具核梭杆菌外膜囊泡的免疫原性

【目的】评价模拟正常肠道和肿瘤微环境的pH条件下制备的具核梭杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的安全性和免疫原性,为后期开发基于外膜囊泡的具核梭杆菌疫苗奠定基础。【方法】采用超高速离心和密度梯度离心方法制备在不同pH条件下生成的外膜囊泡,建立人结肠癌细胞HCT116、人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、小鼠巨噬细胞Raw264.7感染模型;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]和细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞增殖的影响;用流式细胞仪和贴壁细胞原位荧光检测细胞凋亡情况;通过小鼠的血常规检测体内安全性;通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测免疫原性;通过细胞黏附抑制实验检测免疫保护效果。【结果】酸性条件生成的外膜囊泡(acidic outer membrane vesicles, aOMVs)和中性条件生成的外膜囊泡(neutral outer membrane vesicles, nOMVs)对人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人结肠癌细胞HCT116和小鼠巨噬细胞Raw264.7的细胞增殖均无显著性影响,也不能引起细胞凋亡;aOMVs和nOMVs在浓度为25μg/mL处理红细胞时仍未见明显的溶血现象产生,并且在小鼠体内血常规和全血检测指标数据均在正常范围内;aOMVs和nOMVs均具有免疫原性,可有效减少具核梭杆菌在结肠癌细胞DLD-1上的黏附,aOMVs抗体性能优于nOMVs抗体。【结论】aOMVs和nOMVs的安全性均良好,均具有免疫原性,aOMVs优于nOMVs。