mT/mG;Wnt1-Cre小鼠肺组织神经嵴细胞的分离培养与特征鉴定

目的体外分离培养小鼠肺组织中的神经嵴细胞(NCCs),并鉴定该细胞的特性,为研究肺损伤及修复提供新的细胞模型。方法将mT/mG双荧光报告小鼠和Wnt1-Cre转基因小鼠杂交,筛选获得增强型绿色荧光蛋白(EGFP)永久标记NCCs的mT/mG;Wnt1-Cre转基因小鼠。用酶解法制备小鼠肺组织单细胞悬液,用流式细胞仪分选获得EGFP+的细胞(即为NCCs)。用经实验室优化的DMEM/F12培养基进行原代培养,用细胞免疫荧光染色法对NCCs进行特征鉴定,使用小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基定向诱导NCCs分化。结果成功通过杂交筛选得到EGFP永久标记NCCs的mT/mG;Wnt1-Cre转基因小鼠,并从肺组织中分离获得高纯度的NCCs,其能够在体外进行培养,形态为梭形,类似成纤维样贴壁增殖,NCCs表达神经嵴干细胞标志物Sox10,能被定向诱导分化为成骨细胞。结论从mT/mG;Wnt1-Cre转基因小鼠肺组织中分离、培养的NCCs增殖稳定,具有神经嵴干细胞特征,可为肺组织损伤和修复研究提供新的细胞模型。

尘肺病患者外周血核糖体DNA拷贝数变化及影响因素研究

目的 了解尘肺病患者外周血核糖体DNA (rDNA)拷贝数变化及其影响因素,为尘肺病早期诊断与治疗提供依据。方法 选择某定点医院就诊的尘肺病患者88例,无尘肺病史和粉尘暴露史的社区居民71人作为对照。通过问卷调查收集年龄、吸烟、饮酒和累计接触粉尘时间等资料;采用实时荧光定量PCR法检测外周血45S rDNA和5S rDNA拷贝数,比较两组间差异;采用多重线性回归模型分析45S rDNA和5S rDNA拷贝数的影响因素。结果 尘肺病组年龄M(QR)为56.00 (15.25)岁,吸烟占56.82%,饮酒占62.50%,累计接触粉尘时间为(12.40±8.08)年;对照组年龄M(QR)为64.00 (37.00)岁,吸烟占32.39%,饮酒占26.76%。尘肺病组45S r DNA拷贝数M (QR)为1.29 (0.59),低于对照组的2.10 (1.88);尘肺病组5S rDNA拷贝数为5.33 (0.85),高于对照组的4.66 (1.34)(均P<0.05)。多重线性回归分析结果显示,年龄(β=-0.034)、患尘肺病(β=-1.595)是45S rDNA拷贝数的影响因素;年龄(β=-0.013)是5S rDNA拷贝数的影响因素;年龄(β=0.018)是尘肺病组5S rDNA拷贝数的影响因素(均P<0.05)。结论 与无尘肺病史且无粉尘暴露史的人群比较,尘肺病患者外周血45S rDNA拷贝数降低,5S r DNA拷贝数升高。

非暴露式气管灌注法建立小鼠矽肺纤维化模型

目的建立一种简便的无创气管灌注构建小鼠矽肺纤维化模型的方法。方法将无特定病原体级的C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组15只。麻醉后,采用22G动静脉留置针经小鼠口腔进行气管插管,模型组小鼠灌注质量浓度为25 g/L的二氧化硅混悬液0.1 mL,对照组小鼠灌注等体积0.9%氯化钠溶液。于造模后第7、14和30天时,测定小鼠体质量,观察肺组织形态与病理变化;采用免疫荧光法检测造模后第30天小鼠肺组织中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)蛋白的表达。结果实验期间,2组小鼠均无死亡;2组小鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠于染尘后第7和14天肺组织呈粉灰色、色泽不均一;染尘后第30天肺组织呈灰色、质地硬,肉眼可见分布不匀的矽结节。肺组织病理检查结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肺组织炎症反应持续性加重,肺泡间隔增厚,炎症细胞浸润并逐渐聚集成团,细胞性结节数量逐渐增多。染尘后第30天,模型组小鼠肺α-SMA和COL1A1蛋白相对表达水平均高于对照组[中位数:72.59 vs 5.91,35.62 vs 10.07,P值均<0.05]。结论采用22G动静脉留置针经小鼠口腔气管灌注二氧化硅混悬液的方法,可成功构建矽肺纤维化动物模型;该方法简便、安全、有效,值得推广。