EGFR酪氨酸激酶抑制剂HS-10296诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬和凋亡

目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKT)HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及潜在分子机制。方法HS-10296处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞存活率;集落克隆法检测HS-10296对细胞的增殖抑制作用;JC-1与流式细胞术检测细胞凋亡情况;电镜观察细胞超微结构;自噬抑制剂氯喹预处理后分为不含药物的对照组、单用氯喹组、单用HS-10296(4、6μmol/L)组和两者联合组,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞对HS-10296的敏感性变化;Western blot分析HS-10296对MDA-MB-231细胞凋亡和自噬相关蛋白以及EGFR信号通路的影响。结果CCK-8和集落克隆结果显示,HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用(P<0.01),24、48、72 h的IC50值分别为8.393、2.777、2.016μmol/L。JC-1与流式细胞术显示HS-10296可诱导细胞发生凋亡,8μmol/L HS-10296处理后,细胞凋亡率为(21.63±2.97)%。电镜观察到经HS-10296处理后,细胞内出现自噬囊泡,使用氯喹预处理细胞后,观察到抑制自噬可增强HS-10296诱导的细胞死亡。Western blot显示经HS-10296处理后凋亡相关蛋白Caspase-3出现活化形式,并对其底物PARP进行剪切。自噬相关蛋白轻链3B表达高于对照组(P<0.01),同时,HS-10296可抑制细胞内EGFR及AKT蛋白的磷酸化。结论HS-10296可通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路,抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞发生自噬和凋亡。

阿美替尼对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其病死率排在众多恶性肿瘤之首。非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)患者的病死率较高,总体5年存活率<15%。当NSCLC发生局部侵袭时,患者5年生存率仅为20%,而当发生远处转移时5年生存率更是低至4%。阿美替尼(almonertinib)是我国自主研发并拥有自主知识产权的创新药,其作为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂主要用于EGFR T790M突变的局部晚期或转移性NSCLC患者。本研究旨在探讨阿美替尼对NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养NSCLC H1975、PC-9细胞,采用CCK-8法、细胞凋亡实验、Transwell实验检测阿美替尼对H1975、PC-9细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响;蛋白质印迹法检测侵袭迁移相关蛋白质的表达。结果:CCK-8实验结果显示阿美替尼呈时间和剂量依赖性抑制H1975、PC-9细胞增殖,PC-9细胞24、48 h的IC_(50)值分别为5.422、1.302μmol/L,H1975细胞24、48 h的IC_(50)值分别为4.803、2.094μmol/L。细胞凋亡实验结果显示1、2、4、8μmol/L阿美替尼分别处理PC-9和H1975细胞24 h时,细胞凋亡率分别为(8.82±3.22)%、(9.53±4.24)%、(13.62±3.69)%、(42.10±1.76)%和(9.81±0.90)%、(10.51±1.49)%、(15.34±3.50)%、(28.97±2.57)%。Transwell实验结果显示阿美替尼抑制H1975、PC-9细胞侵袭和迁移。蛋白质印迹法结果显示:与对照组相比,1、2、4μmol/L阿美替尼处理组PC-9和H1975细胞中MMP-9,MMP-2和Vimentin蛋白表达水平均明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。裸鼠实验结果发现:与对照组和阳性对照奥希替尼(AZD9291)组相比,阿美替尼治疗组肿瘤生长被显著抑制,裸鼠体重减轻,肿瘤体积显著减小,肿瘤质量也明显减轻(均P<0.05)。结论:阿美替尼能够在体内外抑制H1975、PC-9细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进H1975、PC-9细胞凋亡。其抑制侵袭的作用机制可能与抑制肿瘤细胞上皮间质转化和金属蛋白酶表达有关。

葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖及转移的抑制作用

目的 探讨葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。方法 不同浓度的BAY-876(0,0.5,1,2,4,8 μmol/L)处理RA-FLS细胞24,48,72 h,CCK-8法检测BAY-876对细胞的增殖抑制作用。ATP试剂盒检测不同浓度BAY-876(0,2,4,8 μmol/L)处理RA-FLS细胞24 h后,细胞内ATP水平的变化;Transwell法和细胞划痕实验检测不同浓度BAY-876(0,2,4,8 μmol/L)刺激下RA-FLS细胞的迁移与侵袭能力的改变;Western blot法检测细胞中MMP-2、MMP-9及AKT蛋白的表达。结果 CCK-8法实验结果表明,与对照组相比,不同浓度(0.5,1,2,4,8 μmol/L)的BAY-876作用24 h后的细胞存活率依次为(90.9 ± 2.9)%、(85.6 ± 5.4)%、(82.7 ± 7.6)%、(72.4 ± 1.9)%、(45.0 ± 0.7)%。且随着药物浓度的增加和处理时间延长,细胞存活率下降( P <0.05)。ATP水平检测结果表明,2,4,8 μmol/L BAY-876可明显降低RA-FLS细胞内的ATP水平( P <0.01)。Transwell法检测不同浓度(2,4,8 μmol/L)BAY-876处理细胞后,穿过小室膜的细胞数明显少于对照组;迁移试验表明,2,4,8 μmol/L BAY-876药物组的迁移抑制率分别为(16.2 ± 3.9)%、(60.1 ± 3.0)%和(68.2 ± 2.3)%,侵袭抑制率分别为(62.6 ± 3.3)%、(85.3 ± 3.7)%和(91.8 ± 3.2)%,与对照组比较差异均具有统计学意义( P <0.01)。Western blot结果显示,BAY-876可下调MMP-2、MMP-9和AKT的表达。结论 葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876可以显著地抑制对体外培养RA FLS细胞的增殖、迁移及侵袭能力,下调基质金属蛋白酶的表达,可以作为潜在的治疗风湿性关节炎的药物。

化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察谷氨酰胺酶1(GLS1)抑制剂化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖和凋亡的影响,并探讨相关机制。方法不同浓度的化合物968(0,5. 0,10. 0,20. 0,40. 0,80. 0μmol/L)刺激RA-FLS细胞24,48和72 h,0μmol/L组为空白对照组。MTT法检测化合物968刺激RA-FLS细胞24,48,72 h,对细胞的增殖抑制作用。倒置显微镜观察化合物968刺激细胞48 h细胞形态的变化。DAPI染色观察化合物968刺激细胞后细胞核的变化。Annexin-Ⅴ/PI双染法检测在化合物968作用下细胞的凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Mcl-1的表达。结果 MTT法结果显示,化合物968能显著抑制RA-FLS细胞的增殖(P<0.05),呈浓度和时间依赖性,作用24,48,72 h的IC50值分别为48. 45,35. 66,20. 95μmol/L。DAPI染色显示,随着药物浓度的增加,细胞核浓染,核固缩现象显著。Annexin-Ⅴ/PI双染法结果表明,化合物968可诱导RA-FLS细胞发生凋亡,20,40,80μmol/L化合物968作用48 h时,细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,化合物968可下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达,并上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论化合物968可以明显降低RA-FLS细胞的生存率并可以诱导细胞发生凋亡,其可能的机制是调节细胞凋亡相关蛋白Mcl-1和Bax的表达。

2-脱氧-D-葡萄糖联合羟基喜树碱协同诱导乳腺癌细胞凋亡的作用

目的探究2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose, 2-DG)联合羟基喜树碱(hydroxycamptothecin, HCPT)对乳腺癌细胞抗肿瘤活性的影响及其机制。方法采用2-DG(0、1.25、2.5、5、10、20 mmol/L)、HCPT(0、5、10、20、40μmol/L)单独作用以及5 mmol/L 2-DG与各浓度HCPT联合作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231与MCF-7,使用MTT法检测细胞增殖;溴化丙啶(propidium iodide,PI)检测5 mmol/L 2-DG、10μmol/L HCPT单独作用以及联合作用对MDA-MB-231细胞的凋亡作用;不同浓度2-DG作用于MDA-MB-231细胞6 h后,测定细胞内ATP含量变化;Western blot检测MDA-MB-231细胞Akt、P-Akt、Bcl-2/Bax、PARP、Caspase-8和Caspase-3蛋白的表达。结果 5 mmol/L 2-DG与HCPT联合具有协同作用,处理48 h结合指数(CI<1),合用组凋亡率均高于单用组(P<0.05),同时两者合用抑制Akt蛋白的磷酸化以及增加了Caspase-3蛋白的活化,增加了对PARP蛋白的剪切。结论 2-DG联合HCPT可以协同诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能是抑制肿瘤细胞能量生成以及抑制Akt蛋白的磷酸化和增强Caspase-3蛋白的活性。