固氮菌B8-G菌株产聚-β-羟基丁酸发酵条件研究

通过利用碳源、氮源实验，发现固氮菌Ｂ８－Ｇ菌株，在以ＮＨ４ＮＯ３为氮源、蔗糖或甘露醇为碳源的发酵培养基中生长良好。在３０℃，２２０ｒｐｍ摇床培养４８ｈ，Ｂ８－Ｇ菌株的生物量可达９．５１ｇ·Ｌ－１以上，ＰＨＢ含量可达细胞干重的７４％以上。同时对Ｂ８－Ｇ菌株的培养条件也作了研究，采用补料分批培养方法，获得Ｂ８－Ｇ菌株的生物量达到１７．２ｇ·Ｌ－１；ＰＨＢ的含量达到７６．１４％。

高产聚β－羟基丁酸菌的分离与检测

用野外采回的土样进行菌种分离，得一株编号为Ｂ８的菌株，经初步鉴定该菌株是固氮菌属（ＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒＢｅｉｊｅｒｉｎｃｋ）的一株固氮菌。Ｂ８菌株可利用淀粉在细胞内积累大量的聚β－羟基丁酸（ＰＨＢ），从Ｂ８菌株细胞中提取出的ＰＨＢ，经元素分析、核磁共振及红外光谱检测，结果与Ｓｉｇｍａ产品的性质和其纯度完全一致。经小型发酵试验测定，Ｂ８菌株产ＰＨＢ的量达细胞干重的４１．５％。

黑河水库水源的微生物区系考察

以黑河水系的陈河(地名)和黑河大桥上侧坝内作断面采水样。分离得36株异养细菌和13株霉菌,并对以上菌株按常规方法进行了鉴定.还发现有与水质有关的紫色细菌、绿硫细菌、反硝化细菌、磷细菌、铁细菌、氨细菌和大肠杆菌。没有检测到氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌。反硝化细菌、氨细菌和大肠杆菌群的最大可能数(MPN)分别是273个/g,300个/g,75个/l。水体内的细菌总数是3.79×10~2个/ml.本文还对黑河水系的微生物区系与水质的关系进行了评估和未来预测.

可完全降解性生物塑料——聚羟基烷酸的开发研究

微生物产生的次生代谢产物——聚羟基烷酸(PHA),是目前世界科技界公认的最理想的一种可完全降解的生物塑料新型材料。它在消除“白色污染”,保护人类有限的生存环境方面,有其独特的功能。因此,自80年代起,这一材料的开发研究就受到世界科技界的重视。目前困扰这一研究产业化的关键,是生产成本过高,据最新报导,每公斤产品成本达16美元,难以与化学合成塑料相竞争。因此,该课题研究的主要任务是采用现代生物技术,提高微生物培养的生物量和PHA在生物细胞内的含量。

从植物分离产紫杉醇的内生真菌的研究

将生于秦岭地区的中国红豆杉树皮中分离得到的一株内生真菌，在马铃薯培养基中进行发酵试验，用薄层层析、薄层扫描检测。分析结果表明这株真菌能合成紫杉醇，高效液相色谱技术测定其紫杉醇含量约为１４．２０μｇ／Ｌ。

胶原膜与聚-β-羟基丁酯在组织工程心脏瓣膜中应用的研究

目的 :对胶原膜与聚 β 羟基丁酯在组织工程心脏瓣膜技术中的应用进行比较。方法 :对照研究胶原膜和聚 β 羟基丁酯膜在材料结构、皮下包埋和细胞生长对照实验情况。结果 :胶原膜呈网孔状结构 ,皮下包埋8周仍保持膜状结构 ,皮下包埋 8～ 12周完全降解 ,生物相容性优于聚β羟基丁酯膜。结论 :胶原膜在材料结构特征、降解率和生物组织相容性方面均优于聚β羟基丁酯 。

发酵工程教学中加强学生创新能力培养的思考与尝试

加强大学生创新能力的培养是当前高等理科教育改革的重要课题.本文通过作者多年的教学实践,提出发酵工程教学中加强学生创新能力培养的一些做法和体会,以期和同行进行交流和讨论.

新型聚β-羟基丁酯作为血管组织工程支架材料的实验研究

目的:探讨经改性处理后的可降解生物材料聚β-羟基丁酯(PHB)作为血管组织工程支架材料与血管平滑肌细胞的细胞相容性。方法:采用体外培养的兔血管平滑肌细胞接种在经胶原包埋处理后的管型PHB支架材料上,用相差显微镜和扫描电镜观察细胞的粘附和生长情况,并行HE染色观察。结果:兔血管平滑肌细胞在改性后的管型PHB支架材料上粘附生长良好,扫描电镜下可见细胞生长融合成片状,HE染色示细胞在PHB材料上生长良好。结论:改性后的聚β-羟基丁酯材料与兔血管平滑肌细胞有较好的生物相容性。

新型生物可降解性材料聚β-羟基丁酸生物相容性和安全性研究

目的 探讨聚β－羟基丁酸（ Poly－β－ hydroxybutyrate， PHB）的生物相容性。方法 根据国际标准化组织所推荐的生物学试验，分别进行其中的初期体外细胞相容性研究的细胞毒性试验，二期动物体内埋置的组织相容性研究以及动物体内的急性全身性毒性反应和慢性全身性毒性反应。结果 PHB细胞毒性为零级；植入后引起较轻微的反应，纤维包膜逐渐变薄；无急性全身性毒性反应；长期埋置，不引起明显的血液常规和血液生化学的改变，不引起各器官系统的结构变化。结论 PHB具有较好的细胞相容性、组织相容性和血液相容性。

聚羟基丁酸酯可吸收缝线生物相容性的实验室研究

目的:研究聚羟基丁酸酯(Polyhydroxybutyrate,PHB)可吸收缝线的生物相容性。方法:①将成纤维细胞进行体外培养,传代后与PHB可吸收缝线复合培养,设与经聚氰基丙烯酸酯处理过的PHB可吸收缝线复合培养为对照组,观察细胞生长情况;②行扫描电镜检查观察细胞在丝线上的生长情况;③以MTT法检测复合培养后的细胞活性。结果:①实验组细胞生长良好,对照组细胞漂浮,收缩成团;②扫描电镜下见细胞在丝线上贴附生长良好;③MTT法检测实验组对细胞增殖无明显影响。结论:PHB可吸收缝线具有良好的生物相容性。

肺结核、肺癌患者T细胞亚群、sIL-2R水平测定及临床意义

应用 APAAP法和夹心 ELISA法分别测定肺结核、肺癌患者 T淋巴细胞亚群和血清 s IL- 2 R水平 ,结果如下 :1肺结核组 :进展期病人 CD3 +、CD4 +、CD4 +/CD8+显著低于正常组。 CD8+百分值显著低于正常组 ,进展期病人 CD4 +、CD8+、CD4 +/CD8+和好转期病人相比有显著差异 ,CD3 +无显著变化。 2肺结核组 :进展期、恢复期血清 s IL- 2 R水平显著高于好转期 ,和正常组值相比也有显著差异性。 3肺癌组 :手术前肺癌患者 CD3 +、CD8+、CD4 +/CD8+显著低于正常组 ,CD8+和正常组比较无显著差异。术后 1月各测值和正常组无显著差异。 4肺癌组 :肺癌患者血清 s IL- 2 R水平显著高于正常组。手术前、后 s IL - 2 R水平也有显著差异 ,提示 T淋巴细胞亚群、血清 s IL- 2 R水平是监测肺结核活动性 ,评价肺癌治疗。

一株产紫杉醇真菌发酵条件的研究

研究了在一株产紫杉醇真菌的发酵培养中 ,初始糖浓度、碳源、氮源和前体饲喂对生物量和紫杉醇合成的影响。结果表明 ,一定氮源和前体饲喂对紫杉醇产量提高有显著促进作用。在发酵过程中补加糖也有一定影响。

不明物体“太岁”的初步研究

目的利用现代化学分析手段,分离提取"不明物体"的主要化学成分,并结合仪器进行综合鉴定。方法样品Ⅰ水溶解物经正丁醇萃取,萃取液和母液分别通过柱层析、乙醇沉淀分离提纯得到若干化合物和一主要白色沉淀化合物。白色沉淀经去脂、去蛋白、脱盐等处理,经核磁、元素测定及红外等综合分析,确定其基本组成。结果经分析,样品Ⅰ主要成分为聚乙烯醇,按照相同的处理方法,样品Ⅱ同样得到白色沉淀物,处理后经红外分析对照,基本物质也为聚乙烯醇。结论 1992年陕西发现的首例样品Ⅰ和河北2005年发现的样品Ⅱ,都是一种以聚乙烯醇为主,且含少量多糖物质,并且混杂有黏细菌、霉菌及芽孢细菌的复杂"不明物体"。

一株具有抗菌作用的P. polymyxa sp.菌株的分离鉴定

目的研究对辣椒疫病具有防治作用的一株桔抗细菌。方法从辣椒植株根的韧皮部分离出对辣椒疫霉(Phytophora capsic Leonian)具有强烈拮抗作用的辣椒植株内生细菌菌株,通过形态观察、生理生化实验、16s rRNA基因测序以及与NCBI(National Center for Biotechnology Informa-tion)的数据库中进行对比,鉴定该菌株。采用平皿对峙法测定其抑菌活性。结果分离出的该菌株确定为Peanibacillus polymyxa sp(其后简称为J),其对辣椒疫霉(phytophora capsic Leonian)、西瓜枯萎(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、小麦赤霉(Gibberella saubinetii(Mont.)Sacc.)、马铃薯干腐(Gibberella pulicris)、烟草赤星(A.alternata(Fr.)Keisslerf.sp.nicotianae)和番茄早疫(Alternariasolani)病害真菌具有抑菌活性。结论对Paenibacillus polymyxa sp.的生物学特性研究结果表明,菌株对多种植物病原真菌具有抑制作用。同时,它还可固定大气中的氮,且无磷酸酶、纤维素酶和脂肪酶活性,它同宿主属互惠共生关系。因此,该菌株可能是适用于生物防治的一株优良菌株。

血管内皮细胞与聚羟基丁酯细胞相容性的实验研究

目的评价新型可降解生物材料聚羟基丁酯(PHB)与血管内皮细胞的细胞相容性。方法采用培养的牛血管内皮细胞接种在PHB膜片及胶原包埋的PHB膜片上,并与PGLA和空白对照作比较,用相差显微镜和扫描电镜观察细胞的粘附和生长情况,并对细胞增殖用MTT法进行测定。结果牛血管内皮细胞在四个实验组中粘附良好,生长符合其生长曲线,胶原包埋PHB较单纯PHB细胞更易粘附生长,较PGLA略差。结论牛血管内皮细胞与PHB细胞相容性好,其用胶原包埋可增加细胞亲和性。

以聚羟基丁酸已酯为支架材料的组织工程隆鼻法的实验研究

目的:研究以聚羟基丁酸已酯(PHB)为支架材料形成的组织工程软骨作为隆鼻填充材料的可行性。方法:实验组:取兔的耳软骨细胞,行体外培养扩增,达到一定数量后,再接种于PHB支架上,置于新西兰白兔的鼻背部骨膜下,从大体和组织学方面观察软骨形成情况;对照组:单纯以未接种软骨细胞的支架移植于兔的鼻背部骨膜下,于相同时间点进行检测。结果:实验组:植入4周后该复合物在兔鼻背下支架表层有软骨层形成,并可见软骨细胞突入至支架材料中间。8周后支架材料继续降解,软骨细胞及细胞基质生成明显,伴有少量血管及胶原长入,对照组无相应变化。结论:以聚羟基丁酸已酯(PHB)为支架材料的组织工程软骨可用于隆鼻的填充材料。

聚羟基丁酸酯复合骨髓基质细胞构建组织工程骨修复兔下颌骨缺损

目的:探讨以聚羟基丁酸酯(PHB)作为骨组织工程支架的可行性。方法:体外培养兔骨髓基质细胞(BMSCs),使其向成骨细胞分化后接种于PHB支架上,植入兔下颌角骨缺损中,以单纯缺损、单纯植入材料、植入新鲜骨髓加材料作为对照。4、8、12、24周分别处死各组家兔2只,行大体标本、X线摄片、组织学及扫描电镜观察新骨形成情况。结果:实验组24周大部分材料被骨性组织取代,修复骨缺损效率较对照组高。结论:PHB可以作为组织工程材料中的一种来修复骨缺损。

B群链球菌的培养及优化研究

为了研究B群链球菌的生长和荚膜多糖的合成规律,采用摇瓶试验,探讨不同的液体培养基、培养基的pH值、葡萄糖的含量、生长因子、种子菌的接种量和溶氧等因素对B群链球菌生长的影响,优化发酵参数。并放大到10 L发酵罐中培养,菌浓度最高可达到20亿/mL;荚膜多糖的含量在培养的5 h达到652μg/mL。经过多次试验,建立了稳定的GBS发酵工艺。

新型生物降解材料PHB细胞相容性研究

目的 :本文对新研制的聚 β羟基丁酯 (PHB)这一生物可降解材料进行细胞相容性研究。方法 :采用 L92 9小鼠成纤维细胞 ,经材料高温浸提液、常温浸出液与 L92 9细胞接触及直接在 PHB膜片上种植该细胞 ,运用四唑盐比色法 (MTTassay)测定其 1,3,5天 L92 9细胞的相对增殖率及其毒性程度。结果 :PHB材料在高温及常温下物理、化学性质稳定。结论 :PHB细胞相容性好 ,细胞毒性程度 0级。

B群链球菌荚膜多糖抗原的分离纯化工艺研究

目的为提高荚膜多糖抗原得率，降低荚膜多糖中残余蛋白质含量和核酸含量，提高荚膜多糖抗原纯度．优化B群链球菌荚膜多糖的提取纯化工艺条件。方法研究pH值，沉淀核酸和荚膜多糖的乙醇浓度，乙醇沉淀多糖所需的温度和时间；比较蛋白酶K法、sevag法和冷酚抽提法去除荚膜多糖中杂蛋白质的效果。结果建立起25％乙醇沉淀去核酸。冷酚抽提法去蛋白质分离纯化荚膜多糖，55％乙醇沉淀多糖的方法。3批GBSⅢ发酵液中获得的荚膜多糖的唾液酸含量为12．4％～14.8％；分配系数（Kav）≤0．5的多糖回收率达90％以上；荚膜多糖得率为0．021～0．027g/L，抗原纯度较高。结论从发酵液中提取纯化荚膜多糖抗原的工艺是可行有效的。