大豆抗癌肽的分离纯化及分子量分布

为确定具有抗癌活性大豆多肽的分子量,对大豆抗癌肽粗提物进行超滤,采用MTT法(四噻唑蓝比色法)对得到的不同组分超滤液进行抗癌活性检测,初步确定分子量在5000～10000u范围的组分具有最高的抑癌活性,大豆抗癌肽的IC50为0.47mg/mL。用葡聚糖SephadexG-75凝胶柱对该组分进行进一步分离,收集各洗脱组分并进行抗癌活性研究。结果显示:组分A4具有最佳的抗癌活性,其IC50为0.37mg/mL。根据分子量标准曲线,得到其平均相对分子质量为6723u。

大豆抗癌肽的初步提取及抗癌活性

确定大豆抗癌肽最佳提取条件,并对其抗癌活性进行检测。大豆经乙醚、石油醚或正己烷脱脂预处理后,分别对大豆粉过筛目数、脱脂粉添加量和超声波处理时间进行三因素三水平正交试验设计,通过对胃癌细胞SGC-7901生长抑制率的影响,探讨大豆抗癌肽的最佳提取条件;采用四噻唑蓝比色法(MTT法)对不同处理条件下的大豆提取物进行抗癌活性检测。结果表明:大豆抗癌肽最佳提取条件为乙醚脱脂、过80目筛、脱脂粉添加量3g/15mLPBS缓冲液(pH7.4)、超声波处理时间80min,经验证实验,此条件下癌细胞增殖抑制率达到39.03%。

大豆蛋白酶解物的抗癌活性研究

以大豆分离蛋白为原料,用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶分别对其进行酶解,得到具有抗癌活性的酶解物,测定大豆分离蛋白的水解度和酶解物对胃癌细胞的生长抑制率。结果表明,木瓜蛋白酶酶解物的癌细胞生长抑制率为27.36%,显著高于其他三种酶解物的抗癌活性,其次是中性蛋白酶(21.20%)和碱性蛋白酶(18.01%),酶解物抗癌活性最低的是胃蛋白酶(11.20%)。四种蛋白酶在最适水解条件下作用于大豆分离蛋白时,水解度的排列次序为:碱性蛋白酶>中性蛋白酶>木瓜蛋白酶>胃蛋白酶。大豆分离蛋白的水解度与酶解物的细胞生长抑制率不呈线性关系。

大豆降血压活性肽和抗癌活性肽的制备研究

以大豆分离蛋白为原料,用7种不同的蛋白酶对其进行水解,得到大豆肽,在水解不同时间时测定大豆肽的血管紧张素转换酶(ACE)抑制率和胃癌细胞生长抑制率。结果表明,碱性蛋白酶制备的大豆肽ACE抑制率最高,其制备大豆降血压活性肽的最优条件为:反应温度55℃,pH 9.0,底物质量分数8%,酶添加量8 000 U/g,酶解时间5 h。木瓜蛋白酶制备的大豆肽胃癌细胞生长抑制率最高,其制备大豆抗癌活性肽的最优条件为:酶解温度55℃,酶添加量7 000 U/g,pH 7.5,底物质量分数6%,酶解时间4 h。

木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的条件优化

用木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶解,制备大豆抗癌活性肽,并对其细胞生长抑制率、水解度和木瓜蛋白酶的最优作用条件进行研究。结果表明:在整个酶解过程中,大豆抗癌活性肽都具有明显的抗癌作用,但水解度与大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率之间不呈线性关系。底物质量浓度、酶用量、酶解温度、酶解时间和反应pH值都影响大豆抗癌活性肽的细胞生长抑制率。木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的最优酶解条件为:底物大豆抗癌活性肽的浓度6g/100mL、酶用量7000U/g、酶解温度55℃、酶解时间4h、反应pH7.5,在此条件下得大豆抗癌活性肽细胞生长抑制率为28.13%。

木瓜蛋白酶制备大豆抗癌活性肽的研究

以大豆分离蛋白为原料,以细胞生长抑制率为指标,用木瓜蛋白酶对其进行酶解,得到大豆抗癌活性肽。木瓜蛋白酶的最佳作用条件为:温度55℃、酶添加量7 000 U/g、反应pH 7.5、底物质量分数6%、酶解时间4 h。在抗癌活性肽制备过程中,对水解度和肽活性之间的关系进行了研究。结果表明,水解度与大豆肽的抗癌活性不呈线性关系。用10 000 u和5 000 u的超滤膜处理木瓜蛋白酶的酶解产物,在不同分子质量的超滤组分中,分子质量小于5 000 u组分的癌细胞生长抑制率最高,达32.58%。