小鼠Klf11基因真核表达载体的构建、结构功能预测与初步验证

【目的】旨在克隆小鼠Kruppel样转录因子家族成员11(KLF11)基因并构建其真核表达载体,在小鼠AML12肝实质细胞系中过表达Klf11后探究其对脂代谢相关基因的调控作用。【方法】以小鼠肝脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增小鼠Klf11基因的蛋白编码区(CDS),随后将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,构建重组质粒。利用酶切、PCR及测序对重组质粒进行鉴定,将鉴定正确的质粒命名为pcDNA3.1-mKLF11。利用在线软件对Klf11序列及其编码蛋白进行生物信息学分析。使用免疫组化技术检测KLF11在小鼠肝脏组织中的表达。将pcDNA3.1-Puro-N-3HA与pcDNA3.1-mKLF11质粒分别转染至HEK293T和AML12细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹技术(Western blotting)对小鼠Klf11基因的表达效果进行检测。最后通过qPCR和油红O染色,检测游离脂肪酸(FFA)处理后Klf11的过表达对AML12细胞脂质代谢的影响。【结果】(1)PCR、酶切及测序结果显示,成功克隆了小鼠Klf11基因的CDS区片段并构建了pcDNA3.1-mKLF11重组质粒;(2)生物信息学分析结果显示,小鼠Klf11基因的编码区序列与大鼠和人类的相似性较高,小鼠KLF11蛋白表现出亲水性特征,二级结构包括无规卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角,不存在信号肽,且不存在跨膜区;小鼠KLF11蛋白的三级结构与人类和大鼠的KLF11蛋白相比均存在显著差异;(3)免疫组化结果表明,KLF11主要表达于小鼠肝细胞细胞核;(4)qPCR和Westren blotting结果显示,在HEK293T和AML12细胞中,pcDNA3.1-mKLF11转染组Klf11基因的mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组;此外,在FFA处理的条件下,Klf11过表达后小鼠AML12细胞中脂代谢相关基因Fasn、Acaca和Plin2的表达量显著升高,并且过表达组中细胞内脂滴数量增加。【结论】成功构建了小鼠Klf11基因的真核表达载体,对小鼠Klf11基因及其编码蛋白进行了生物信息学分析。免疫组化结果表明KLF11主要表达于小鼠肝细胞细胞核。此外,在AML12细胞中成功过表达KLF11蛋白,并证明Klf11的过表达显著促进了AML12细胞的脂质沉积,为后续探究Klf11基因调控哺乳动物肝脏脂质代谢的作用机制提供依据,为开发家畜脂质代谢障碍疾病防治的新药物提供新思路。

基于知识图谱技术的上市企业产业链风险预测

随着产业互联网的飞速发展,面对海量的产业数据,构建知识图谱等自然语言处理应用需求逐渐增长。产业信息的有效管理和挖掘有助于及时发现所面临的风险和机遇,产业链风险预测可以为监管部门提供产业风险预警手段。针对以上问题,本文以知识图谱相关知识为科学依据,提出了基于知识图谱技术的产业文本数据实体标注准则,对海量上市公司产业信息进行知识抽取,形成自上而下的三维产业知识图谱。同时研究了上市企业产业知识图谱特定产业链知识的内在联系,总结规律并结合产业链往年时序图特征信息实现图谱推理,成功的对产业链中上市企业市值等信息进行了预测和分析。

以孤立性眩晕为首发症状的急性脑梗死患者10例

目的探讨以孤立性眩晕为首发症状的急性脑梗死(ACI)的特点及溶栓治疗预后。方法对10例以孤立性眩晕起病,诊断为ACI并进行溶栓治疗患者,分析包括临床表现、影像学特征、病因分型、预后等临床资料。结果所有患者均有孤立性眩晕出现,时间长短不一。超早期给予溶栓治疗,有9例预后较好,1例因急性心肌梗死死亡。结论孤立性眩晕患者要警惕后循环卒中,早期发现其他神经功能缺损体征并给予溶栓治疗,效果较好。

成人癫痫持续状态的神经电生理研究进展

癫痫持续状态(status epilepticus,SE)是仅次于急性缺血性卒中的神经系统急症,早期诊断及治疗对于患者的生活质量有着重大意义。脑电图(electroencephalogram,EEG)作为神经电生理的一个分支,是诊断SE,研究SE生理病理机制,评估治疗效果及预后的重要工具。本文综述了近年SE神经的电生理研究进展。

成熟与未成熟小鼠树突状细胞的生物免疫学特性研究

目的 研究小鼠骨髓成熟树突状细胞（mDC）与未成熟树突状细胞（imDC）的生物免疫学特性.方法 体外诱导培养小鼠骨髓imDC,经肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激获得mDC.用小鼠CD11c免疫磁珠纯化DC.电镜观察DC的细胞形态.流式细胞术（FCM）检测细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达.用细胞增殖检测试剂（CCK-8）检测混合淋巴细胞反应（MLR）中DC刺激同种异基因T细胞的增殖能力.实时荧光定量PCR（QPCR）检测DC上细胞因子mRNA的表达.ELISA检测DC培养上清中的细胞因子表达.结果 电镜观察：imDC比mDC细胞突起少、短.胞质内有更多吞饮泡及溶酶体.FCM检测imDC上MHC-Ⅱ（27.2％）、CD80（27.6％）、CD86（29.5％）的表达水平均显著低于mDC MHC-Ⅱ（97.7％）、CD80（97.2％）、CD86（96.4％）.MLR中相同反应比例imDC刺激T细胞的增殖能力,1∶5（1.63±0.04）,1∶10（1.50±0.08）,1∶20（1.28±0.07）,1∶40（1.19±0.04）,显著低于mDC 1∶5（2.21±0.09）,1∶10（1.92 ±0.02）,1∶20（1.64±0.01）,1∶40（1.45±0.06）,两组间差异均有统计学意义（均P＜0.01）.QPCR检测imDC上IL12p35（0.66±0.13）、IL12p40（0.57±0.10）、IFN-γ（0.74±0.08）mRNA相对表达量（mDC为对照）显著低于mDC（1.00±0.00,P＜0.05）,而TGF-β（1.35±0.09）显著高于mDC（1.00±0.00,P＜0.05）.ELISA法检测imDC分泌IL12p70（6 ±4）、IFN-γ（56±15）显著低于mDC IL12p70（120±22）、I FN-γ（90±15,P＜0.05）,而TGF-β（176±23）显著高于mDC TGF-β（55±18,P＜0.05）.结论 imDC低表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,高表达TGF-β,不能活化T细胞,具有耐受原性.mDC高表达共刺激分子、MHC-Ⅱ和Th1类细胞因子,可激活初始T细胞,具有免疫原性.