应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体

用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞，结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞，在1％人血清培养液中添加适当营养成分，可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养，建立了中试培养工艺流程和质控点，收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml，单抗产量为40～70μg／ml，平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中，细胞支原体为阴性，收获上清中单抗免疫活性合格，热原试验合格。

WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立

目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。

大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺

用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体（McAb），首先将培养上清直接上SP离子交换柱，再上DEAE柱，获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L，纯化规模达2g，纯化的McAb经SDS－PAGE测定，纯度基本达到95％，免疫荧光活性为66±9％。热原质合格，支原体、残余DNA均为阴性，达到体内制剂质控要求。

抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体纯化制剂的免疫学活性鉴定

采用多种方法对两株经辛酸－硫酸按沉淀法纯化的抗ＨＦＥＳ病毒ＭｃＡｂ进行了免疫学鉴定．结果表明，纯化后的ＭｃＡｂ的免疫学活性（抗体效价）无明显改变，特别是仍保留了很高的中和活性、血凝抑制活性及对感染乳鼠的保护活性．纯化ＭｃＡｂ制剂置４℃保存。

低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断，免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛，使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行，但腹水含有大量杂蛋白，包括小鼠正常Ig，这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。

应用发酵罐生产单克隆抗体的初步研究

为了满足对单克隆抗体的需要,我们应用小型发酵罐对杂交瘤细胞进行了培养试验,并对可能影响细胞生长和抗体产生的因素作了初步探讨。同时还对降低血清含量对培养杂交瘤细胞的影响进行了试验。结果表明,3株细胞在发酵罐中生长良好。细胞最大密度达8×102/ml以上。培养上清中的抗体滴度接近静止培养水平,其中A6和A11】105,LS7.161】1:64。接种细胞密度、培养时的pH、溶氧等对细胞生长有不同程度的影响。驯化的细胞在发酵罐中逐步降低血清量是可行的。

单克隆抗体治疗肾综合征出血热患者的初步观察

选择具有高中和活性和血凝抑制活性，且对肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染乳鼠具有良好保护作用的抗－ＨＦＲＳＶＭｃＡｂ腹水，经辛酸－硫酸铵沉淀法纯化成ＩｇＧ。在纯度鉴定、免疫学活性测定及各种安全性试验合格的基础上，首次试用于３例ＨＦＲＳ患者的治疗。结果表明，使用安全，疗效良好。随访观察１１个月，无异常反应。