RNAi抑制HIF-1α基因逆转卵巢癌多药耐药的实验研究

目的探讨靶向缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)载体表达的小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性。方法构建靶向HIF-1α短发夹状siRNA基因表达载体,脂质体介导转染人卵巢癌COC1/DDP细胞。Western blot法检测HIF-1α蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;实时定量PCR(real time PCR)检测HIF-1α和多耐药基因1(mdr-1)mRNA的表达;MTT法检测COC1/DDP细胞对化疗药物顺铂的抗性。结果转染HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体的COC1/DDP细胞,低氧条件下HIF-1α蛋白及mRNA表达水平下降,同时mdr-1基因的mRNA及其编码的P-gp蛋白水平也明显下降,对顺铂的药物敏感性增加。结论HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体可有效地抑制卵巢癌COC1/DDP细胞HIF-1α和mdr-1基因的表达,逆转卵巢癌细胞的多药耐药。

环境污染物邻苯二甲酸酯类对睾丸间质细胞的雄性生殖毒性作用

邻苯二甲酸酯类(phthalate acid esters,PAE)已经成为学术界普遍关注的一类重要的环境有机污染物,其毒性作用的主要靶器官是雄性生殖系统,睾丸间质细胞是PAE生殖毒性的靶细胞之一。文中就PAE对睾丸间质细胞的毒性作用作一综述,为预防PAE的生殖毒性提供理论依据。

邻苯二甲酸酯类化合物对睾丸间质细胞毒性作用的研究进展

目前在我国江河、湖泊、饮用水和蔬菜等中均已经检测到邻苯二甲酸酯类（phthalic acid esters,PAEs）,我国环境中PAEs类的污染问题已越来越多地受到人们的关注[1]。PAEs是一类人工合成的脂溶性有机物。PAEs对人类的健康特别是男性生殖系统的健康具有潜在的威胁，越来越多的研究表明PAEs可损害雄性的生育力，其中睾丸间质细胞是其作用的靶细胞之一。

沉默STAT3基因对人卵巢癌化疗敏感性的影响

背景与目的:信号转导因子与转录激活因子3(STAT3)是近期研究较多的一种基因,在多种实体瘤如乳腺癌、胃癌和卵巢癌等中均有异常表达和活性增强。本研究旨在探讨STAT3短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体对卵巢癌细胞SKOV3化疗敏感性的作用。方法:构建STAT3基因shRNA真核表达质粒,并转染卵巢癌SKOV3细胞。试验分为SKOV3、SKOV3NS和SKOV3siRNA3组,以RT-PCR及免疫蛋白印迹法分别检测各组STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平。细胞经20μmol/L顺铂(DDP)作用后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率。结果:MTT法检测肿瘤细胞的生长抑制率,SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞抑制率分别为0.46±0.13、0.44±0.11和0.71±0.12。与SKOV3组、SKOV3NS组相比,SKOV3siRNA组细胞抑制率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞凋亡率分别为18±4、17±3和35±4。与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3mRNA检测结果分别为0.50±0.08、0.48±0.07和0.31±0.09。与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组细胞比较,STAT3mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白检测结果分别为0.54±0.09、0.56±0.08和0.32±0.09。与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针对STAT3基因的shRNA真核表达载体能有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞STAT3基因表达,增强其对化疗药物DDP的敏感性。

邻苯二甲酸二乙基己酯对体外培养大鼠睾丸支持细胞氧化应激的影响

目的对体外培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)染毒,探讨DEHP对体外培养大鼠睾丸支持细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,不同浓度的DE-HP(10、50、100 nmol·L-1)作用于支持细胞24 h,应用流式细胞术检测支持细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS),应用紫外分光光度计测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,DEHP各剂量组大鼠睾丸支持细胞MDA含量和ROS增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),且呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活细胞氧化应激而诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,进而影响支持细胞功能。

邻苯二甲酸二乙基己酯在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡Caspase通路的影响

目的通过对原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexylphthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP在体外对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9基因表达以及细胞凋亡的影响。方法分离和培养原代未成熟大鼠的卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP(0、10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测颗粒细胞的Caspase-3和Caspase-9基因mRNA表达水平,Weastern blot检测颗粒细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。结果与对照组相比,各DEHP处理组卵巢颗粒细胞Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05),Caspase-9基因mRNA和蛋白表达水平也降低(P<0.05),同时细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过激活Caspase通路而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响(英文)

目的:探讨应用RNA i技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivin mRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SKOV3-siRNA组细胞survivin mRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低(P<0.05)。结论:下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。

RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨应用RNAi技术沉默信号转导与激活因子3(Signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)基因对人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法:根据siRNA(Small interference RNAs,iRNA)设计原则,结合pSilencer2.1-U6-neo质粒特点,针对STAT3基因设计并合成2条寡聚DNA片段,退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒,应用脂质体将重组质粒转染SKOV3细胞。通过RT-PCR及Western blot检测STAT3基因不同水平的表达,采用MTT实验、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡的变化。结果:目的siRNA实验组细胞STAT3蛋白及mRNA表达水平均明显下降,细胞增殖能力显著降低,而细胞凋亡率则显著升高。结论:应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低卵巢癌SKOV3细胞STAT3的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡。

抑制STAT3基因表达对宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响

目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌SiHa细胞转录活化因子3(signal transduction and activators of transcription3,STAT3)基因的表达,观察细胞放射敏感性的变化。方法构建pSTAT3-siRNA真核表达质粒并转染宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达。采用6MV直线加速器分别以不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X线照射细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞放射敏感性变化。结果与对照组细胞相比,pSTAT3-siRNA转染组细胞STAT3基因mRNA和蛋白水平表达均下降(P<0.05)。细胞经X线照射后,与对照组比较,pSTAT3-siRNA转染组细胞凋亡率升高,SF2值降低(P<0.05)。结论 pSTAT3-siRNA真核表达载体能够抑制宫颈癌SiHa细胞STAT3基因表达,增强其对放射线损伤的敏感性。

DEHP体外影响大鼠睾丸间质细胞Bax和Bcl-2基因表达的实验研究

目的通过对原代培养的大鼠睾丸间质细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞Bax和Bcl-2基因表达及凋亡的影响。方法体外分离和原代培养未成熟大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)染毒24h。荧光定量PCR法检测间质细胞Bax和Bcl-2基因mRNA表达,Weastern blot检测间质细胞Bax和Bcl-2蛋白表达,流式细胞术检测间质细胞凋亡率。结果与对照组相比,DEHP各组睾丸间质细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),Bax基因mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论 DEHP可通过抑制Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡,进而影响间质细胞功能。

抑制STAT3基因表达对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制人宫颈癌HeLa细胞信号转导及转录活化因子3(STAT3)基因的表达,观察其对HeLa细胞定植和侵袭能力的影响。方法针对STAT3基因设计并合成编码小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸,克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,从而构建针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒,用脂质体法将其转染入人宫颈癌HeLa细胞。利用RT-PCR技术和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平;通过软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力。结果针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒成功转染人宫颈癌HeLa细胞;转染成功的HeLa细胞的STAT3基因mRNA及蛋白表达均下降;HeLa细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数均明显减少。结论针对STAT3基因的短发夹状siRNA真核表达质粒通过下调STAT3基因表达,抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力。

DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)体外对大鼠睾丸支持细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。方法:体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达,Weastern blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,DEHP各组支持细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),Bax基因mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论:DEHP可通过抑制Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,进而影响支持细胞功能。

河南油田稠油热采防返吐掺水水嘴应用效果分析

针对河南油田稠油热采掺水系统压力不平稳、单井掺水量波动范围大、波动频繁的技术难题,通过在单井掺水管线上安装防返吐掺水水嘴,对油井掺水最佳掺水量进行研究,对不同出油温度、产液量油井的应用效果进行了分析,研究结果为该技术的推广应用提供依据。

临床分期辨证治疗子宫腺肌症的思路与方法

子宫腺肌症系常见病、疑难病。在病因病机方面,绝大多数学者认为瘀血为基本特征,故活血化瘀为治疗大法。作者认为,子宫腺肌症之瘀血与普通疾病的瘀血不同,其特征是具有活性的瘀血,其治疗方法,应严格依据月经的不同时间段分别用药,在经前期养血消癥、经期调经止痛、经后期除滞化瘀,治疗方法灵活应变,临床效果显著,且可避免过用活血化瘀药物带来的不良反应。

电机防雨淋接线盒的研发

新型电机防雨淋接线盒,包括可围成接线腔的底座和封盖,底座与封盖之间具有用于与对方配合的贴合面,两个贴合面中的一个上设有槽、另一个上设有与槽密封插配配合的凸棱,槽和凸棱围设于接线腔的外周。电机防雨淋接线盒具备良好的防水性能,可充分阻止雨水侵入接线盒内部,有效避免漏电、短路及电气火险等情况的出现,增强电机本质安全水平,保障电机安全平稳运行。

可调位电机安装座的研制与应用

可调位电机安装座,包括固定底座和用于固定安装电机的移动座。分析目前电机底座存在的缺陷,提出可调位的电机安装座的研制方案,并说明实用新型可调位电机安装座的结构和实施步骤。本实用新型操作方便省力,丝杠不容易发生弯曲变形,在整体结构上对装配的位置精度要求也大大降低,因此本实用新型在使用中不容易发生卡滞现象,从而能够顺利地实现电机调位和皮带松紧度的调整。

肥胖孕妇外周血及脐血肥胖抑制素与母儿体质指标的相关性

目的:探讨肥胖孕妇外周血与脐血肥胖抑制素(Obestatin)浓度与母儿体质指标的关系。方法:选取中国人民武装警察部队后勤学院附属医院2013年8月—2014年9月分娩的肥胖孕妇30例作为肥胖组,取同期正常体质量孕妇35例作为对照组,于孕晚期抽取外周血,于分娩时抽取脐静脉血,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定Obestatin浓度。同时记录母亲体质量,记录新生儿出生体质量,LANGE皮脂厚度测量仪测定新生儿肩胛下、大腿、髂上、肱三头肌及腹壁皮褶厚度。结果:对照组外周血Obestatin水平比肥胖组高,差异有统计学意义(t=16.707,P=0.000);肥胖组孕妇外周血Obestatin浓度与BMI呈负相关(r=-0.898,P=0.000)。肥胖组新生儿脐血Obestatin浓度与体质量、腹壁皮褶厚度呈负相关(r=-0.789,P=0.000;r=-0.840,P=0.018)。结论:肥胖孕妇外周血Obestatin浓度与母体产前BMI有关;脐血Obestatin浓度与新生儿体质指标有关。

河南油田稠油集油站掺水系统防垢除垢技术研究

针对河南稠油油田集油站掺水系统结垢严重的技术难题，通过对结垢成因和成垢机理的研究，搞清了结垢成分及形成过程及其各因素对成垢的影响规律，探讨了防垢除垢技术对策，筛选出了一组性能比较优秀的防垢剂及电子防垢设备。

延长压滤机滤布使用周期的研究与应用

压滤机上的滤布是过滤水质的重要部分,材质要求较高,当水质不达标时,由于查不出哪块滤板上的滤布出现漏点,需全部对其更换,造成极大的时间浪费和材料浪费。通过完善压滤机操作规程,设计改造压滤机滤板和加强滤布质量监管等措施,缩短找滤布漏点时间,实现了降本增效、减轻劳动强度的目的。

以直径2cm作为临界标准行保留生育功能治疗早期宫颈癌局部肿瘤疗效的Meta分析

目的:探讨Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌局部肿瘤直径>2cm行保留生育功能手术治疗的安全性。方法:计算机检索Pubmed、Medline、CBM、VIP及CNKI等数据库,收集近10年Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌局部肿瘤大小(以2cm为界)行保留生育功能治疗的对照试验,筛选出符合纳入标准的文献,对其进行质量评价,利用RevMan5.0软件对研究结果进行Meta分析。结果:最终纳入11篇文献,共1052例患者。Meta分析结果显示,Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌局部肿瘤直径>2cm行保留生育功能治疗的复发率显著高于局部肿瘤<2cm者(合并OR=0.07,95%CI为0.04～0.13,P<0.00001)。结论:肿瘤直径>2cm是早期宫颈癌保守治疗复发的高危因素,不建议此类患者行保留生育功能手术。若患者有强烈生育要求可行保留生育功能治疗,术后应加强随访,但不能代替传统的根治性子宫切除术(RH)和盆腔淋巴结清扫。