继代核移植能成倍提高来自奶山羊卵胞质体的异种间核移植重构胚的发育率(英文)

为了提高异种间核移植重构胚的发育率,本研究以体内排放的奶山羊成熟卵为供胞质的受体细胞,以人、兔、波尔山羊等的异种或亚种体细胞的原代核移植(Primary Somatic Cell Nuclear Transfer,PSCNT)重构早胚(8-16细胞期)的卵裂球作供核体,观察经亚种或异种卵胞质体短期"修饰"的核再移植产生的继代(Secondary SCNT,SSCNT)重构胚的着床前发育潜能。结果:人、兔、波尔山羊的继代桑椹/囊胚发育率均显著地高于其PSCNT胚胎(人,14.81%VS.7.79%;兔,23.53%VS.12.50%;波尔羊,55.35%VS.24.53%);这些早胚的各阶段发育时程仍遵循供核体动物正常受精卵的发育时程。结果启示:奶山羊成熟卵胞质对异种体细胞核亦具一定的去分化能力,能支持重构胚发育到囊胚;异种重构胚的发育特征是由供体核所决定的;继代核移植几乎能够成倍提高异种间重构胚的着床前发育率,提示核的去分化完全是在母型信息主导的调控之下完成的,而进一步发育的时序似乎是由核决定的;成倍延长在含母型信息主导调控环境中的时间能成倍提高SCNT重构胚的着床前发育率。

奶牛卵泡超数同步发育及其卵母细胞的发育潜能

目的建立促奶牛卵泡超数同步发育的方法,并利用体细胞核移植和分子技术评价来自这些卵泡的卵母细胞发育潜能。方法用E2-P4对淘汰的高产奶牛进行联合处理后,分别对其实施不同组合的外源促性腺激素处理[FSH12h组,FSH48h组,FSH48h-LH6h组(简称LH6h组),FSH48h-LH26h组(简称LH26h组)]以促进其卵泡超数同步发育;然后从卵泡中回收COCs进行体外成熟,排放第一极体的卵供作优质种牛的体细胞核转移(nucleartransfer,NT)受体,以评价卵的发育潜能。结果E2-P4能成功地诱导奶牛卵巢中产生一个新的卵泡起始波,并能保证卵泡在外源促性腺激素作用下实现超数同步发育;上述四组不同组合外源促性腺激素处理的卵母细胞衍生的NT重构胚经体内培养7d后,后3组的囊胚发育率显著高于FSH12h组和对照组(P<0.01);将这些克隆囊胚移植同步发情的受体牛子宫后,仅LH26h组的卵所获得的克隆胚能实现全程发育(直至克隆小牛出生)。经RT-PCR分析颗粒细胞中FSHr、LHr和连接蛋白43(Connexin43,Cx43)等mRNA含量变化,以及Western印迹分析其Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化,证实该组卵巢提供的同步发育卵泡为早期闭锁卵泡。结论E2-P4-FSH48h-LH26h组合处理可人为调控牛卵泡的同步发育;处于早期闭锁状态卵泡的卵母细胞具备较高的发育潜能。

波尔山羊批量胚胎移植

目的 提高波尔山羊繁殖率。方法 采用激素处理经产母波尔山羊 ,超数排卵 ,经与纯种公波尔山羊配种后 48～ 6 0h ,手术回收输卵管中早期发育的胚胎 ,再经手术移入同步发情的受体莎能奶山羊的输卵管内 ,妊娠产仔。结果 ①超排 5 6头波尔山羊 (其中 10头重复使用 ) ,获 12 2 2枚早期胚胎 ,其中 2～ 8细胞的胚胎占 84 0 %(10 2 6 12 2 2 ) ,1细胞胚胎占 15 0 % (183 12 2 2 ) ,异常卵占 1 0 % (13 12 2 2 ) ;②移植 5 5 9头受体 ,移植后 30～ 35d ,B超妊娠诊断 30 2头 ,其中 177只怀孕 ,16 7只足月产仔 ;受体羊总怀孕率 5 8 7% (32 8 5 5 9) ,妊娠羊足月产仔率 80 % (2 6 1 32 8) ,共产仔 36 5头 ,其中产双胎的受体有 79只 ,占妊娠羊数的 30 3% (79 2 6 1) ;③羔羊出生重平均为 (3 8± 0 86 )kg,最重达 6 5kg。以上结果表明 ,在半年内经过一次超数排卵、胚胎移植 ,每头波尔山羊 (n =46 )平均可产 4 4(2 0 3 46 )头羔羊 ;半年内重复超数排卵、胚胎移植 ,每头波尔山羊 (n =10 )平均可产 16 2 (16 2 10 )头羔羊 ;结论 与常规繁殖相比 ,不仅提高了纯种波尔羊的繁殖速度 ,创造了较好的经济效益 。

波尔山羊胚胎移植

波尔山羊是一种著名的肉用山羊品种。为了提高波尔山羊繁殖效率 ,采用激素处理波尔山羊群 ,超数排卵 ,经与纯种波尔山羊公羊配种 ,手术从输卵管中冲出发育至 2～ 4细胞的胚胎 ,再经手术移回同步发情的受体莎能奶山羊输卵管内 ,妊娠产仔。结果 :①超排 4头波尔山羊 ,获卵 6 9枚早期胚胎 ,其中 6 4枚为 4细胞 ,3枚 2细胞 ,2枚 1细胞 :②移植 34头受体 (每头受体移植 2枚胚胎 ) ,怀孕 17头 ,怀孕率 5 0 % ;产仔 2 2头 ,其中产双胎的有 7只受体 ,占妊娠总数的 35 % (7/17) ;③羔羊出生重平均为 3 8kg± 0 86kg ,最重达 6kg。每头波尔山羊经过一次超数排卵、胚胎移植平均可产 5 5头羔羊 ,若一年内进行 4次可获得 2 2头羊羔 ,将极大地提高纯种波尔羊的繁殖速度。