失重条件对小鼠NK细胞体外生物活性的影响

建立在失重环境下NK细胞的培养体系,探讨失重培养条件对NK细胞活性的影响。取C57BL/6小鼠脾,分离NK细胞,在正常重力和失重状态下旋转细胞两种培养体系中培养NK细胞48 h。以Yac-1细胞为靶细胞,采用MTT法检测其杀伤活性;半定量PCR分析穿孔素、颗粒酶的转录水平。与正常重力培养对照相比,失重培养的NK细胞杀伤活性显著降低,其穿孔素和颗粒酶B的转录水平均显著低于正常重力培养组,穿孔素/GAPDH结果为失重培养组0.625±0.042;正常重力培养组1.054±0.036(P<0.01);得到颗粒酶B/GAPDH结果为失重培养组0.700±0.042;正常重力培养组1.068±0.058(P<0.01)。成功建立了NK细胞体外培养体系,在失重环境下NK细胞杀伤活性降低。

ZigBee技术在家庭网关中的应用与实现

面世不久的ZigBee无线技术具有低功耗、低成本等诸多优点,很适合应用在控制类的家庭网络中。通过在基于ARM7处理器核的微控制器PLC2210上移植实时操作系统μCOS-Ⅱ等技术实现了家庭网关的开发平台。在此平台上,提出ZigBee技术在家庭网关中的实现方案。着重实现了基于MC19132射频收发芯片的无线节点的硬件电路设计和相关软件设计。通过实验证明,ZigBee完全能够满足普通家庭的控制需求。

抗菌肽SMAP-29衍生物的原核表达及纯化

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21(DE3),酶切和测序鉴定后,用异硫代β-D-半乳糖昔(isopropylβ-D-thiogalactoside IPTG)诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化。结果化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40%,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物。结论成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础。

农村高中学生探究性学习能力的培养

高中政治教学必须要关注学生实际学习能力,培养学生主动学习、积极探究的热情,尤其是要培养农村学生探究性学习能力.培养学生探究性学习能力,教师应布置预习任务,创设多元情境,发挥引导作用,升级合作互动.

模拟微重力条件下体外培养神经细胞模型的初步建立

目的研究模拟微重力条件下构建新生大鼠神经细胞培养体系的方法。方法分离新生鼠海马区原代神经细胞,接种于Cytodex3型微载体,培养3 d后转移入旋转细胞培养系统,用倒置显微镜和扫描电镜观察神经细胞在微载体上的生长情况,进行神经元细胞特异性烯醇酶的免疫组织化学染色,用Image-Pro Plus软件进行神经细胞胞体面积的测量。结果微重力条件下神经细胞在微载体上均匀分布,免疫组织化学结果显示神经元被染成棕色,其胞体面积较正常重力条件培养的神经细胞有显著增加(P＜0．01)。结论神经细胞可以在微重力条件下进行培养,这个体系的建立有着广泛的应用前景。

学生“发言权”的再审视

不少教师都有这样的疑惑：“学生怎么越大越不肯发言了？”教师提问，齐刷刷举手的是小学生，到了初中就越来越少了，高中生举手的几乎是凤毛辟角，举手的大学生甚至会成为别人取笑的对象。似乎随着年龄的增长，学生越来越不愿意表达自我、表现自我了。果真如此吗？

集体备课热的“冷”思考

研讨出真知，研讨出效率。新课程改革在倡导学生合作学习的同时，也要求教师合作探究，形成研讨氛围，发挥“智囊团”的优势，从而有效地避免教师个体研究势单力薄的情况，发挥集体智慧的作用。萧伯纳说过：“倘若你有一种思想，我也有一种思想，而我们彼此交流这些思想，那么我们每个人将各有两种思想。”

PEP06肽的成胶性及其解决方法的初步研究

目的开发一种避免PEP06肽形成凝胶从而消除药物凝胶有害作用的优化方法。方法选用不同溶剂研究溶剂对PEP06肽溶解性的影响;将PEP06肽放入装有氨水和浓盐酸容器内,研究pH对pEP06肽成胶性的影响;改变溶液的浓度,研究浓度对PETO6肽成胶性的影响;通过阳离子交换层析去除PEP06肽中的促成胶物质,解决PEP06的成胶问题。结果溶剂的种类影响PEP06肽的溶解性,在偏碱性的PBS缓冲液(pH=6.45)中药物的溶解性较差,在酸性的2%醋酸(pH=3.01)中溶解较好,溶剂对PEP06肽溶解性的影响可能与pH有关。溶液浓度与成胶性正相关,随着溶液浓度的增加,溶液逐渐地变得黏稠,直至形成凝胶。阳离子交换层析后的PEP06肽不再形成凝胶,推测影响PEP06肽成胶性的因素除了PEP06肽自身结构和上述因素外,溶液中可能还有一种能促进PEP06肽形成凝胶的物质,该物质能通过阳离子交换层析去除。结论确定了溶剂、浓度和pH对PEP06肽成胶性的影响;建立了通过阳离子交换层析解决PEP06肽的黏稠和成胶问题的方法,使得高浓度PEP06肽溶液能够通过微孔滤膜过滤,为大规模生产提供了技术支撑。

重组凋亡素组合肽(B9)的纯化及抗U251胶质瘤活性的研究

目的构建凋亡素组合肽(B 9)基因工程菌,建立重组凋亡素组合肽的纯化方法,在细胞水平上研究重组凋亡素组合肽抗U 251胶质瘤细胞活性。方法以PE T 28a质粒为表达载体构建凋亡素组合肽基因工程菌;经过等电点沉淀、PA A沉淀和阳离子交换层析纯化重组凋亡素组合肽;获得的充足凋亡素组合肽处理U 251细胞,检测细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。结果建立了以等电点沉淀、PA A沉淀和阳离子交换层析为核心技术的纯化重组凋亡素组合肽的方法,纯化的凋亡素组合肽纯度达到了电泳纯。重组的凋亡素组合肽能诱导U 251细胞凋亡,抑制U 251细胞的增殖、迁移和侵袭。结论建立了纯化重组凋亡素组合肽的实验方法,重组凋亡素组合肽在细胞水平上诱导U 251细胞凋亡,抑制U 251细胞增殖、迁移和侵袭。

PUMA-BH3结构域肽的改造、表达及抗肿瘤活性

目的改造、表达人PUMA-BH3结构域基因,并检测其抗肿瘤活性。方法改造PUMA BH3结构域两端的氨基酸序列(A134G、G138A、Q151M),并在C端加上5个连续的精氨酸,人工合成相应的核昔酸序列,连接到质粒pTWIN1中,再转化至大肠埃希菌BI21(DE3)中表达,经几丁质亲和层析树脂一步纯化获得M28肽。分别用MTT比色法测定细胞增殖的抑制,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。结果M28肽对人SGC-7901胃腺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,且存在量效关系,活性强于PUMA-BH3肽。作用24h后,观察到细胞凋亡现象,M28肽处理组凋亡细胞数量较PUMA-BH3肽组明显增加,细胞凋亡率大于50%;弱荧光细胞比例增加到90 %以上,提示SGC-7901 细胞线粒体内膜功能受损。结论 M28肽具有更强抗肿瘤活性,且生产工艺简单,在肿瘤治疗上有潜在的应用价值。