反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

背景与目的:研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达,STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法:利用Westernblot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察,用AnnexinⅤ/PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果:所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol/L范围内,反义核酸浓度越高,对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.01)。寡核苷酸浓度超过250nmol/L时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P<0.05);转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率:对照组早期凋亡率为5.52%,反义400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为8.22%、9.99%,16.97%,正义对照400、800、2000nmol/L组早期凋亡率分别为5.87%、5.36%、13.31%。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡(P<0.01),正义低浓度转染组(400、800nmol/L组)与对照组无明显差别(P>0.05),而对照组与正义2000nmol/L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异(P<0.01)。结论:B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低,细胞增殖受到明显抑制,细胞的凋亡增加,表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。

羧酸富勒烯C_3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经1H-NMR,13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V/PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg/L时,清除效率高达93%左右。对1-12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。

辐射致癌相关蛋白质的筛选及其表达

目的:通过建立辐射致癌的细胞模型,应用蛋白质组学技术观察辐射癌变细胞和正常细胞间的差异蛋白表达谱,以期获得辐射致癌相关蛋白。方法:选取永生化的人支气管上皮细胞株(BEAS-2B),利用γ射线照射诱导癌变,建立辐射致癌的细胞模型。应用二维凝胶电泳技术,筛选癌变细胞和正常细胞间的差异表达蛋白点并进行质谱鉴定分析。通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术对其中4个蛋白(ENO1、PrxI、Dyrk2和GPX1)在辐射致癌不同阶段的表达情况进行分析。结果:在辐射癌变细胞和正常细胞间共得到差异表达蛋白点59个,其中14个点仅在癌变细胞中表达,15个点仅在正常细胞中表达,23个点在癌变细胞中表达降低,7个点在癌变细胞中表达升高。通过质谱分析,共有26个蛋白质点得到鉴定,主要包括一些参与细胞代谢、增殖、分化的酶类、信号调控蛋白、DNA结合蛋白以及一些细胞结构蛋白、少数功能不明的蛋白及肽段,其中ENO1和PrxI随辐射癌变的进展而升高,Dyrk2和GPX1随辐射癌变的进展而降低。结论:应用二维电泳技术获得了辐射致癌差异表达蛋白谱,筛选和鉴定了与辐射致癌相关的差异表达蛋白,并分析部分差异蛋白在辐射致癌不同阶段的表达情况。研究结果为阐明辐射致癌机制提供了实验依据。

富勒烯赖氨酸衍生物的合成及对AHH-1细胞的辐射防护效应

本研究通过富勒烯与赖氨酸直接反应,合成了一种富勒烯赖氨酸衍生物(C60-Lys),并通过元素分析、红外光谱、1H-NMR、13C-NMR等对其分子结构进行了表征。细胞毒性研究发现C60-Lys对人淋巴母细胞AHH-1的毒性较小,在1200mg/L浓度以下的细胞存活率和未用药对照组相比无明显差异。辐射生物效应研究发现400mg/L以上C60-Lys预处理能显著提高受照细胞的存活率,并降低辐射诱发的凋亡率,其辐射保护效应具有明显的剂量依赖性。说明C60-Lys预处理对受4Gyγ射线照射的AHH-1细胞具有一定的保护作用。

照射后肝癌细胞DNA聚合酶β基因转录和表达的变化

采用免疫组织化学和胞浆斑点杂交法，研究了γ射线照射后SMMC－LTNM肝癌细胞DNA聚合酶β基因转录和表达的变化。结果显示，肝癌细胞在体照射2Gy、4Gy后24～48h，细胞内该酶基因表达增强，酶含量增加，照射后72h基本恢复至照射前状况；该酶基因转录也出现增强，其mRNA含量有一过性升高，照射后36～48h达峰值，约为照射前水平的1．76倍。这些结果提示，γ射线照射后肝癌细胞内DNA聚合酶β的作用得到加强，可能对肿瘤的放疗产生不利影响。

PE防渗膜与复合土工膜在水库工程中的应用

结合水库工程介绍PE防渗膜、PE复合土工膜的选材、拼接。

岩溶地区水库防渗施工技术

为解决水库渗漏问题,采用了新材料、新工艺及多层次防渗措施,取得了很好的防渗效果。水库蓄水后,经过3个多月的监测,渗漏量仅为设计允许渗量的21.9%。

不同病理类型结直肠肿瘤中MTS1基因的表达

目的研究不同病理类型人类结直肠肿瘤中MTS1基因产物p16蛋白的表达情况;探讨其异常表达与肿瘤发生发展的关系。方法采用免疫组织化学方法,对136例结直肠肿瘤石蜡标本的p16蛋白进行测定。结果 p16蛋白在结直肠癌中的阳性检出率为83.1%,明显高于切缘粘膜的1.2%和非肿瘤患者结肠粘膜的10%(P<0.01)。管状腺癌的阳性率为94.1%,显著高于绒毛状腺瘤恶变、乳头状腺癌和粘液腺癌(P<0.05)。管状腺癌的阳性表达强度显著高于乳头状腺癌(P<0.01)和绒毛状腺瘤恶变(P<0.05)。结论在结直肠肿瘤中,MTS1基因有高频率的异常表达。这种异常表达在各种病理类型的大肠肿瘤都是常发现象。该基因在各种病理类型的结直肠肿瘤中都有着高频率的基因变异,与结直肠肿瘤的发生与发展密切相关。

细胞凋亡的设计与肿瘤的基因治疗

细胞凋亡的设计与肿瘤的基因治疗谭卫林，董俊瑞，王元和细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）或称程序性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）是细胞对内、外信号刺激做出的应答反应，是一种由基因控制的细胞自主性死亡过程，是主动的细胞学过程。因而...

富勒烯衍生物C3对AHH-1细胞电离辐射的防护效应

目的研究富勒烯衍生物C3（以下简称C3）对AHH-1细胞电离辐射的防护效应，探讨该类化合物作为新型辐射防护剂的发展前景。方法通过化学合成制备C3，用台盼兰拒染试验检测C3对AHH-1细胞的毒性作用。在此基础上于AHH-1细胞培养体系中加入不同浓度C3，以不同剂量60^Coγ射线照射细胞，通过台盼兰拒染试验检测C3化合物对细胞的毒性作用，用Annexin—V／PI染色、Facscalibur流式细胞术等，分析C3化合物对γ射线照射细胞增殖活力和细胞凋亡的变化。结果在细胞培养体系中，终浓度范围0～400mg／L的C3对培养的对数生长期AHH-1细胞活力几乎无影响，AHH-1细胞台盼兰拒染率无明显变化（P〉0．05）。C3对1～8Gyγ射线照射的AHH-1细胞具有良好的辐射防护效应，终浓度在10mg／L时即显示其对4Gy60Coγ照射的细胞有保护效应，且随浓度增加而增加；终浓度达200—400mg／L时，照射细胞存活率已接近未照射的正常细胞（P〉0．05），辐射诱导的细胞调亡率和细胞死亡率用药组均显著低于未用药的对照组（P〈0．01）。研究结果还显示，C3提高照射细胞存活率的作用还与给药时间有关，照前24h至照前即刻给药最为有效。结论C3对不同剂量60Coγ射线照射的AHH—1细胞具有较好的电离辐射防护作用，该防护效应与用药浓度有关，C3浓度越高，防护作用越好；且在本实验产生辐射防护作用的浓度范围内，C3对培养的对数生长期AHH-1细胞存活率几乎无影响，提示该类化合物有作为新型辐射防护剂的研究前景。

羧酸富勒烯C_3对γ射线照射AHH-1、HIEC和小鼠骨髓GM-CFC细胞的防护效应

目的探索高效、低毒辐射防护剂一直来都是辐射防护领域的研究重点和难点之一。迄今为止,任何一种辐射防护药物都不能在有效性、毒副反应。

羧酸富勒烯C3对人红白血病K562细胞和人淋巴母细胞AHH-1的辐射生物效应比较

目的放疗目前仍是恶性肿瘤的重要治疗手段之一,在放疗过程中射线在杀伤肿瘤细胞的同时,往往对周围的正常组织也造成一定的伤害。

急性放射病患者恢复期外周血淋巴细胞表型及功能分析

了解急性放射病患者恢复期间外周血淋巴细胞功能。方法用流式细胞仪分析淋巴细胞表型，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法分别分析Ｔ细胞和ＮＫ细胞功能。结果照后４．５年，患者外周血ＣＤ＋４Ｔ细胞仍有不同程度低于正常对照；受照剂量大于２Ｇｙ者ＣＤ＋８Ｔ细胞数明显高于正常，而受照时年龄为５４岁者ＣＤ＋８Ｔ细胞明显低于对照；多数患者外周血ＮＫ细胞数和功能都高于正常对照。结论受照者外周血Ｔ细胞功能恢复与受照剂量大小及年龄因素有关，恢复期ＮＫ细胞数量和活性增高。

羧酸富勒烯C3对K562和AHH-1细胞的辐射生物效应研究

目的探讨羧酸富勒烯C3（C3）在辐射防护和辅助放疗方面的应用。方法以不同浓度C3与AHH-1、K562细胞共孵育，用CCK-8法、锥虫蓝试验检测C3对细胞活力和存活率的影响，用Annexin—V／PI染色、流式细胞分析法研究照射后细胞凋亡和细胞周期的变化。结果C3对AHH-1细胞活力几乎无影响（存活率大于95％），但600mg／L的C3使K562细胞存活率明显降低（82％）。100mg／LC3用药照射组与单纯照射组相比，4Gy照射后AHH-1细胞的存活率显著升高（71．3％、90．3％），细胞凋亡率明显下降（26．3％、12．6％）；而受照射24Gy的K562细胞存活率却呈现下降趋势（69．4％、66．1％），不同剂量照射后细胞凋亡率反而增加。细胞周期分析结果显示，C3处理组AHH-1细胞12Gy辐射后G2期阻滞（27．2％）与单纯照射组（40．8％）相比减轻；而K562受照细胞则反而加重。结论C3对AHH-1细胞具有较好的辐射防护作用，而对K562细胞则表现为抑制细胞增殖，促进辐射诱导的细胞凋亡并加重G2期阻滞。

辐射致癌相关蛋白质筛选及其表达研究

背景与目的:辐射致癌发生及发展的机理目前尚不明确。本研究通过建立辐射致癌的细胞模型,应用蛋白质组学技术观察辐射癌变细胞和正常细胞间的差异蛋白表达谱,

浅谈静压桩施工技术

近年来各个城市的建筑安全事故频频发生,人们更加注重施工建设质量。随着我国建筑行业发展水平的逐步提升,静压桩施工技术被施工建设人员充分应用,该项技术发挥功能作用,保证建筑安全性与稳定性,为今后人们使用建筑提供重要保障。

建筑施工中的钻孔灌注桩技术

我国建筑工程在施工建设期间,具有一定复杂性,为了能够提升建筑工程结构稳定性,通过运用钻孔灌注桩技术开展稳定加固工作。此种类型的施工程序比较多,对技术要求非常高,具体的施工质量对于桩体承载能力具有决定性作用,甚至还会对建筑工程整体施工的有效性造成严重影响。