检测植物DNA扩增多态性方法的比较和改进

以辽东栎(Quercus liaotungensis Koidz.)、锦鸡儿(Cargagana ssp.)和野大豆(Glycine soja(L.)Sieb.etZucc.)为材料,比较了随机扩增多态DNA(RAPD)和DNA扩增指纹(DAF)方法。用RAPD的琼脂糖胶电泳和溴乙锭染色,RAPD和DAF谱一般不足10条带。用DAF的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和银染,极大地提高了RAPD的灵敏度和分辨率,多达20～40个产物。用3＇末端完全相同的引物,RAPD和DAF有同样的扩增谱,说明两种方法有相似的机理。降低胶的浓度可提高RAPD和DAF的分辨率,达40～80条带。琼脂糖电泳分离的溴乙锭显示的单荧光带,用PAGE和银染可分辨出多个片段。分子克隆证实单荧光带的分子量异质性。在用Taq DNA多聚酶的条件下,RAPD和DAF的再现性均良好。

吸胀对水稻种子愈伤组织诱导及其性状的影响

水稻种子经浸种吸胀处理后,浸种介质的pH下降,种子细胞透性增加;种子胚芽生长加快,种子愈伤组织诱导和生长均受抑制。种子可溶性蛋白谱和愈伤组织过氧化物酶同工酶谱亦发生变化,对所诱导的种子愈伤组织则有促进分化的后效应。此种后效应因品种及所采用的诱导培养基成分不同而异。

生物大分子的非放射性标记

无论是克隆植物基因还是研究基因表达都离不开探针的标记和检测。历来所用的放射性同位素标记方法存在一些缺点。一是要预防核辐射对人体的损伤,操作不方便;二是为防止污染环境,必须谨慎地处置放射性废弃物;三是放射性标记的探针使用时间短,例如最常用的^(32)P半衰期仅14.3天,标记的探针要随时标记随时使用,放置不用则放射性随时间指数下降。