贴壁型树突细胞的分离培养及鉴定

目的探索树突细胞的生长状态,建立鉴别树突细胞的简便方法。方法从正常人外周血分离获得单个核细胞,常规培养2 h,取贴壁细胞,用含细胞因子的培养液进行培养,于第1、2、5、7天在光镜下对其进行形态鉴别,然后检测其促淋巴细胞增殖和诱导免疫反应的功能。结果实验中所培养的树突细胞始终处于贴壁状态,未见悬浮生长现象,其形态与理论相符,可在体外促进淋巴细胞增殖,并诱导免疫反应。结论树突细胞体外培养至发育成熟的过程中,树突细胞可能始终处于贴壁生长状态。

MEF来源的间充质干细胞诱导生成的调节型树突状细胞的基因表达谱分析

目的研究MEF来源的间充质干细胞(MEF-MSC)诱导的调节型树突状细胞(MEF-regDC)与不成熟树突状细胞(imDC)和成熟树突状细胞(maDC)之间的基因表达谱差异,从而揭示前者的基因表达特点。方法将骨髓造血干细胞与MEF-MSC共培养制备MEF-regDC,用Agilent芯片对3利树突状细胞(DC)进行基因芯片检测及相关分析,分析项目包括:差异倍数计算、主成分分析(PCA)和Go分类。结果MEF-regDC具有特征性的形态、表型和基因表达谱,PCA分析表明,MEF-regDC、imDC和maDC是不同的DC亚群,MEF-regDC与imDC相比,表达差异在2倍以上的基因数共有13 369个,差异在6倍以上的有3 247个,MEF-regDC与maDC相比,表达差异在2倍以上的基因数共有11 326个,差异在5倍以上的有3 299个,进一步的分析显示,3者在功能调节相关基因,免疫相关的基因和信号通路相关的基因的表达也有显著差异。结论MEF-MSCs诱导HPCs生成的MEF-regDC是一不同于传统imDC及maDC的具有特征性基因表达谱的DC亚群。

贴壁生长与悬浮生长树突细胞的免疫学功能比较

目的探索树突细胞(DCs)的可能生长状态,比较分析不同生长状态DCs的免疫学功能。方法从正常人外周血分离获得单个核细胞,用不同培养介质常规培养2h,取贴壁细胞,用含细胞因子的培养液进行培养,在培养过程中光镜下对其进行形态鉴别,然后检测两种DCs促淋巴细胞增殖和诱导免疫反应的功能。结果 7d后,培养瓶中DCs基本处于悬浮状态,而培养板中DCs基本处于贴壁状态;培养瓶中DCs与培养板中DCs形态与理论相符,但培养板中DCs分化形态优于培养瓶中DCs。而在体外促进淋巴细胞增殖及体外诱导免疫反应方面,培养瓶中DCs的能力优于培养板中DCs。结论在DCs体外培养至发育成熟的过程中,DCs先贴壁后悬浮的生长性质可能对其免疫学功能有着重要意义。