氧自由基和一氧化氮在溃疡性结肠炎发病机制中的作用

溃疡性结肠炎是一种病因不明,主要累及直肠、乙状结肠黏膜,甚至全结肠和回肠末端黏膜的慢性非特异性炎症 ,病程迁延不愈,复发率高,可诱发癌变的产生.其发病机制目前尚未清楚,从氧自由基、一氧化氮两个方面加以综述,从而为溃疡性结肠炎的治疗提供理论依据.

急性肾衰竭动物模型的复制及实验性治疗

目的复制家免急性肾衰竭动物模型并进行实验性治疗,为本科学生综合性实验的实施奠定基础.方法通过肌肉注射50%甘油(10 mL/kg)复制家兔ARF模型,各组动物进行心电图监测,治疗组通过颈外静脉滴注碳酸氢钠溶液、呋塞米溶液及CaCl2溶液进行治疗,对比观察24 h后血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Cre)水平、pH变化、尿量及尿肌酐变化.结果 50%甘油肌肉注射可复制出明显的急性肾衰的动物模型,模型组动物血清中BUN,Cre水平明显高于阴性对照组,其尿肌酐含量较高,每分钟尿量明显减少,并出现明显的代谢性酸中毒;而治疗组动物血清BUN,Cre水平明显低于模型组,其尿肌酐含量减少,每分钟尿量明显多于模型组,酸中毒缓解.模型组动物血压偏高,但与阴性对照组无明显差别,而心电图发现T波高耸,QRS波增宽.治疗后其心电图逐渐恢复正常.结论肌肉注射50%甘油复制急性肾衰模型的方法可靠,可作为综合性实验教学方法在基础实验教学中广泛应用.

大鼠急性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性变化的实验研究

目的探讨一氧化氮和一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制。方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型,观察血清及脑组织NO含量和NOS活性的变化。结果脑缺血45min再灌注2h后血清及脑组织中NO含量及NOS活性增加,再灌注8h达高峰。结论NO及NOS在急性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用。

TNFα和SOD在溃疡性结肠炎发病中活性变化的实验探究

目的观察肿瘤坏死因子(TNFα)和超氧化物歧化酶(SOD)在溃疡性结肠炎动物模型血清及结肠粘膜中的活性变化。方法将大鼠随机分成对照组、实验组和实验治疗组,用大鼠TNFαELISA试剂盒和SOD试剂盒测定大鼠血清及肠粘膜中TNFα含量和SOD活力。结果①实验组血清及粘膜中TNFα含量明显高于对照组和实验治疗组(P<0.01);②SOD活力明显低于对照组和实验治疗组(P<0.01)。结论TNFα和氧自由基可通过多种途径介导肠粘膜的损伤。

52例Gluma脱敏剂的临床疗效观察

目的 介绍1种高效的牙本质脱敏剂。方法 对52例患有牙本质过敏症的患者，采用Gluma脱敏剂治疗。结果 该脱敏剂的总有效率达90.79%，效果显著。结论 Gluma脱敏剂可以封闭牙本质小管，凝固牙本质小管中的流动蛋白液，脱敏效果时间小。

螺纹钉固位修复后牙牙冠严重缺损效果分析

目的探讨后牙牙冠严重缺损的修复效果.方法采用根管治疗或塑化治疗后,应用自攻自断螺纹钉固位及后牙光固化树脂修复大面积缺损部.结果经过1～6 a的临床观察,修复后的临床效果良好.结论自攻自断螺纹钉及后牙光固化树脂修复后牙牙冠严重缺损,恢复牙体形态及功能的效果较好,且远期效果尤佳.

survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达

目的:探讨survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化、RT-PCR和Western印迹法检测survivin和GRIM-19在正常前列腺(NP)组织、良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示survivin在NP、BPH和PCa组织中的表达率分别为6.25%、18.18%和90.62%(P<0.01);GRIM-19的表达率分别为87.50%、81.82%和9.37%(P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,在NP和BPH组织未检测到survivinmRNA表达,而PCa组织可检测到survivinmRNA高表达。Western印迹结果证实,在NP和BPH组织中有微量的survivin蛋白表达;而PCa组织可检测到survivin蛋白高表达;在NP和BPH组织中GRIM-19蛋白表达强阳性,而PCa组织中只有微量表达,两者比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:survivin和GRIM-19的表达可能与PCa的发生密切相关。

Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P<0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。

有机硒通过下调AR及PSA抑制激素非依赖性前列腺癌细胞生长

目的:探讨甲基化硒酸(MSA)对人前列腺癌LNCaP细胞生长的抑制作用和甲基硒代半胱氨酸(MSC)延缓裸鼠去势后激素非依赖性前列腺癌的效应及相关机制。方法:将体外培养的LNCaP细胞与不同浓度的MSA共培养,磺酰罗丹明B(SRB)法检测MSA对细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR及Western blot法检测雄激素受体(AR)及前列腺特异性抗原(PSA)的表达,免疫荧光和细胞化学染色法检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)的表达。用BALB/c-nu/nu雄性裸鼠构建LNCaP细胞源性前列腺癌皮下移植瘤模型,待移植瘤直径达5 mm时,动物手术去势。将动物分为对照(mock)组(给予生理盐水200μL)和MSC组(给予5μg/gMSC),灌胃治疗,连续给药16周,监测肿瘤生长情况,ELISA法检测PSA的分泌规律,RT-PCR及Western blot检测肿瘤组织AR、PSA和STAT3的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:与mock组比较,MSA呈时间及剂量依赖性抑制LNCaP细胞生长,其抑制率可达65.32%±12.11%。MSA促进癌细胞凋亡,最大凋亡率为52.80%±2.87%,同时下调AR、PSA及STAT3的表达(P<0.05)。去势后MSC组的肿瘤复发时间延后,肿瘤生长速度减慢,同时下调前列腺癌移植瘤AR、PSA及STAT3表达(P<0.05)。结论:MSA呈时间及剂量依赖性抑制人前列腺癌LNCaP细胞生长,MSC延缓激素非依赖性前列腺癌发生,其机制与下调AR、PSA及STAT3表达有关。

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用，并分析相关机制．方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株，应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响，通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率，应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平．结果流式细胞术结果显示：与对照组比较，pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖，并使细胞周期发生改变，多数细胞抑制在G0／G1期，细胞凋亡率增加明显；通过RT—PCR电泳结果证实：pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达，同时激活caspase-3．结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖，并促进其凋亡，其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关．

携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对前列腺癌移植瘤的体内抑制作用

目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织化学染色法、RT-PCR法和TUNEL法检测携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对肿瘤抑制作用的相关机制。结果:与psi-survivin或pGRIM-19单基因治疗对照组比较,携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒减毒沙门菌组肿瘤体积明显缩小,其缩小率分别约为2.36和3.02倍;肿瘤组织内survivin mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),GRIM-19 mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-xL、Stat3、cyclin D1和c-Myc的mRNA表达明显降低(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及Ki67蛋白表达降低而caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.05),同时细胞凋亡明显。结论:携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌明显抑制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的生长,其发生机制与促进细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠缺血心肌的保护作用

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子对大鼠缺血心肌的保护作用 ,并探讨其作用机制。方法 :实验动物分为 (1)假手术组 (shamcontrolgroup) ;(2 )缺血 +生理盐水组 (ischemia +salinegroup) ;(3)缺血 +bFGF组 (ischemia+bFGFgroup)。结扎大鼠左冠状动脉复制缺血性心肌损伤模型。术前注入bFGF或生理盐水 ,于结扎后 2h、4h、8h观察大鼠缺血区心肌细胞内Bcl- 2、Bax的表达和血清SOD、心肌酶活性变化。结果 :(1)在急性心肌缺血 2h、4h时 ,缺血 +bFGF组心肌细胞Bcl- 2蛋白表达明显高于缺血 +生理盐水组 (P <0 0 1) ,而Bax蛋白表达显著低于缺血 +生理盐水组 (P <0 0 5 )。 (2 )在心肌缺血 4h ,缺血 +bFGF组血清SOD活性明显高于缺血 +生理盐水组 (P <0 0 1)。 (3)缺血 +bFGF组LDH、CK -MB、α -HBDH含量明显低于缺血 +生理盐水组 (P <0 0 5 )。结论

Survivin-siRNA真核重组质粒的构建和鉴定及其对前列腺癌DU145细胞的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响。方法构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染DU145细胞株,通过半定量RT-PCR和Western印迹检测survivinmRNA转录水平和蛋白表达的变化。结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒;两种重组质粒shRNA-sur1和-sur2均能明显抑制内源性survivin基因表达,其抑制率分别为72%±8%和77%±5%;两种质粒均能明显抑制survivin蛋白的表达,其抑制率分别为75%±8%和80%±6%。结论重组质粒shRNA-sur1和-sur2均可明显抑制DU145细胞内源survivin蛋白表达和mRNA转录,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础。

siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的:构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒,将成功构建的pGRIM-19-si-survivin质粒转染人前列腺癌DU145细胞株,应用半定量RT-PCR方法检测细胞内survivin和GRIM-19 mRNA表达水平,应用MTT法观察其对细胞增殖能力的影响。结果:(1)应用酶切及质粒测序法鉴定,证明成功构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒。(2)与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19及pGRIM-19-si-survivin组survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.05、0.62±0.08和0.35±0.05,差异显著(P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P<0.05);psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin组GRIM-19表达增强,分别为mock组的1.93±0.14、2.57±0.20和4.12±0.21(P<0.01),与pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin增强GRIM-19表达作用更明显(P<0.05)。(3)转染48 h后,与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin 3组细胞增殖率分别为58.0%±7.2%、62.1%±6.1%和50.2%±4.8%,差异显著(P<0.05);转染72 h后,与mock组比较,3组细胞增殖率分别为43.4%±4.3%、51.3%±6.7%和26.8%±7.1%,差异明显(P<0.05,P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-survivin和GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin;该质粒抑制survivin表达并增强GRIM-19表达,对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。

润肺口服液对慢性支气管炎大鼠支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8表达影响的研究

目的 研究中药复方润肺口服液对慢性支气管炎（Chronic bronchitis，CB）支气管TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8表达的影响，探讨其治疗CB的疗效机制．方法 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、慢性支气管炎组及慢性支气管炎＋润肺口服液治疗组，每组8只．大鼠慢性支气管炎模型通过熏香烟加气管内注入低剂量脂多糖制成，利用免疫组织化学观察各组大鼠支气管TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8的表达情况．结果 熏香烟加气管内低剂量脂多糖注射可复制出较理想的慢性支气管炎模型，假手术组支气管上皮内可见TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8弱阳性表达；慢性支气管炎组支气管TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8在支气管上皮细胞、支气管周围的淋巴滤泡炎性细胞和肺泡闻质细胞中可见强阳性表达；半定量图像分析显示，慢性支气管炎组TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8的表达明显强于假手术组（P〈0．05），慢性支气管炎加润肺口服液治疗组的表达则明显弱于支气管炎组（P〈0．05）．结论 润肺口服液通过下调支气管上皮细胞中TNF-α，ICAM-1蛋白及IL-8的表达，从而减轻气道炎症反应是其治疗慢性支气管炎的部分机制．

Survivin-siRNA真核重组质粒的构建及对前列腺癌DU145细胞增殖抑制作用

目的应用RNA干扰技术（RNAi），构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA，并检测其对DU145细胞增殖抑制的影响．方法构建重组质粒shRNA-sur1和shRNA-sur2并分别转染DU145细胞株，通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用及凋亡的影响．结果成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒，转染72h后，两个实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的（37．2％±5．8％）（n=3）和（43．5％±7．2％）（n=3）．流式细胞术发现：实验组细胞的G1期细胞比例明显高于对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡，与脂质体组比较，两实验组细胞的凋亡率分别为（21．70％±6．45％），（14．835±5．65％）．结论成功构建针对survivin siRNA的真核重组质粒，两种质粒体外均可抑制DU145增殖并诱导其凋亡，为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础．

地塞米松在大鼠AMI时对心肌细胞保护作用的实验研究

目的观察地塞米松在大鼠急性心肌梗死(AMI)时对心肌细胞的保护作用。方法将实验动物随机分为假手术组,生理盐水组和地塞米松组(n=8)。结扎大鼠左冠状动脉复制AMI模型。术前分别注入生理盐水及地塞米松,于结扎后2h、4h、8h处死动物,采用免疫组织化学方法检测大鼠心脏缺血区心肌细胞内Bcl-2、Bax的表达情况,免疫抑制法检测血清心肌酶水平。结果在AMI后第4h、8h,地塞米松组Bcl-2蛋白表达的阳性心肌细胞数明显高于生理盐水组(P<0.01),而Bax蛋白表达的阳性心肌细胞数明显低于生理盐水组(P<0.01)。地塞米松组在2h、4h、8h血清CK-MB、α-HBDH含量显著低于生理盐水组(P<0.05)。结论地塞米松可促进AMI时心肌细胞内Bcl-2的表达、抑制Bax的表达,减少心肌酶的漏出,对心肌细胞具有保护作用。

硒蛋氨酸对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的观察硒蛋氨酸（selenome-thionine）对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法采用MTT比色法观察1.25,2.50,5.00μmol·L^-1蛋氨酸对DU145细胞增殖活力的抑制作用;吖啶橙染色观察硒蛋氨酸诱导细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡指数;免疫细胞化学技术观察细胞内激活的caspase3的表达情况.结果经1.25,2.50,5.00μmol·L^-1蛋氨酸处理48 h后,DU145细胞生长抑制率分别为16.35%,38.10%和73.54%,3组间比较差异有显著性（P〈0.01）;随硒蛋氨酸浓度升高细胞生长抑制率增加,呈明显的剂量依赖性.吖啶橙荧光染色可见经1.25,2.50,5.00μmol·L^-1蛋氨酸处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,经1.25,2.50,5.00μmol·L^-1蛋氨酸处理48 h后,其细胞的凋亡率分别为5.34%,8.71%和13.6%,3组间比较差异有显著性（P〈0.05）,随硒蛋氨酸浓度升高细胞凋亡率升高,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色结果显示,随着硒蛋氨酸剂量增加,细胞内激活的caspase3表达上调.结论硒蛋氨酸对DU145细胞具有明显的抑制作用,其机制可能与激活的caspase途径诱导细胞凋亡有关.

17β-雌二醇对失血性休克家兔肠系膜微循环的改善作用及其机制

目的:观察17β-雌二醇对家兔失血性休克(HS)后肠系膜微循环的改善作用,并探讨相关机制。方法:32只家兔随机分为模型组、生理盐水治疗组、山莨菪碱治疗组和17β-雌二醇预防组,每组8只。采用Chaudry方法制作家兔HS模型,同时记录各组家兔肠系膜微循环变化,光学显微镜下观察各组家兔肠黏膜病理形态表现并采用Chiu氏评分法进行评估,免疫组织化学法检测各组家兔肠黏膜组织中白细胞介素6(IL-6)和CD68巨噬细胞阳性表达率,ELISA法测定各组家兔血清17β-雌二醇、乳酸和IL-6水平。结果:休克治疗2 h后,山莨菪碱治疗组和17β-雌二醇预防组家兔肠系膜血液流态优于生理盐水治疗组(P<0.05)。模型组家兔可见黏膜腺体萎缩,绒毛柱状上皮细胞浆粉染、糜烂;生理盐水治疗组家兔可见肠黏膜上皮部分脱落、断裂,绒毛结构不完整,肠腔内有较多脱落的黏膜组织;山莨菪碱治疗组家兔可见腺体轻度萎缩,绒毛轻度水肿,固有层轻度分离;17β-雌二醇预防组家兔可见肠黏膜腺体大致正常,绒毛、固有层水肿。模型组家兔Chiu氏评分高于其他3组(P<0.05),生理盐水治疗组家兔Chiu氏评分高于17β-雌二醇预防组和山莨菪碱治疗组(P<0.05)。山莨菪碱治疗组和17β-雌二醇预防组家兔肠黏膜组织中IL-6和CD68巨噬细胞阳性表达率均低于生理盐水治疗组和模型组(P<0.05)。17β-雌二醇预防组家兔血清17β-雌二醇水平明显高于其他组(P<0.05),17β-雌二醇预防组家兔血清乳酸和IL-6水平低于其他组(P<0.05),山莨菪碱治疗组和17β-雌二醇预防组家兔血清乳酸和IL-6水平均低于生理盐水治疗组(P<0.05)。结论:17β-雌二醇对HS家兔肠系膜微循环损伤具有改善作用,其机制可能是17β-雌二醇通过减少乳酸生成、降低巨噬细胞浸润和抑制炎症因子IL-6释放来实现的。

糖基化终末产物对正常大鼠肾脏的有害作用及拟黑多刺蚁醇提物抑制糖基化作用实验研究

目的研究糖基化终末产物对正常大鼠肾脏功能和结构的有害作用及拟黑多刺蚁醇提物对糖基化的抑制作用.方法用大鼠血清蛋白在体外进行糖基化反应,将反应2个月的糖基化血清蛋白（Glycation serum protein,GSP）经尾静脉注射Wistar大鼠体内,运用病理形态学、生物化学等方法重点观察了糖基化反应产物对正常大鼠肾脏功能、结构的影响,并从整体和肾脏糖基化、自由基及肾小球病变等方面探讨肾脏病变发生机制,为糖基化在DM肾病发病机制中的作用提供更直接的证据.并在体外建立糖基化体系,应用该体系,以氨基胍为阳性对照物,研究了拟黑多刺蚁醇提物抑制糖基化的作用.结果大鼠体外GSP注射后,可使健康大鼠血浆、肾皮质AGEs明显升高,肾脏功能和结构受到明显的改变,使红细胞及肾脏发生明显自由基代谢异常,这些改变与DM的改变极为相似,提示糖基化反应在DM肾病发病机制中可能起重要的作用.结论外源性给予GSP引起正常大鼠肾脏结构和功能明显损害,拟黑多刺蚁醇提物具有明显抑制糖基化的作用.