基于TRAF1/ASK1/JNK通路研究黄精水提物对过食“辛辣醇酒”致胃黏膜损伤小鼠的保护作用

为探讨黄精水提物对胃阴亏虚型胃黏膜损伤小鼠的改善作用和潜在机制,采用ICR小鼠每天灌胃1次辛辣物酒混溶液连续6周,建立胃阴亏虚型胃黏膜损伤小鼠模型。造模成功后,将模型小鼠按体质量随机分为模型组、黄精水提物0.5 g·kg^(-1)组、黄精水提物1.0 g·kg^(-1)组。模型组和各给药组每天继续灌胃1次辛辣物酒混溶液,同时给药组按照剂量灌胃相应药物,连续7周。给药期间,检测各组小鼠胃阴亏虚证相关中医证候指标;末次给药后解剖取胃组织观察其组织形态学变化,检测胃组织匀浆中抗氧化酶活性,酶联免疫吸附测定法、免疫组化法检测胃组织中炎症因子的表达,Western blot法检测肿瘤坏死因子受体相关因子1(TNF receptor-associated factor 1,TRAF1)/凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal regulating kinase 1,ASK1)/c-Jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase, JNK)通路相关分子的蛋白表达,免疫荧光法检测凋亡因子的表达。结果显示,黄精水提物能有效改善小鼠的胃阴亏虚证;改善胃黏膜组织病变;提高胃组织中抗氧化酶活性(P<0.05,P<0.01);降低胃组织中促炎因子的水平(P<0.05,P<0.01);降低胃组织TRAF1/ASK1/JNK通路相关分子的蛋白表达(P<0.01);降低胃组织促细胞凋亡因子表达,提高B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达。以上提示,黄精水提物能缓解饥而不欲食、口干渴、大便干结等胃阴亏虚证证候,并能改善过食“辛辣醇酒”引起的胃黏膜损伤,其作用机制可能与抑制TRAF1/ASK1/JNK通路减少胃组织细胞凋亡和炎症有关。

探讨保元汤加减方通过AMPK/SIRT1/PGC-1α通路对小鼠的抗疲劳作用

目的探讨保元汤加减方(人参、黄芪、甘草、肉桂、红景天)缓解疲劳的作用及机制。方法用HPLC检测保元汤加减方主要成分及含量。将160只SPF级ICR雄性小鼠分为4部分(各40只),每部分均完全随机分为空白对照组(等体积纯化水)及保元汤加减方低、中、高剂量(1.9、2.1、2.3 g/kg)组,各组每日灌胃1次,共30 d。末次灌胃后取材并处死。(1)40只小鼠分别于第21天检测行为学指标(抓力、背温、自主活动次数、转棒疲劳时间),第30天检测负重游泳时间。(2)40只小鼠用于检测肝/肌糖原水平。(3)40只用于检测血乳酸(BLA)含量及计算血乳酸曲线下面积。(4)40只小鼠用于检测机体代谢产物[血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、BLA]水平,氧化应激相关酶[骨骼肌及心脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性,血液运氧能力[全血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、平均血红蛋白浓度(MCHC)],三磷酸腺苷(ATP)相关酶[骨骼肌及心脏中Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)及血清中肌酸激酶(CK)]活性,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路相关蛋白表达。结果保元汤加减方中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、红景天苷、毛蕊异黄酮含量分别为8.15、3.82、1.07、0.41、0.067 g/L。各剂量保元汤加减方可增加心脏与骨骼肌中Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、SDH、CAT、SOD活性(均P<0.05);降低小鼠心脏与骨骼肌中MDA水平(均P<0.05);降低小鼠血清中CK、LDH水平(均P<0.05);增加肝糖原、肌糖原储备量(均P<0.05);降低小鼠血清BUN水平与BLA曲线下面积(均P<0.05);增加全血RBC、HGB与MCHC(均P<0.05);增加小鼠骨骼肌和心脏p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、TFAM蛋白表达(均P<0.05)。结论保元汤加减方可能通过激活骨骼肌、心脏中AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,增强线粒体能力,减少机体代谢产物的积累,抑制机体氧化应激与增加血液运氧能力,达到抗疲劳的作用。