胰升血糖素样肽-1改善波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能机制的研究

目的研究胰升血糖素样肽-1(GLP-1)对波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能的影响及机制。方法将获取的原代胰岛细胞分为5组,即正常葡萄糖(5.5mmol/L)组、恒定高糖(30.0mmol/L)组、波动高糖(每24h轮换培养于5.5、30.0mmol/L)组、恒定高糖+GLP-1(100nmol/L)组和波动高糖+GLP-1组。干预7d后检测细胞增殖活性、活性氧簇(ROS)、细胞周期及周期蛋白cyclinD1、p21、p27、Skp2的表达。结果 GLP-1干预可降低波动性高糖诱导的细胞内ROS水平[(194.40±19.20)vs(406.78±18.40),P<0.05],上调促细胞周期cyclinD1、Skp2表达,下调周期抑制蛋白p21、p27表达,使停滞在G0/G1期的细胞比例减少,改善细胞增殖活性[(1.38±0.09)vs(0.44±0.10),P<0.05]。结论GLP-1可通过降低氧化应激水平及对不同细胞周期蛋白表达的调节改善波动性高糖抑制的胰岛细胞增殖活性。

嵌合抗原受体T细胞治疗面临的挑战与对策

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)疗法是一种新兴的免疫治疗手段,其原理是将来自患者外周血的T细胞在体外进行编辑扩增后,使T细胞表面表达特异性的嵌合抗原受体,再将T细胞回输至患者体内,使其特异性地识别和杀伤肿瘤细胞,且不依赖于主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)分子的限制。目前,靶向CD19的CAR-T细胞在血液肿瘤的治疗中已获得了令人振奋的抗肿瘤效果。然而,CAR-T细胞在治疗肿瘤的过程中仍存在很多问题,例如不良反应、肿瘤复发和实体瘤疗效等,特别是在实体肿瘤中靶点选择、CAR-T浸润和存活以及肿瘤免疫抑制微环境等问题仍未有突破性进展。本文总结了近年来CAR-T细胞治疗在临床中的应用现状,从肿瘤抗原异质性、肿瘤微环境和靶点选择3个方面归纳了CAR-T细胞治疗面临的挑战,并结合最新研究进展提出了应对策略。

二甲双胍诱导的干细胞样记忆性嵌合抗原受体-T细胞对小鼠多发性骨髓瘤移植瘤的治疗作用

目的:探讨体外培养过程中加入二甲双胍对靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)的嵌合抗原受体-T细胞(chimeric antigen receptor-T cells,CAR-T)分化及抗肿瘤能力的影响。方法:从健康人外周血单个核细胞中提取并活化T细胞,采用病毒感染法制备BCMA-BBZ CAR-T细胞。二甲双胍诱导组为CAR-T细胞扩增过程同时加入重组人白细胞介素7(recombinant human interleukin-7,rhIL-7)、rhIL-21和二甲双胍进行诱导,非二甲双胍诱导组为只使用细胞因子诱导的CAR-T细胞,空白对照组为未转导慢病毒的T细胞。采用FCM法检测CAR-T细胞中CAR的表达水平、记忆表型和凋亡情况,非放射性细胞毒性实验评价CAR-T细胞对人多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞的特异性免疫杀伤作用。用RPMI-8226细胞连续多轮刺激后,检测CAR-T细胞的记忆表型和对RPMI-8226细胞的毒性杀伤功能。构建RPMI-8226细胞小鼠移植瘤模型,输注各组CAR-T细胞后,记录小鼠的肿瘤体积、体质量、生存期,检测CAR-T输注14 d后小鼠外周血中淋巴细胞数量。结果:二甲双胍诱导后的CAR-T细胞,CD8~+T细胞中干细胞样记忆T细胞(stem-cell memory T cell,Tscm)(CD95high CD45RAhigh CCR7high)所占比例明显增多(P<0.05)。在经过连续2轮RPMI-8226细胞刺激后,CD8~+T细胞中仍保持较高的Tscm比例。与未转染慢病毒的T细胞相比,二甲双胍诱导组和非二甲双胍诱导组CAR-T细胞均能有效抑制甚至清除肿瘤(P<0.01和P<0.0001),但2组CAR-T细胞的疗效差异无统计学意义(P>0.05)。进一步研究显示,相较于非二甲双胍诱导的CAR-T细胞治疗组二甲双胍诱导的CAR-T细胞治疗组小鼠外周血中CD8^(+)T细胞数明显更多(P<0.05),小鼠生存期也具有一定的存活受益。结论:二甲双胍具有维持CAR-T细胞低分化的作用,其诱导的Tscm富集可在连续培养和接受连续抗原刺激后维持。二甲双胍诱导的CAR-T细胞能够有效抑制肿瘤生长。