单中心真实世界数据分析:表皮生长因子受体常见和少见突变型非小细胞肺癌靶向治疗疗效比较

背景表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)常见突变型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者靶向治疗疗效与少见突变患者存在差距,真实世界鲜有对两者疗效进行直接对比的研究。目的评估应用酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)靶向治疗对EGFR常见突变及少见突变患者临床预后的影响,并分析影响临床预后的因素。方法回顾性分析2019年8月1日-2021年12月31日在解放军总医院第一医学中心接受EGFR-TKIs治疗的EGFR常见、少见突变型晚期NSCLC患者临床资料,对两组患者的客观缓解率(objective response rates,ORR)、疾病控制率(disease control rates,DCR)、无进展生存期(progression-free survival,PFS)进行分析。结果共99例患者纳入研究,EGFR常见突变79例,少见突变20例。常见突变组ORR为63.3%,DCR为93.7%;少见突变组ORR为35.0%,DCR为65.0%;EGFR常见突变组疗效优于少见突变组(P<0.05)。Cox回归分析提示EGFR突变类型是影响NSCLC患者PFS的独立因素(P<0.05),Kaplan-Meier生存分析提示常见突变与少见突变患者接受靶向治疗预后差异较大(中位PFS:13.3个月vs 6.0个月,P=0.006)。结论与常见突变相比,少见突变患者靶向治疗疗效和预后均较差。

肺鳞癌三级淋巴结构特征及其对预后的影响

背景 肿瘤微环境内三级淋巴结构(tertiary lymphoid structure,TLS)具有招募、活化和增殖T淋巴细胞、B淋巴细胞的功能,是肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)的重要来源,已被证明与多种癌症的预后有关。目的 探究肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)患者组织内TLS特征及其对预后的影响。方法 回顾性分析2010-2022年解放军总医院和解放军第一四八医院42例经根治性手术切除且病理确认LUSC患者的临床资料和病理切片,分析LUSC病理组织切片TIL和TLS特征与LUSC临床病理特征的关系及预后。结果 42例中男性40例,女性2例,中位年龄65(范围:50~81)岁;未经新辅助治疗24例,接受新辅助免疫治疗18例。QuPath软件检测发现:新辅助免疫治疗患者相比未经新辅助治疗患者的TLS所含免疫细胞显著增多。TLS与临床指标关系分析中发现:新辅助治疗组较未经新辅助治疗组的TLS密度、圆形/椭圆形TLS密度以及最大TLS面积更高;N分期不同,圆形/椭圆形TLS密度不同,高细胞密度TLS密度不同;年龄越大,最大TLS面积更大;差异均有统计学意义(P<0.05)。经新辅助免疫治疗的LUSC患者免疫应答分析显示:缓解深度≥60%患者较缓解深度<60%患者TIL密度、圆形/椭圆形TLS密度、TLS中位面积、低细胞密度TLS密度、非规则TLS密度更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。未经新辅助治疗组22例患者生存分析显示,圆形/椭圆形TLS密度高组相较于密度低组具有相对更好的预后[中位总生存期(median overall survival,m OS):53.5个月vs 25.0个月,P=0.069],最大TLS面积高组相较于面积低组具有相对更好的预后[mOS:50.0个月vs 25.0个月,P=0.074],P值接近0.05。结论 接受新辅助免疫治疗者较未接受者、免疫治疗应答好者较应答差者具有更高的TLS特征,TLS密度、圆形/椭圆形TLS密度和最大TLS面积高可能预示预后良好。

激光显微切割技术富集肿瘤细胞在基因突变检测中的意义

目的探讨激光显微切割技术富集肿瘤细胞对检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变检测的影响以及其临床病理学意义。方法采用激光显微切割技术富集49例NSCLC患者的石蜡包埋样本的肿瘤细胞,采用PCR技术对EGFR基因第18、19、20、21号外显子片段进行扩增后直接测序,分析其结果并比较其与常规肿瘤组织筛选后进行EGFR基因突变检测结果的异同。结果 49例NSCLC样本中21例(42.9%)存在EGFR基因突变,包括第19号外显子13例,第21号外显子8例,没有发现两者同时突变的样本。分析外显子突变情况发现,利用激光显微切割技术富集的样本检测突变率42.9%(21/49),高于利用常规筛选后的突变率34.7%(17/49),两种方法的差异有统计学意义(P=0.045 5<0.05)。且比较两种方法,可以发现前者检测得到的突变峰峰高明显高于后者。结论利用激光显微切割技术富集肿瘤细胞能有效去除间质细胞对肿瘤细胞的基因组干扰,更能体现肿瘤细胞基因组状态,有效提高EGFR基因突变检测检出率,有利于患者靶向治疗的临床筛选。

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与临床病理相关性研究

目的探讨中国人群非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的临床病理学意义。方法采用荧光定量PCR法检测347例NSCLC患者癌组织中EGFR基因18、19、20、21号外显子突变状况,分析EGFR突变与临床病理学之间的关系。结果受检347例NSCLC样本中,检测出EGFR基因突变位点147个,发生在137例样本中(39.5%),其中18号外显子占总突变6.8%,19号外显子占40.1%,21号外显子占44.9%,20号外显子占8.2%,发现外显子存在同时突变的样本10例。其中女性患者突变率(56.5%)显著高于男性患者(25.9%),二者中差异极显著(P<0.01)。腺癌中变率为44.5%,鳞癌突变率为3%,低分化癌(非小细胞肺癌未分类)突变率为30.8%,腺鳞癌突变率为25%。腺癌EGFR突变率高于非腺癌(8/57),二者差异极显著(P<0.01)。年龄大小和取样不同与EGFR基因突变率无明显相关性。结论 NSCLC中EGFR基因突变常见于女性、腺癌,以第19号外显子缺失突变和第21号外显子点突变为主;利用荧光PCR法检测手术切除和穿刺活检样本突变率无明显差异,可有效用于EGFR基因突变检测。

运用数字PCR检测乳腺癌组织FFPE样品中人表皮生长因子受体2拷贝数的变化

目的:建立数字PCR(dd PCR)法检测乳腺癌福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)切片样品中人表皮生长因子受体2(HER2)的拷贝数变化(CNV),并与免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)结果比较,以寻求更客观、准确、通量的肿瘤标志物检测方法。方法:以细胞系293T、HOEC、SKOV3基因组DNA(g DNA)为模板,对靶基因HER2及校正基因CEP-17建立双通道dd PCR检测法,并对21例IHC检测HER2阳性(++/+++)的乳腺癌FFPE样品进行CNV(HER2/CEP-17)检测,与IHC、FISH结果比较。结果:单、双通道法对HER2 CNV检测结果一致;细胞及临床样品检测结果表明,dd PCR检测HER2 CNV的阴性、阳性Cut-off值分别为1.2、2.1,中间值为1.2~2.1。14例FISH阴性标本中,dd PCR的一致性为93%(13/14);3例IHC"+++"的样品中,FISH检测均为阳性,2例dd PCR检测为阳性,1例(17#)检测临界阳性。2例IHC"++"的样品,FISH检测阳性,但dd PCR检测为阴性。结论:dd PCR能检测样本HER2 CNV,且与FISH结果判读部分一致,具有临床应用前景,但仍需大量样品来进行验证及建立结果判断标准。

KRAS突变阳性的结直肠癌患者体细胞突变分析

目的分析KRAS突变阳性的结直肠癌患者的肿瘤相关基因突变特征,为其治疗和预后判断提供依据。方法入组2015年1月-2016年6月本院50例KRAS exon 2 G12/13突变阳性的结直肠癌肿瘤患者,用二代测序(NGS)技术检测其石蜡样本中59个常见肿瘤相关基因的热点突变。结果检测到除KRAS外的12个基因65种不同突变,其中突变样本超过10%的有TP53(62%)、APC(46%)、PIK3CA(22%)和SMAD4(14%)。这些基因的突变频率或者突变热点分布与肿瘤组织的生长存在相关性。结论 TP53、APC、PIK3CA、SMAD4与KRAS基因及其通路存在一定的相关性。

423例结直肠癌KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA基因突变与临床病理的关系分析

目的分析结直肠癌(colorectal cancer,CRC)肿瘤组织中KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA基因突变与临床病理的关系。方法选取2014年7月-2019年5月于解放军总医院第一医学中心行手术切除的423例原发性CRC患者肿瘤组织标本进行回顾性分析,采用扩增阻滞突变系统与Taqman探针相结合的方法检测KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA基因的体细胞突变热点,分析其与临床病理特征的关系。结果423例CRC中,4种基因(KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA)总突变率为58.87%(249/423),其中KRAS突变率为44.68%(189/423),NRAS突变率为4.73%(20/423),BRAF突变率为3.78%(16/423),PIK3CA突变率为5.67%(24/423)。此外还发现KRAS和PIK3CA共同突变率为3.07%(13/423);BRAF和PIK3CA共同突变率为0.95%(4/423)。KRAS基因在脉管内癌栓[OR:0.351,P=0.003]和淋巴结转移[OR:0.583,P=0.006]病例中突变率明显降低;NRAS基因在肿瘤高分化组(OR:5.984,P=0.026)中突变率明显升高。BRAF基因在右半结肠肿瘤中突变频率明显升高[OR:4.286,P=0.005]。KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA基因突变与性别、年龄、肿瘤大小、大体分型、神经侵犯、肝转移和临床分期等因素无关(P均>0.05)。结论本组结直肠癌患者中KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA这4个基因突变与大部分临床病理指标无关,但是KRAS突变较少出现在脉管内癌栓和淋巴结转移患者中,BRAF突变更多地出现在右半结肠。

非小细胞肺癌中EGFR和K-ras基因突变检测分析与病理特征的关系

目的探讨不同分型非小细胞肺癌的EGFR与K-ras基因突变及其相关病理特征的关系。方法基因测序方法检测260例非小细胞肺肿瘤患者肿瘤组织中的EGFR(18,19,20,21外显子)和K-ras(12,13,61密码子)基因的突变。结果 260例样本中,EGFR基因突变检出率为48.8%(127/260),突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。K-ras基因突变检出率为10%(26/260),其中12、13和61密码子均发现突变。受检的所有样本中没有发现EGFR与K-ras基因同时出现突变的情况。腺癌的EGFR突变检出率明显高于鳞状细胞癌等其他组织类型。在分化程度上,高分化与中分化癌基因突变检出率和中分化与低分化突变检出率比较差异显著(P<0.01)。EGFR突变与有无淋巴结转移无关(P>0.05)。K-ras基因突变与组织类型、患者性别、分化程度、有无淋巴结转移间无相关性。结论非小细胞肺癌EGFR基因突变检出率较高,K-ras基因突变检出率较低,且两种突变并不同时出现。EGFR基因突变与性别、肺癌组织类型、分化程度有关,存在多种突变。

中性粒细胞对肺鳞状细胞癌杀伤效应的研究

目的探索中性粒细胞(PMNS)对人肺鳞状细胞癌的杀伤效应。方法随机选取人肺鳞状细胞癌石蜡包埋标本300例,行G-CSF的免疫组化染色,分析其阳性强度与中性粒细胞分布的关系;分离人肺鳞状细胞癌患者及健康志愿者的外周血中性粒细胞各5例,体外杀伤建系及原代培养的肺鳞状细胞癌细胞;MTT法检测杀伤效应,观察中性粒细胞和肺癌细胞的形态变化。结果 300例人肺鳞状细胞癌中221例可见中性粒细胞浸润,且其浸润程度和G-CSF的阳性强度成显著正相关(P<0.01),HE切片可见中性粒细胞致肺鳞癌细胞凋亡现象,其杀伤效应需直接接触癌细胞,并围绕癌细胞形成花环状,PMNs∶癌细胞=500～600∶1时,杀伤效率最高。结论中性粒细胞可在体内、外对肺鳞状细胞癌具有杀伤作用,其杀伤效应需要和肿瘤细胞直接接触,癌细胞分泌的G-CSF能促进PMNs对肿瘤的杀伤作用。

成人肝脏间叶性错构瘤的临床病理学分析

目的探讨成人肝脏间叶性错构瘤(MHL)的临床病理及分子遗传学特征。方法收集2009-2022年解放军总医院第一医学中心病理科明确诊断的成人MHL病例共5例,对其进行组织形态学观察及免疫组织化学染色,并运用二代测序方法进行基因检测。结果5例中男性4例,女性1例,年龄46~67岁,平均年龄56.2岁。最大直径5.3~13.5 cm,平均直径9.2 cm。肿瘤大体可以为囊性、实性或囊实性混合。病理组织学上5例MHL中有4例发生恶性转化,其中3例恶变为未分化胚胎性肉瘤,1例恶变为恶性孤立性纤维性肿瘤并检测到NAB2-STAT6基因重排。结论成人MHL是一种罕见的、具有恶性潜能的肿瘤,术前影像学检查诊断难度大。细针活检很少用于诊断,建议手术切除有症状或增大的病变以排除恶性肿瘤的可能性并进一步诊断。基因检测结果显示了MHL复杂的基因学改变,并发现成人MHL可以恶变为恶性孤立性纤维性肿瘤,推测全基因组分析对于确定MHL独特的分子特征以及寻找治疗干预的潜在靶点是必要的。

左右半结肠癌分子生物学表达与临床病理特征关系

目的分析左右半结肠癌肿瘤组织中KRAS/NRAS/BRAF基因突变状态及错配修复蛋白(MSH2/MSH6/PMS2/MLH1)表达与临床病理的关系。方法选取解放军总医院2014-07-2019-05行手术切除的原发性结肠癌(CC)肿瘤组织标本837例进行回顾性分析,采用实时荧光定量PCR法检测KRAS/NRAS/BRAF基因的体细胞突变热点,采用免疫组化方法检测错配修复蛋白(MSH2/MSH6/PMS2/MLH1)的表达,采用SPSS 21. 0统计软件及卡方检验分析左右半结肠与它们之间的临床病理特征的关系。结果 837例标本中结肠癌与年龄、家族史、大体分型、组织学类型、分化程度、脉管癌栓和临床分期等无显著性差异;左半结肠中男性415例(66. 1%),女性213例(33. 9%);右半结肠中男性114例(54. 6%),女性95例(45. 5%);左半结肠男性占比显著大于右半结肠,右半结肠女性显著大于左半结肠(χ2=8. 975,P=0. 003);左、右半结肠中<5 cm的肿瘤分别为409例(65. 1%)、83(39. 7%),≥5 cm的肿瘤分别为219例(34. 9%)、126例(60. 3%),具有统计学差异性(χ2=41. 803,P=0. 000);左半结肠神经侵犯明显高于右半结肠(χ2=5. 344,P=0. 027);四种错配修复蛋白(MSH2、MSH6、MLH1、PMS2)的缺失率分别为2. 3%(19/837)、2. 9%(24/837)、6. 1%(51/837)、6. 7%(56/837),其中左半结肠中分别为1. 8%、1. 9%、3. 2%、3. 2%,右半结肠中分别为3. 8%、5. 7%、14. 8%、17. 2%,右半结肠的缺失率高于左半结肠,MSH2蛋白表达中无显著性差异(P>0. 05),MSH6、MLH1和PMS2中具有统计学差异性(P<0. 05);KRAS/NRAS/BRAF基因总的突变率为53. 0%,分别为45. 4%(380/837)、4. 5%(38/837)、3. 1%(26/837),左、右半结肠KRAS/NRAS基因状态无显著性差异,右半结肠BRAF基因突变率显著高于左半结肠(6. 2%vs 2. 1%,χ2=8. 973,P=0. 005)。结论左右半结肠癌患者中KRAS/NRAS/BRAF基因的突变状态和四种错配修复蛋白的表达,与大部分临床病理指标无关,但是左半结肠癌中男性居多、右半结肠癌女性居多。左半结肠癌更易发生神经侵犯,右半结肠癌患者肿瘤比左半结肠大,MSH6、MLH1和PMS2蛋白以右半结肠癌缺失率高,BRAF突变更多地出现在右半结肠癌。

类固醇激素反应性慢性淋巴细胞性炎症伴脑桥血管周围强化症演变为淋巴瘤样肉芽肿1例临床病理观察

目的探讨类固醇激素治疗后反应性慢性淋巴细胞性炎伴脑桥血管周围强化症(CLIPPERS)发展为淋巴瘤样肉芽肿的发病机制、临床表现及病理学特征。方法结合临床、影像、组织学特点及预后对解放军总医院第一医学中心病理科1例患者资料进行回顾性分析。结果本文1例患者,女性、52岁,主因出现头晕、行走不稳,口角左歪10天入院;随后临床症状加重,并出现右侧肢体活动笨拙,行走困难,右侧口角歪斜,饮水呛咳,言语不清,视物模糊,右侧听力下降。影像学起病时可见双侧枕叶、脑桥及小脑半球多灶点、斑片状信号,随后临床给予激素治疗,症状减轻且原有病灶减弱或消失;6个月后再次发病可见右侧侧脑室旁、右侧桥臂出现新的异常信号。病理学改变:(第一次)送检少许破碎小脑皮层组织,小脑颗粒细胞层、白质区见多发小灶肉芽肿样炎,病变有组织细胞及淋巴细胞构成,不伴有坏死及多核巨细胞反应,并血管周围淋巴组织套袖形成,未见血管壁坏死及中性粒细胞浸润,分子检测EBER阴性,考虑为CLIPPERS综合征;(第二次)镜下见富于淋巴、组织细胞增生性病变伴大片坏死,其间偶见核大异型单核及多核细胞,部分呈围血管性排列及血管破坏性改变,分子检测EBER阳性细胞5~10个/HPF,结合组织形态、免疫组化及分子病理结果,符合淋巴瘤样肉芽肿(II级)。结论CLIPPERS是新近提出的具有独特放射学和临床特征的中枢神经系统病变的综合征,该综合征确切的病因不详,在病理上缺乏特异性的生物标志物及组织学改变,可能是一种具有异质性病因的综合征,部分病例存在向中枢神经系统淋巴瘤转化的风险(即淋巴瘤的前哨病变)。增加EBV原位杂交分子检测有助于诊断及鉴别诊断,对治疗及预后具有重要意义。

基于实时荧光定量PCR技术的肿瘤分子病理检测临床实践中国专家共识(2023版)

基于实时荧光定量PCR(qPCR)技术的肿瘤分子病理检测具有操作简便、报告周期短、灵敏度高、结果判读标准化等优点。然而,在临床实践中,qPCR技术的性能验证、质量管理、异常结果处理等问题相对复杂,缺乏统一规范和标准。因此,专家共识旨在从qPCR检测全流程角度,对影响检测结果的重要环节、检测过程中遇到的常见问题及异常结果判定及处理等提供规范化意见,达成基于qPCR技术的肿瘤分子病理检测临床实践中国专家共识,以规范检测流程并提高结果准确性,促进技术发展和更为广泛的临床应用。

二代测序技术检测肺癌相关基因突变状态临床病理意义

目的肺癌的靶向治疗前需检测相应驱动基因和耐药基因的突变情况。二代测序技术可以单次高通量检测多个基因状态,辅助临床诊疗。本研究探讨二代测序技术检测肺癌相关基因突变状况,并初步分析其突变的临床病理意义。方法回顾性分析解放军总医院2017-06-01-2017-10-30行手术切除及活检的肿瘤组织>20%的肺癌标本123例。采用Ion Torrent二代测序平台分别检测34个基因共586个突变位点,检测结果对照相应的基因数据库分析。结果123例肺癌样本TP53的突变率是93.50%(115/123),EGFR的突变率是43.09%(53/123),KRAS是13.01%(16/123),STK11是8.13%(10/123),ERBB2、BRAF均为6.50%(8/123),CTNNB1是5.69%(7/123),MET是3.25%(4/123),PTEN、MAP2K1均为2.44%(3/123),SMAD4、PIK3CA和IDH1均为1.63%(2/123)。ALK是4.07%(5/123),RET是3.25%(4/123),ROS1是0.81%(1/123)。≥61岁患者的TP53突变率明显高于<61岁,χ~2=3.992,P=0.046。EGFR基因在年龄<61岁(χ~2=6.534,P=0.011)、不吸烟(χ~2=10.559,P=0.001)的患者中突变率明显升高。女性患者的ERBB2突变率高于男性,χ~2=5.081,P=0.024。BRAF基因突变率在分化程度较低的患者中较高,χ~2=8.261,P=0.016。STK11基因突变在年龄≥61岁(χ~2=4.516,P=0.034)、分化程度较低(χ~2=7.465,P=0.006)的患者中突变率较高。检测到的基因突变主要发生在腺泡为主的组织类型,同时查见多个基因突变共存的病例。52.94%(18/34)的被检测基因有特定的靶向药物,47.06%(16/34)的检测基因有尚处于临床实验阶段的靶向药物。结论采用Ion Torrent二代测序平台可以用于临床观察肺癌基因突变谱的改变,对后期选择针对这些基因的靶向治疗具有广阔的应用前景。

支气管肺癌组织中包含氧化还原酶的WW域还原蛋白、同源性磷酸酶-张力蛋白的表达及临床意义

目的探讨包含氧化还原酶的WW域抗原(WWOX)蛋白与同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在支气管肺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测WWOX与PTEN蛋白在87例支气管肺癌组织标本与23例正常肺组织标本中的表达,分析WWOX与PTEN蛋白表达与支气管肺癌患者临床病理特征之间的关系,并探讨两者在支气管肺癌组织中的表达相关性。结果 WWOX与PTEN蛋白在支气管肺癌组织中的的阳性表达均显著低于正常组织中的表达(χ2=14.810,P<0.001;χ2=17.363,P<0.001)。WWOX蛋白表达与患者的性别、癌组织分化程度、临床分期、是否发生淋巴结转移均有关(P<0.05),但与年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);而PTEN蛋白则只与是否发生淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理参数均无关(P>0.05)。WWOX与PTEN蛋白的表达之间不存在关联性(χ2=2.098,P=0.147)。结论 WWOX与PTEN蛋白可能都参与了支气管肺癌的发生与恶性发展,但两者是通过不同的途径发生作用。

荧光原位杂交检测技术共识

荧光原位杂交检测是临床病理检测中广泛运用的一种分子细胞遗传学诊断技术,在标本处理、检测步骤、结果判读、质量控制等各个环节实现检测的规范化和标准化,对提高检测的准确性和降低室间差异具有重要的现实意义,同时也为辅助病理诊断和预测临床靶向治疗的疗效提供更为准确的依据。