质疑精神的培养——以肝为例

质疑精神是一切创新的基础[1]。在医学高等教育中,如何培养学生的质疑精神是高校教师需要思考的问题。目前,国内外针对高校医学生质疑精神培养的探索鲜有报道。医学生质疑意识薄弱可能是质疑精神培养的主要障碍。质疑意识强,即便小学生也可发现大问题[2];若无质疑意识,即便个人学术再渊博,可能也很难发掘问题。笔者所教课程为组织学与胚胎学,该课程是医学的基础课,授课对象为大一学生。大一学生刚从高中毕业,高中时以书本检验答题对错和学习效果的思想,在他们的脑海中根深蒂固。

高校创新创业教育的问题及对策

文章首先阐述了高校开展创新创业教育的意义和必要性,然后分析了高校创新创业教育存在的问题,最后提出了高校创新创业教育对策,包括更新创新创业教育理念、优化创新创业课程体系、构建创新创业教育教师队伍等。

教育信息化背景下组织学胚胎学全英文课程“三三三制”混合教学模式初探

近年来,随着我国的对外教育交流不断深化,医学专业留学生的规模目前在来华留学生中位居第二[1-2].2001年本校设立了留学生全英文班,组织学胚胎学也成为我校最早进行全英文授课的课程之一.在教学过程中,我们发现传统的教学多是老师"满堂灌、全堂点",难以调动学生的学习热情,因此改革势在必行.2016年以来,我们尝试推行"线上线下"混合式教学,课程的79学时被分解为"三三三制"教学模式:即理论授课、实践教学和学生自学的时间各占约三分之一,该模式在我校2015、2016和2017三个年级的临床医学专业开展应用,参与留学生达350多名,取得一定成效.

组织学与胚胎学国家精品课程的转型升级与共享资源建设探究

2003年，教育部启动本科“质量工程”项目，截至2010年，共建成3835门国家精品课程。虽然精品课程对于推动教学改革和课程建设起着重要的引领示范作用，但也逐渐暴露出一些问题。

“导学提纲+读书笔记”应用于课程教学初探

针对大学一年级医学生的特点，本教研室对组织学与胚胎学采取“纵向引导、横向整合”的方式，改变了传统的按章逐节讲授课程，而是按照知识点的趋同性将教学内容重新整合。

新画图教学法在组织学实验课中的应用

组织学是医学生入校后最早接触的医学基础课程之一,是后续病理学和生理学学习的基础。组织学分为理论课和实验课两部分。“理论课都懂,实验课就懵”是大一新生对组织学实验课最深刻的印象。究其原因,是由于课程学习的是显微镜下人体的微细结构,具有抽象性。如何将课本中展示的立体模式图和器官的平面切片图对应起来,需要学习者有较好的空间想象能力——真实器官的立体结构远比书本中立体模式图要复杂,组织切片中同样结构在不同切法下形态各异。因此,如何帮助初学者建立平面和立体的关系,是组织学实验课教学的一大难点。为此,笔者教研室开展了与传统画图教学不同的新画图教学法,以帮助学生在早期学习时更好理解立体结构在不同切面下的不同形态。

癌-睾丸抗原OY-TES-1致敏的树突状细胞体外抗胶质瘤的免疫效应

目的研究负载癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OY-TES-1的树突状细胞(dendritic cell,DC)体外抗胶质瘤的细胞免疫效应。方法细胞因子联合诱导HLA-A2+健康人外周血单核细胞为DC,采用OY-TES-1重组蛋白致敏DC,流式细胞术检测成熟DC表型分子;进而使DC诱导同体T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),CCK8检测T细胞增殖情况,ELISPOT检测IFN-γ含量,乳酸脱氢酶释放法检测CTL对胶质瘤细胞U251和A172的杀伤作用。结果负载OY-TES-1的DC低表达CD14,而高表达CD1a、CD83和CD80表型分子,能明显促进CD8+T细胞的增殖及其IFN-γ的分泌(P<0.05);而OY-TES-1特异性CTL在效靶比为50∶1时对HLA-A2+和OY-TES-1+U251、HLA-A2-和OY-TES-1+A172均有明显杀伤作用(均P<0.05),但其对U251的杀伤作用更强。结论体外用OY-TES-1重组蛋白致敏的DC可诱导特异性抗胶质瘤免疫应答,提示OY-TES-1可能成为胶质瘤免疫治疗的靶点。

胶质瘤MAGE-D4剪接变体ab和c的表达及临床意义

目的检测肿瘤相关抗原MAGE-D4剪接变体ab和c在胶质瘤和非肿瘤脑组织中的表达情况,分析其临床意义,探讨MAGE-D4选择性剪接与胶质瘤的相关性。方法采用RT-PCR技术进行检测,首先以Primerpremier5.0和Oligo6.0软件设计和评价引物,对引物进行特异性检测和扩增产物测序验证,然后检测89例不同病理类型胶质瘤组织和24例非肿瘤脑组织中MAGE-D4ab和MAGE-D4c的表达,并结合胶质瘤患者临床病理参数进行统计分析。结果所设计的引物可特异性扩增MAGE-D4ab和MAGE-D4c。所检测的组织中,MAGE-D4ab的表达普遍较MAGE-D4c丰富,其中胶质瘤组织中MAGE-D4ab的表达率明显高于非肿瘤脑组织(P<0.05),而MAGE-D4c的表达率与非肿瘤脑组织比较差异无统计学意义(P>0.05);胶质瘤组织和非肿瘤脑组织中均存在MAGE-D4ab-c和MAGE-D4ab+c两种表达形式,其中胶质瘤中MAGE-D4ab-c的表达率高于非肿瘤脑组织(P<0.05),而MAGE-D4ab+c的表达率则与非肿瘤脑组织差异无统计学意义(P>0.05);此外,MAGE-D4ab、MAGE-D4c、MAGE-D4ab-c和MAGE-D4ab+c的表达率均与性别、年龄、肿瘤直径和WHO分级等胶质瘤临床资料无显著性关联。结论MAGE-D4ab及MAGE-D4ab-c形式在胶质瘤中异常表达,可能与胶质瘤的发生相关。

张卫红主任医师疏肝化痰法治疗浆细胞性乳腺炎经验初探

近年来浆细胞性乳腺炎在中青年女性中的发病率逐年攀升,该病病程长,临床症状复杂多样,因对疾病缺乏统一的认识和诊疗方案,临床上极易漏诊和误诊。张卫红主任医师认为浆细胞乳腺炎以肝郁脾虚、痰毒阻络为其必然的病机特点,提出“治宗肝脾”的观点,提倡分期论治、内外结合,并将疏肝化痰贯穿治疗始终,临床疗效甚佳。现举验案1则。

“组织学与胚胎学”课程全方位思政教学改革与实践

“立德树人”是医学教育的根本任务,“组织学与胚胎学”课程教学中存在教书和育人严重脱节的现象,本教学团队依托“黄大年式教师团队”,在国家教学名师引领下进行了课程思政教学改革,结合学科发展史、时事热点、组织学知识、胚胎学知识、临床案例、学科前沿、校史社情以及身边事迹典范深入挖掘蕴藏在课程中的思政元素,建立思政素材库;并重塑课程体系,依托信息化技术,将思政教育呈现在课堂,拓展于课外,实行多元化评价,全方位促进“德医交融”,取得了良好的教学效果。

双语教学对学生《组织学与胚胎学》专业知识学习的影响

目的探讨双语教学对学生《组织学与胚胎学》专业知识学习的影响，为今后深化双语教学改革提供参考依据。方法以2009-2013级七年制临床医学专业学生为研究对象，分别对同年级双语班和普通班学生的《组织学与胚胎学》期考成绩进行对比分析。结果同年级双语班和普通班学生成绩均无明显统计学差异（P〉0.05）。结论我校所开展的双语教学对学生《组织学与胚胎学》专业知识的学习并没有明显影响。

聚对苯二甲酸丙二酯的酯化聚合工艺技术探讨

聚对苯二甲酸丙二酯，英文缩写PTT纤维是一种新型聚酯纤维，它集涤纶和锦纶的优点于一体，是目前新型纤维材料领域的热门课题之一。本课题对PTT的酯化和聚合工艺进行了研究。PTT在酯化时所需反应温度高于PET，而其缩聚温度低于PET。

胶质瘤中LINC01152的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA LINC01152在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 应用LncSpA V2.0和GEPIA数据库分析LINC01152在胶质瘤中的表达;qRT-PCR检测10例正常脑组织、40例胶质瘤组织和5株胶质瘤细胞系中LINC01152 mRNA的表达。使用DAVID数据库对LINC01152共表达基因进行GO和KEGG富集分析,预测其功能。通过AnnoLnc2、TargetScan、LinkedOmics和miRDB数据库预测并筛选LINC01152相关miRNA和靶基因,构建ceRNA调控网络。利用小干扰RNA在胶质瘤细胞系下调LINC01152表达,通过CCK-8法测试、划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验、流式细胞术、Western blot等检测LINC01152对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等功能的影响。结果 数据库分析显示,与其他肿瘤类型相比,LINC01152在胶质母细胞瘤(GBM)和低级别胶质瘤(LGG)中高表达,且高于正常脑组织。qRT-PCR结果显示LINC01152 mRNA在胶质瘤组织中的表达显著高于正常脑组织(P<0.01)。LINC01152的表达与Ki-67相关(P<0.05),但与胶质瘤患者的性别、年龄、肿瘤大小、P53蛋白、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和WHO分级等临床参数无关。共表达基因的功能富集分析表明,LINC01152主要参与细胞黏附和突触信号传导等生物学过程。根据预测的靶基因构建LINC01152-miRNA-mRNA调控网络。LINC01152表达下调后,A172和U87细胞的增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.01),而凋亡细胞数量增加(P<0.001)。结论 LINC01152在胶质瘤中高表达,通过促进胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和抑制凋亡等途径促进胶质瘤的恶性生物学行为。

金属硫蛋白-1和CT23在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨金属硫蛋白-1(MT-1)、癌-睾丸抗原CT23在肝癌细胞、原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及其与临床资料的关系和意义,了解MT-1和CT23在HCC发生、发展中的联系,为进一步研究HCC的发生、发展机制和相应治疗措施提供实验依据。方法运用RNA干扰、表达谱芯片、荧光定量PCR、免疫组化SP法检测CT23与MT-1在肝癌细胞、HCC组织及其癌旁组织中的表达;通过t检验分析癌组织及癌旁组织中MT-1、CT23的表达与患者性别、年龄、甲胎蛋白(AFP)、乙肝表面抗原(HBsAg)、肿瘤大小、肿瘤数目、有无转移、Edmondson分级、肝硬化的关系。结果 (1)MT-1和CT23的阳性信号主要定位于细胞质,镜下呈棕黄色或棕褐色团块或颗粒状。(2)MT-1、CT23在HCC组织中的表达均较癌旁组织低(P<0.05)。(3)在HCC组织中,肿瘤Edmondson分级低、单发者MT-1表达高于肿瘤Edmondson分级高、多发者(P<0.05),MT-1表达与年龄、性别、HBsAg、肿瘤大小、AFP、肝硬化、肝脂肪变性、有无转移无明显关系(P>0.05);MT-1在癌旁组织中的表达与临床资料无明显关系(P>0.05)。(4)CT23的表达在HCC组织及癌旁组织中与临床资料无明显关系(P>0.05)。(5)肝癌细胞中CT23下调引起MT-1 mRNA上调,HCC组织及癌旁组织中,MT-1与CT23之间的蛋白表达无明显关系(P>0.05)。结论 MT-1在HCC组织中表达较癌旁组织中降低,且在Edmondson分级较高、肿瘤多发者中MT-1表达较低,可见MT-1与HCC的发生、发展密切相关,其机制可能与肝组织中MT-1下调后金属解毒能力下降、自由基堆积导致细胞进一步恶化相关。CT23下调后细胞中MT-1表达上升,提示CT23下调后肝癌细胞恶性行为的下调可能通过MT-1表达上调来实现,但相关性和具体机制尚不明确,有待进一步研究。

肝癌相关抗原Cdc25C过表达树突状细胞疫苗的制备

目的制备肝癌相关抗原Cdc25C过表达树突状细胞疫苗,为研究Cdc25C在肝癌中的作用及机制奠定基础。方法构建Cdc25C过表达慢病毒载体,体外感染DC2.4细胞。同时以未感染的DC2.4细胞为空白对照,以感染慢病毒LV5空载体的DC2.4细胞为阴性对照。分别用倒置荧光显微镜观察各组DC2.4细胞绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR技术检测各组DC2.4细胞Cdc25C mRNA的表达,用Western blot技术检测各组DC2.4细胞Cdc25C蛋白的表达,用流式细胞术检测各组DC2.4细胞表面分子的表达。结果获得滴度为6×108TU/m L的Cdc25C慢病毒载体(LV5/Cdc25C),感染DC2.4细胞后,LV5/Cdc25C DC2.4组可见明显绿色荧光蛋白表达。RT-PCR和Western blot结果显示LV5/Cdc25C DC2.4组Cdc25C mRNA和蛋白的表达水平明显升高。经流式细胞术分析,感染LV5或LV5/Cdc25C后DC2.4细胞表面因子CD11C和CD54的表达均升高,以LV/Cdc25C DC2.4组最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备肝癌相关抗原Cdc25C过表达树突状细胞疫苗。

人脑胶质瘤中MAGE-D4和CANX mRNA的表达及其相关性分析

目的探讨人脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和钙联蛋白(CANX)mRNA的表达水平,分析其相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库数据[胶质母细胞瘤(GBM)组织163例,低级别胶质瘤(LGG)组织518例,正常脑组织207例]分析MAGE-D4和CANX mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达情况,并通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法在临床样本(胶质瘤62例,正常脑组织11例)中进一步验证。分析MAGE-D4和CANX mRNA表达水平与胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默胶质瘤细胞株SF126和U251中MAGE-D4的表达,探讨MAGE-D4与CANX表达的相关性。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CANX mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,胶质瘤组织中MAGE-D4和CANX mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CANX mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(vimentin)的表达水平均无关联性(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CANX mRNA表达水平呈正相关(r=0.916,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,SF126和U251细胞CANX mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中MAGE-D4、CANX高表达,且二者表达水平呈正相关,提示其可能共同参与了胶质瘤的发生、发展,具有成为胶质瘤免疫治疗靶点的应用前景。

人肝细胞癌中OY-TES-1和PKM2的表达及调控关系初探

目的:探讨癌-睾丸抗原OY-TES-1和丙酮酸激酶M2型(PKM2)在人肝细胞癌(HCC)中的表达,并分析OY-TES-1对PKM2表达的影响。方法:利用LinkedOmics数据库筛选OY-TES-1表达正相关基因集;使用DAVID数据库对OY-TES-1进行功能富集分析,了解HCC中OY-TES-1潜在的生物学功能,寻找功能相关基因;通过GEPIA数据库分析和实时荧光定量PCR(qPCR)实验检测,探讨OY-TES-1和功能相关基因在HCC中的表达及临床意义;干扰HCC细胞株中OY-TES-1的表达,qPCR和Western blotting检测OY-TES-1功能相关基因的表达变化。结果:LinkedOmics数据库筛选获得1001个与OY-TES-1表达正相关的基因集;功能富集结果显示,OY-TES-1可能通过PKM2参与HCC细胞多糖合成、脂代谢、碳水化合物代谢等信号通路。GEPIA数据库分析显示,HCC组织中OY-TES-1和PKM2的表达显著高于正常肝组织,两者表达呈正相关关系(r=0.3;P<0.001);qRT-PCR证实OY-TES-1(癌组织:0.58±0.95 vs.癌旁组织:0.36±0.61,P<0.05)和PKM2(癌组织:0.14±0.17 vs.癌旁组织:0.08±0.14,P<0.05)在HCC组织中均为高表达,两者的表达呈正相关关系(r=0.482,P<0.001);尚未发现OY-TES-1和PKM2的表达与HCC患者临床参数相关。在HepG2和BEL-7404细胞株中干扰OY-TES-1表达,PKM2的mRNA和蛋白表达随之明显下调。结论:OY-TES-1和PKM2均高表达于HCC,且两者具有较强的表达相关性;HCC中OY-TES-1能够影响PKM2的表达。

乳腺癌中PBK/TOPK mRNA表达的临床意义及功能预测

目的通过生物信息学分析PDZ结合激酶/T-淋巴因子激活的杀伤细胞来源的蛋白激酶(PBK/TOPK)在乳腺癌(BRCA)中的表达及临床意义,并预测其潜在的分子通路和生物学功能。方法挖掘Oncomine数据库分析PBK/TOPK信使核糖核酸(mRNA)在不同癌症中的表达情况。下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库BRCA和正常乳腺组织的RNA测序数据和临床信息,分析PBK/TOPK mRNA表达与临床特征的相关性。应用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析。通过筛选PBK/TOPK相关基因,并进行功能富集分析,预测PBK/TOPK在BRCA中的潜在分子通路和生物学功能。结果PBK/TOPK基因在BRCA组织中的表达显著高于正常乳腺组织(P<0.05),并与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、三阴性乳腺癌(TNBC)和绝经状态存在关联性(P<0.05)。生存分析结果显示,PBK/TOPK基因高表达提示BRCA预后不良(P<0.05)。功能富集分析显示PBK/TOPK相似基因主要涉及BRCA细胞分裂、细胞周期调节和微管细胞骨架形成等生物功能,参与BRCA细胞周期等信号通路。结论PBK/TOPK mRNA在BRCA组织中高表达,与BRCA患者预后不良密切相关,可能是BRCA潜在的生物标志物和治疗靶标。

OY-TES-1调控TGFβ影响肝癌细胞周期的机制研究

肝癌是常见肿瘤之一,近年来免疫疗法正日益彰显良好的应用前景。前期研究发现,癌-睾丸抗原OY-TES-1在肝癌中高表达,在除睾丸外的正常组织几乎不表达,沉默其表达可抑制肝癌细胞周期进程及cyclin E的表达,有望成为肝癌免疫治疗的靶标。生物信息学分析显示,OY-TES-1与TGFβ享有共同的靶标miR-326。为探讨OY-TES-1/miRNA-326/TGFβ调控轴对肝癌细胞周期的影响,本实验首先通过qRT-PCR检测OY-TES-1、miR-326、TGFβ在肝癌组织中的表达情况;筛选OY-TES-1高/低表达的肝癌细胞株,设计合成OY-TES-1特异性siRNA和pcDNA3.1表达载体并转染细胞;体外转染miR-326模拟物/抑制剂后,经双荧光素酶实验检测OY-TES-1和TGFβ的荧光活性变化;Westernblot检测细胞周期蛋白的变化;流式细胞术行细胞周期检测。

肾嫌色细胞癌ceRNA调控网络的构建与分析

目的构建肾嫌色细胞癌(CRCC)的内源竞争性RNA(ceRNA)调控网络,筛选出与CRCC预后相关的信使RNA(mRNA)、长非编码RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA),为CRCC的诊断和预后提供理论依据。方法提取TCGA数据库中CRCC样本(65例)和正常肾样本(24例)的转录组数据,以错误发现率(FDR)<0.05,差异倍数的对数绝对值(log2|FC|)>2为条件筛选差异表达(DE)的lncRNA、miRNA和mRNA,据此构建ceRNA调控网络。应用Kaplan-Meier法探讨与CRCC患者预后相关的因子,据此进一步构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,并进行GO与KEGG富集分析。结果共筛选出3679个DElncRNA,297个DEmiRNA和5914个DEmRNA。mRNA下调的ceRNA网络包含DEmiRNA 95个、DEmRNA 268个、DElncRNA 737个;mRNA上调的ceRNA网络包含DEmiRNA 85个、DEmRNA 234个、DElncRNA 924个。Kaplan-Meier分析筛选出3个DEmRNA(DEPDC1、SLC7A11和E2F7)和1个DEmiRNA(miR-26b-5p)与CRCC预后存在关联(P<0.05)。以DEPDC1、SLC7A11和E2F7构建的PPI网络中共含有8个mRNA(TOP2A、DEPDC1、SLC3A2、E2F8、SLC7A11、E2F1、TP53和E2F7)参与蛋白互作,GO和KEGG富集分析显示,这些互作蛋白功能主要富集于DNA损伤反应、p53介导的细胞组织与启动子特异结合、铁死亡,以及肿癌疾病相关信号通路。结论该研究通过构建CRCC的ceRNA调控网络筛选出与其预后相关的关键RNAs,为CRCC的诊断和治疗提供了理论依据。