR法检测目的基因的转录 ,Western -blot检测融合蛋白的表达。结果 成功构建了 pEGFP -prM重组质粒 ,RT -PCR证明 prM基因在蚊细胞内的转录 ,Western -blot检测到 prM -GFP融合蛋白的表达。结论 成功构建登革了病毒 prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达 。

登革病毒转基因载体pB[PUBnls-EGFP-prM]的构建及其在C6/36细胞中整合作用的检测

为利用转基因技术来探索新的蚊媒疾病防治方法 ,将登革病毒前膜蛋白基因prM重组入以转座子piggyBac因子为基础的载体 ,构建了昆虫转基因载体pB[PUBnls_EGFP_prM],在辅助质粒的作用下共同转染白纹伊蚊AedesalbopictusC6 36细胞。PCR和Southernblot证明构建的转基因载体可以将EGFP_prM基因整合入蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥功能 。

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定

目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。【结果】获得了1条长240bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%～46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为333%、329%和299%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因的原核表达及鉴定

目的 对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法 根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行原核表达。将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,通过Westernblot分析鉴定目的蛋白的位置 ,并运用核酸蛋白分析仪扫描凝胶以确定表达产物的含量。结果 获得了高效表达的融合蛋白GST -CYP6N3,表达量占菌体总蛋白的 37 4 9%。结论 本实验成功地异源表达了白纹伊蚊CYP6N3基因 ,为体外重建细胞色素P4 5 0CYP6N3单加氧酶系 。

蚊虫细胞色素P450基因系列研究

报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近 5年来有关蚊虫细胞色素P45 0基因 (CYP45 0 )系列研究结果 ,包括 :①通过简并引物PCR分别从致倦库蚊、白纹伊蚊及中华按蚊中获得 3个、2个、2个CYP4家族成员基因片段 ;通过简并引物PCR及RT PCR从白纹伊蚊中获得 16个CYP6家族成员基因片段 ;②利用cDNA末端快速扩增 (RACE)法获得了白纹伊蚊CYP6家族 3个新的全长cDNA序列及 7个超过其全长一半以上的cDNA序列。GenBankaccessionnumber分别为AF2 83836 AF2 83838(全长cDNA序列 )和AF2 84782 AF2 84783(非全长cDNA序列 ) ,被国际P45 0命名委员会正式命名为CYP 6N3v1 v3(全长cDNA序列 )和CYP 6N3v4、CYP 6N4v1 v6 ,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中 ;③运用基因步移方法从白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP 6N3上游 3 0 76bp调控序列 ;④对白纹伊蚊CYP 6N3、CYP 6N4非翻译区序列功能分析显示 :昆虫CYP45 0与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似 ,但具有多态性的特点 ;⑤对白纹伊蚊CYP 6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示 :蚊虫中CYP45 0转录起始存在着复杂性 ;⑥证实蚊虫中 CYP6存在多样性 ,并分析讨论了此种多样性形成的可能机制 ;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P45 0

利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因

【目的】构建突变型α L 艾杜糖醛酸酶基因 (IDUA)cDNA ,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础。【方法】以野生型pcDNA3 IDUA为基础质粒 ,采用双引物法体外定点诱变技术 ,引入突变E40 4X。【结果】突变区域经PCR SSCP和测序证实诱导突变成功。【结论】本研究成功构建了突变型IDUAcDNA ,可用于下游的体外表达 ;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点 ,是体外构建突变型基因的一种有效方法。

基于PAC的煤矿主扇风机远程综合监控系统

介绍了云驾岭煤矿主扇风机远程综合监控系统,以计算机监测、监视、监控、语音电话、光纤网络通讯综合为一体,应用在煤矿主扇风机,特别是利用光纤网络长距离传输技术,并实现了风机房与矿上的数据、图像、语音的信息联络,实现了远程控制风机。

基于PAC的煤矿主扇风机远程综合监控系统

介绍了煤矿主扇风机远程综合监控系统,以计算机监测、监视、监控、语音电话、光纤网络通讯综合为一体,应用在煤矿主扇风机,特别是利用光纤网络长距离传输技术,并实现了风机房与矿上的数据、图像、语音的信息联络,实现了远程控制风机。

变频技术在空气压缩机改造中的应用

为进一步做好节能减排工作,提高企业经济效益,文章介绍了变频技术在空压机节能改造中的应用,有效的实现了节能,取得了很好的经济效益。

滚筒式采煤机摇臂振动分析

鉴于滚筒式采煤机割煤时摇臂的振动加剧了设备相关部件的失效及截齿的消耗,故对采煤机摇臂的振动进行分析,建立数学建模。通过对系统的闭环特征时域、频域判断,由奈奎斯特判据进行稳定分析,确定振动的性质。提出了摇臂振动问题的解决方案,以达到降低振动提高设备使用寿命、降低故障率的目的。

延深型矿井生产供水系统改造

通过分析孙庄采矿公司原供水系统存在的缺点,提出新的解决方案,很好地解决了管路老化与生产供水的矛盾,具有显著的经济效益。其成功地应用为延深型矿井生产供水系统改造提供了一条思路。

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株基因组中CYP6基因片段的分离与鉴定

目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株ＣＹＰ６ 基因家族中某个成员的一个基因片段。方法 根据家蝇ＣＹＰ６Ａ１、ＣＹＰ６Ｄ１ 以及致倦库蚊ＣＹＰ６Ｅ１ 同源区氨基酸序列，设计１ 对简并引物，进行ＰＣＲ，获得一与设计的细胞色素Ｐ４５０ 基因片段大小相符合的基因片段。将该片段与ｐＵＣ１９ 质粒重组，并克隆至ＪＭ１０９ 大肠杆菌中，经筛选后测序；将推导的氨基酸序列进行同源性分析，并用ＰＣ／ＧＥＮＥ软件绘制系统树。结果 获得了１ 条长２４８ｂｐ 的核酸序列；所得序列与昆虫ＣＹＰ６ 家族的同源性在３４－２ ％ ～４４－３％ 之间，而与ＣＹＰ４ 家族同源性较低，与ＣＹＰ４Ｃ１ 、ＣＹＰ４Ｄ１、ＣＹＰ４Ｄ２ 同源性分别为２２－１％ 、２９－５ ％ 和２７－６ ％ ；所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。结论 该序列为ＣＹＰ６ 家族中某一成员的基因片段。

矿井提升机限载式拉力测量装置

在煤矿主井箕斗提升系统和副井罐笼提升系统中,为保证安全生产,一般对承载设备都设有载荷监控系统,借助于拉力传感器,实时得出载荷的具体值。但由于传感器的量程选择有限制,一旦有超载情况发生,极易造成传感器的损坏。文章中提到的一种限载式拉力测量装置,对传感器元件起到了很好的保护作用。

登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究

目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果 构建了包含prM基因的 3种昆虫表达载体 ,Westernblot和荧光显微镜观察证明在C6 36细胞中成功表达了prM EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6 36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论 3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象 ,说明无论是否表达prM蛋白 ,只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象 ;prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫 ;其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。

白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6 cDNA片段克隆、鉴定

根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,从白纹伊蚊四龄期活体幼虫总RNA中扩增出与设计相符的基因片段。利用T-A克隆法,将获得的基因片段克隆人pGEM-T easy载体。经限制性内切酶酶切和PCR鉴定证明重组成功。将筛选的阳性克隆经序列测定及同源性分析,表明共获得CYP6家族中9个的新cDNA序列。为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成的分子机制打下基础。

褐煤用刮板输送机故障原因分析

国内某褐煤提质成型项目工艺系统中使用了变形结构的大倾角刮板输送机,该输送机在试车过程中出现电动机电流过高、刮板基础变形和刮板内部堵塞等故障。通过对该刮板输送机的受力、结构等进行分析,得出了导致故障的原因,并给出了改进方案。通过改进,该刮板输送机的性能大大提高,可以连续稳定运行。改造方案对该类输送设备的设计选用有一定的指导意义。