大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞相关基因表达谱分析

目的:利用cDNA微阵列技术研究大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化中基因表达谱的变化。方法:分离、培养大鼠骨髓基质细胞,以地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导分化,抽提细胞mRNA并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达。结果:经诱导后的细胞可见有钙化结节,与正常传代的细胞相比有292个基因的差异表达超过了3倍,而参与转录、翻译、糖基化修饰和调节细胞外基质、信号分子形成及参与代谢的相关基因表达均有不同程度的上调。结论:cDNA微阵列技术可显示细胞在诱导分化中多基因的差异表达,这些差异表达基因是大鼠骨髓基质细胞在增殖和成骨分化诱导中所必需参与的基因。

大鼠骨髓基质细胞传代培养中相关基因的差异表达

目的 :研究大鼠骨髓基质细胞 (BMSCs)体外传代培养中相关基因的差异表达。方法 :取大鼠骨髓 ,分离、培养骨髓基质细胞并传代 ,抽取细胞 (mRNA)并逆转录成cDNA探针 ,用含有 1 1 76个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达 ,整理、分析实验数据。结果 :传至P3代细胞与原代细胞 (P0 )相比有1 0 4个基因的差异表达超过了 3倍 ,其中有 5 3个基因表达量明显上升 ,5 1个基因表达量明显下降 ,主要涉及一些细胞粘附分子及胞外基质、细胞信号与传导、细胞受体和细胞骨架等方面的相关基因。结论 :通过基因芯片技术可以显示BMSCs在体外传代培养中众多基因的差异表达 ,而这些基因的差异表达与细胞的增殖和分化存在一定的关系 。

干细胞治疗自闭症:安全性和有效性观察

背景:自闭症伴随许多神经生理学上的改变,特别是免疫异常和神经系统的组织灌流不足。目的:评价干细胞治疗自闭症的可行性、安全性和有效性。方法:42例自闭症患者随机分为脐血组、混合组和对照组,脐血组应用脐血单个核细胞治疗;混合组应用脐血单个核细胞联合脐带间充质干细胞治疗;对照组行康复训练治疗。脐血组和混合组患者治疗前和首次治疗后4周、4个月行相关指标实验室检查,并观察有无不良反应发生。3组患者在治疗前、首次治疗后4周和4个月分别行儿童自闭症评定量表(CARS)和临床总体印象量表(CGI)评估。结果与结论:脐血组和混合组患者在治疗前和首次治疗后4周、4个月相关指标实验室检查未发现有显著异常变化,干细胞治疗后无严重不良反应发生。脐血组和混合组CARS评分在治疗前、首次治疗后4周、首次治疗后4月之间比较均明显降低,CGI量表发现混合组总有效率高于脐血组。结果提示,应用脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞治疗自闭症是安全的,其疗效显著高于康复训练治疗。

脐血间充质干细胞移植治疗帕金森病的可行性

背景:研究证实干细胞在体内体外均可被诱导分化成多巴胺能神经元,这为干细胞移植治疗帕金森病提供了理论基础。目的:探讨脑内移植脐血间充质干细胞治疗帕金森病模型大鼠的可行性及作用机制。方法:SD大鼠脑内注射6-羟基多巴建立帕金森病模型,将22只造模成功大鼠随机分为脐血间充质干细胞移植组12只和对照组10只,脑内分别注射脐血间充质干细胞悬液和磷酸盐缓冲液。细胞移植后第1-8周,每周腹内注射阿朴吗啡观察大鼠旋转行为,并于第2,8周取大鼠纹状体和黑质部分行免疫组织化学染色。结果与结论:1脐血间充质干细胞移植组大鼠转圈次数随着时间延长逐渐下降,而对照组大鼠转圈次数没有明显改变,且移植后3-8周两组旋转圈数差异有显著性意义(P<0.05)。2移植后2周时,脐血间充质干细胞移植组大鼠纹状体针道内及附近有酪氨酸羟化酶阳性细胞存在;对照组大鼠的纹状体针道处无外源性细胞存在。移植后8周时,脐血间充质干细胞移植组鼠纹状体针道内仍有细胞存活,并有酪氨酸羟化酶阳性细胞存在,对照组大鼠纹状体处无酪氨酸羟化酶阳性细胞表达。结果表明脐血间充质干细胞移植后可在脑内存活并且表达酪氨酸羟化酶蛋白,且能改善帕金森病模型大鼠的行为学异常。

应用基因表达谱芯片研究人胃癌细胞周期和细胞凋亡相关基因

目的:筛选胃癌发生过程中与正常组织差异表达的细胞周期和细胞凋亡相关基因并作初步功能分析。方法:应用Trizol一步法抽提胃癌及正常组织总RNA,分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记cDNA探针,与含有8464种cDNA基因的表达谱芯片杂交,分析胃癌与正常组织间差异表达的基因,对所获得的基因进行分子生物信息学分析。结果:胃癌与正常组织间差异表达的细胞周期和细胞凋亡基因有17条,占芯片基因总数的0.2%。其中与细胞周期相关的基因11条,与细胞凋亡相关的基因6条。在胃癌组织中表达量增加的10条,表达量下降的7条。生物信息学分析显示,该17条差异表达的细胞周期和细胞凋亡相关基因,与胃癌组织细胞的生长和凋亡有关。结论:胃癌的发生、发展过程中存在多基因表达调控的改变,细胞周期和细胞凋亡基因与胃癌组织细胞的生长和凋亡有相关性,对于该相关基因群的进一步研究有助于阐释胃癌的发病机制。

脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞治疗儿童孤独症的安全性与有效性

背景:目前国内外尚没有治疗儿童孤独症的金标准,康复治疗效果不佳。目的:评价脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞治疗儿童孤独症的临床安全性和有效性。方法:37例儿童孤独症患者非随机分为脐血组、混合组和对照组。脐血组应用脐血单个核细胞加康复训练治疗;混合组联合应用脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞加康复训练治疗;对照组单纯行康复训练治疗。脐血组和混合组患者在干细胞治疗前和首次治疗后1,2,6个月分别行相关指标实验室检查,并观察有无不良反应发生。3组患者在治疗前和首次治疗后1,2,6个月分别行儿童孤独症评定量表(CARS)和异常行为量表(ABC)评估。结果与结论:脐血组和混合组患者在干细胞治疗前和首次治疗后1,2,6个月相关指标实验室检查未发现有意义异常变化,干细胞治疗后无严重不良反应发生;根据CARS和ABC评分,3组治疗均有效,其疗效比较:混合组优于脐血组,脐血组优于对照组。

人脐血单个核细胞移植前后患者脑脊液中细胞生长因子的变化

背景:移植的神经干细胞可以通过分泌或调节某种或几种神经营养因子来促进损伤后神经功能的修复。目的:检测人脐血单个核细胞治疗患者脑脊液中神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的水平。方法:选择山东省交通医院行人脐血单个核细胞治疗的神经系统疾病患者28例,于腰穿蛛网膜下腔途径行脐血单个核细胞治疗1次/周,共治疗3次,每次治疗前留取脑脊液2mL。采用酶联免疫吸附法(ELlSA)检测人脐血单个核细胞治疗患者脑脊液中神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平的变化,并观察移植后不良反应。结果与结论:经单因素方差分析及组间q检验,第2次治疗1周后,神经生长因子水平明显高于治疗前及第1次治疗后1周(P<0.05);第2次治疗1周后,血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平均高于治疗前及第1次治疗后1周,但差异无显著性意义(P>0.05)。脐血单个核细胞移植后出现低热12例,头痛4例,腰痛3例,乏力4例,恶心、呕吐2例,均为一过性症状,数日内自行缓解。结果显示,人脐血单个核细胞治疗患者脑脊液中神经生长因子水平有明显增高,血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的含量变化不明显。

人脐血单个核细胞移植前后自闭症患儿脑脊液中细胞生长因子的表达

背景:研究发现脐血单个核细胞治疗自闭症具有一定的效果。目的:观察人脐血单个核细胞移植治疗自闭症患儿脑脊液中神经生长因子、血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平的变化。方法:经腰穿蛛网膜下腔途径,以2×106/kg异体人脐血单个核细胞移植治疗30例儿童自闭症患者,1次/周,共治疗3次。结果与结论:第2次移植1周后患儿脑脊液中神经生长因子较移植前、第1次移植1周后水平增高(P<0.05),血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子水平均较移植前、第1次移植1周后水平增高,但差异无显著性意义(P>0.05)。说明人脐血单个核细胞移植治疗自闭症患儿脑脊液中神经生长因子水平明显增高,血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子变化不明显。

血浆抗凝物质在深静脉血栓形成患者中的变化

目的研究抗凝血酶(AT)、蛋白 S(PS)、蛋白 C(PC)及活化蛋白 C 抵抗(APC-R)在深静脉血栓形成 (DVT)患者中的变化,探讨其与 DVT 的关系。方法采用发色底物法、ELISA 法、免疫浊度法检测100例 DVT 患者和 100例健康人的 AT 活性及含量、总 PS 含量、PC 活性及 APC-R。结果 DVT 组与正常对照组相比,AT 活性及含量、总 PS 含量、PC 活性均明显降低,差异呈显著性(P＜0.01～0.001)；本组100例 DVT 患者中共有25例患者存在有抗凝蛋白缺陷,以 PS 缺陷的总发生率最高,为13%(13例),PC 缺陷为8%(8例),AT 缺陷占5%(5例),APC-R 的总发生率最小,为4%(4例)。结论先天性或获得性抗凝蛋白缺陷是中国人 DVT 发病和复发的重要机制之一。中国人静脉血栓易栓症的病因组成比与西方国家不同,因此对每一 DVT 病人均应进行抗凝蛋白检测。

凝血和抗凝及纤溶功能改变在进展型脑梗死患者中的临床意义

目的研究进展型脑梗死患者凝血、抗凝和纤溶系统功能指标的变化,探讨进展型脑梗死的发病机制,为其临床早期诊断和治疗提供依据。方法对比检测了209例进展型脑梗死患者与209例完全型脑梗死患者血浆凝血酶原时间、凝血酶时间、部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、血小板聚集率、血管性血友病因子含量、抗凝血酶、组织型纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂-1活性水平。结果与完全型脑梗死患者比较,进展型脑梗死患者的血浆凝血酶原时间、凝血酶时间、部分凝血活酶时间显著缩短,抗凝血酶、组织型纤溶酶原激活物水平显著降低,而纤维蛋白原、血小板聚集率、血管性血友病因子、纤溶酶原激活物抑制剂-1水平显著升高(P<0.01)。结论进展型脑梗死患者存在着明显的高凝血和较低的抗凝和纤溶活性。

老年原发性高血压患者血栓前状态的研究

目的探讨老年原发性高血压(EH)患者血栓前状态(PTS)分子标志物的变化及其易并发血栓性疾病的机制。方法测定100例老年EH患者及100例老年健康对照者的血浆血管性血友病因子(vWF)、血小板α-颗粒膜蛋白-140(GMP-140)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶原片段1+2(F1+2)的含量,抗凝血酶(AT)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的活性及血液流变学指标,并进行了分析与评价。结果老年EH病人血浆vWF、GMP-140、Fg、F1+2含量、PAI-1活性、血黏度较对照组均明显升高,而AT、t-PA活性均明显下降(P<0.01)。随着血压水平升高,PTS标志物水平变化越明显。结论PTS与老年EH患者的病情发展及血栓性疾病的发生密切相关。

老年高血压患者的血栓前状态分子标志物的改变及临床意义——附100例报告

目的:研究老年高血压患者的血栓前状态(prothrombotic state,PTS)分子标志物的变化,为临床早期诊断治疗提供客观依据。方法:测定100例老年原发性高血压患者(高血压组)及100名老年健康人(对照组)的血浆血管性血友病因子抗原(von Willebrand factor antigen,vWF:Ag)、血浆P-选择素、纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)、凝血酶原片段1+2(prothrombin fragment1+2,F1+2)的含量,抗凝血酶、组织型纤溶酶原激活物(tissue type plasminogen activator,t-PA)、纤溶酶原激活抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的活性,并进行分析与评价。结果:老年Ⅱ、Ⅲ级高血压组病人血浆中vWF:Ag、P-选择素、Fg、F1+2的含量、PAI-1较对照组均明显升高,而抗凝血酶、t-PA较对照组均明显下降,比较差异有统计学意义(均为P<0·01)。结论:老年Ⅱ、Ⅲ级高血压患者存在明显的内皮损伤、血小板活化、高凝状态及抗凝和纤溶活性的降低,即PTS。因此,对这类病人应定期监测上述指标,以便早期防治缺血性心、脑血管疾病。

基因重组葡激酶和重组链激酶在猪急性脑栓塞模型中溶栓作用的比较研究

目的：比较局部动脉内灌注重组葡激酶和重组链激酶对脑血栓的溶化效果及对出凝血系统的影响。方法：制成１８只幼猪急性血栓性脑栓塞模型，４小时后分３组，２个实验组自颈内动脉灌注重组葡激酶（０．２ｍｇ／ｋｇ）或重组链激酶（３×１０４Ｕ／ｋｇ），对照组自颈内动脉灌注５％葡萄糖；脑血管造影观察血栓是否溶化；并测定凝血系统指标。结果：２个实验组在用药后１．５小时血管再通均高于对照组，葡激酶组在０．５和１．０小时的再通率高于链激酶组（Ｐ均＜０．０５）。葡激酶组对纤维蛋白原、纤溶酶原影响小，凝血酶原时间、凝血酶时间及部分凝血活酶时间延长的幅度小于链激酶组。结论：重组葡激酶及链激酶均能溶化脑血栓，但前者溶栓效果较好。

不同剂量重组葡激酶治疗幼猪急性脑梗死对凝血和纤溶功能的影响

目的 研究重组葡激酶 (rSaK)治疗急性脑梗死对血液凝血及纤溶功能的影响。方法 幼猪 48头 ,分为对照组和 7个rSaK组 (剂量 0 4万～ 6 4万IU/kg) ,每组 6头。幼猪脑梗死 4h后静脉用rSaK ,对照组用安慰剂。治疗后 30、60、90min测凝血酶原时间 (PT)、部分凝血活酶时间 (APTT)、凝血酶时间 (TT)、纤维蛋白原 (Fg)、优球蛋白溶解时间 (ELT)、血浆纤溶酶原活性 (Plg :A)、D -二聚体 (DD)。结果 rSaK延长PT、APTT、TT ,缩短ELT ,增加DD ,剂量越大越明显 ,但对Fg、Plg :A影响很小。结论 rSaK能显著增强纤溶活性 ,对血液凝血功能影响较小。

重组链激酶治疗幼猪急性脑梗死的药效学

目的 :研究重组链激酶 (rSK)治疗急性脑梗死的药效学。方法 :幼猪 72头 ,分 7个静脉组 ,3个动脉组及 2个对照组 ,每组各 6头。幼猪脑梗死4h后分别经静脉和颈内动脉 (ICA)应用rSK ,动态检测ICA血流量及脑血管造影。 2 4h后取脑作病理检查。结果 :静脉组rSK 2万IU·kg- 1或以上剂量的血管再通率大于对照组 (差异有显著意义 ,P <0 .0 5 ) ;同一剂量动脉组再通率大于静脉组 (P >0 .0 5 )。血管完全再通 ,部分再通及不通的病理学检查脑梗死发生率分别为 7% ,5 0 %和 10 0 % (差异有显著意义 ,P <0 .0 5 )。结论 :静脉用rSK治疗急性脑梗死的最低有效剂量为 2万IU·kg- 1;局部动脉给药以 1～ 2万IU·kg- 1为宜。

基因重组葡激酶和重组链激酶溶栓作用的实验研究

目的:比较基因重组葡激酶和重组链激酶对脑血栓的溶化效果及对出凝血系统的影响。方法:制成猪血栓性脑栓塞模型,4h后分组自颈内动脉灌注基因重组葡激酶(rSak,0.2mg/kg)或重组链激酶(rSK,30000IU/kg),脑血管造影观察血栓是否溶化,测定凝血系统指标。结果:两实验组在用药后1.5h血管再通均高于对照组,rSak组在0.5h、1.0h的再通率高于rSK组。rSak组对纤维蛋白原、纤溶酶原影响小,凝血酶元时间、凝血酶时间延长的幅度小于rSK组。结论:基因重组葡激酶及链激酶能溶化脑血栓,但前者溶栓效果较好,对凝血功能影响较小。

基因重组葡激酶在猪急性脑栓塞模型中的溶栓作用

研究颈内动脉灌注基因重组葡激酶对脑血栓的溶化作用及对出、凝血和血液纤溶系统的影响。方法制成猪血栓性脑栓塞模型，４ｈ后自颈内动脉灌注不同剂量的重组葡激酶（０．１、０．２、０．４ｍｇ／ｋｇ），脑血管造影观察血栓是否溶化，并测定出、凝血及纤溶系统指标。结果随葡激酶剂量增大，血管再通率增高，大剂量组对出、凝血及纤溶系统的影响较明显。结论重组葡激酶能有效溶化猪脑血栓，最佳剂量为０．２ｍｇ／ｋｇ。

重组葡激酶不同给药途径治疗幼猪急性脑栓塞的比较研究

目的 :比较重组葡激酶 (r Sa K)不同给药途径治疗幼猪急性脑栓塞的疗效。方法 :采用颈内动脉注入体外血栓法建立幼猪急性脑栓塞动物模型 ,4小时后自颈部动脉导管或腹壁静脉应用 r Sa K(剂量分别为0 .8× 10 4 、1.6× 10 4 、3.2× 10 4 U / kg) ;对照组用安慰剂。治疗结束后 30、6 0和 90分钟行脑血管造影 ,同时检测凝血指标。结果 :动脉给药组和静脉给药组的血管再通率均高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,但 2组之间无显著性差异 ;2组对凝血功能的影响均较小。结论 :颈内动脉或周围静脉应用 r Sa K均能安全、有效地溶化猪脑血栓。

吸烟者外周血不同T淋巴细胞亚群在体外扩增中的异常增殖及功能研究

目的检测吸烟对外周血T淋巴细胞体外扩增培养过程中免疫杀伤细胞和调节性T细胞增殖和功能的不同影响。方法选择平均年龄30岁的男性吸烟者27例与不吸烟男性健康对照组16例,采用密度梯度离心法从外周血中分离淋巴细胞,添加抗CD3和抗CD28抗体,以及IL-2和IFN-γ等多种细胞因子扩增培养15 d,计算细胞的增殖率,并利用流式细胞术检测扩增后各组淋巴细胞中免疫杀伤细胞(CD3^+CD8^+细胞、CD3^+CD56^+细胞)以及调节性T细胞(CD4^+CD25^+细胞)的比率;CCK8法检测扩增后的免疫杀伤细胞对HeLa细胞的杀伤力,PCR方法检测扩增后淋巴细胞部分功能相关基因的表达。结果吸烟者外周血淋巴细胞增殖能力减弱,且免疫杀伤细胞所占比例低,调节性T细胞所占比例高;吸烟者细胞免疫杀瘤细胞的杀伤力明显低于不吸烟对照组,吸烟组淋巴细胞表达的TNF-α、颗粒酶、穿孔素和IFN-γ等均有不同程度降低,其中颗粒酶和颗粒溶解素下调较为明显;但吸烟组TGF-β1的表达量显著上调,约为对照组的7倍。结论吸烟导致扩增后的外周血淋巴细胞中免疫杀伤细胞所占比例减少,调节性T细胞比例增加,吸烟组TGF-β1的表达增加进一步抑制了免疫杀伤细胞的活化和增殖。

重组链激酶不同给药途径在猪急性脑栓塞模型中溶栓作用的实验研究

目的 比较重组链激酶rSK不同给药途径治疗幼猪急性脑栓塞的疗效。 方法 颈内动脉注入体外血栓，建立幼猪急性脑栓塞动物模型；4h后自颈部动脉导管或腹壁静脉应用rSK剂量1万、3万、5万IU/kg；对照组用安慰剂。治疗结束后30min、60min、90min行脑血管造影。 结果 同一剂量动脉给药组血管再通率高于静脉给药组，但两组之间差异无统计学意义。 结论 颈内动脉或周围静脉应用rSK均能安全、有效溶解猪脑血栓。