某部2006-2009年新兵结核感染状况调查

【目的】掌握驻京部队近年来入伍新兵结核感染状况,了解其动态变化趋势,为部队结核病防治提供决策依据。【方法】选择驻京部队2006-2009年入伍新兵20 813人,按城市籍新兵和农村籍新兵分组,进行结核菌素(purified protein derivative,PPD)试验,每人0.1 ml、5 IU,于左前臂掌侧中部内侧皮内注射,72 h查验反应,以双上臂无卡介苗接种疤痕而结核菌素试验阳性者作为结核感染率。【结果】结核菌素试验结果阳性率与强阳性率分别为53.1%(11 058人)、3.10%(645人),无卡痕人数11 174人(53.7%),结核感染率为30.7%,平均年感染率为1.91%;城市籍新兵结核感染率(32.9%)明显高于农村籍新兵(29.3%,P<0.05)。【结论】在新兵中进行结核菌素试验调查,可以监测新兵结核感染率,筛选卡介苗接种对象,对结核菌素强阳性者可采取预防性治疗措施。

PstS1-卡介苗重组疫苗的构建

目的:构建结核分支杆菌分泌蛋白磷酸盐特异转运系统1(PstS1)的重组卡介苗。方法:以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板,通过PCR扩增获得PstS1基因序列;将PstS1基因与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达质粒PMD31重组,得到S-PMD31重组质粒,对S-PMD31重组质粒进行HindⅢ、BanHⅠ双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌,用IPTG对工程菌株进行诱导表达,并通过电穿孔技术将S-PMD31重组质粒导入卡介苗中构建重组卡介苗。结果:用引物P1、P2对结核分枝杆菌H37RV基因组进行PCR扩增获得长为1 100 bp的PstS1基因序列,S-PMD31重组质粒的HindⅢ、BanHⅠ双酶切及测序鉴定证实:PstS1基因正确插入载体PMD31中,并能在大肠杆菌中诱导表达。通过质粒提取及PCR扩增表明重组质粒正确导入卡介苗中。结论:成功地构建了PstS1重组卡介苗,预期能提高卡介苗的免疫原性和保护力。

重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值

目的 探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法 以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论 rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。

结核分支杆菌MPT64基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达、纯化和诊断运用

目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组MPT64蛋白,分析其生物学、免疫学特性,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分支杆菌H37Rv中获得了MPT64基因,并构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳重组蛋白;Western印迹及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析重组蛋白免疫原性,并检测血清的抗结核抗体。结果构建了能表达重组MPT64的大肠杆菌工程菌,表达的重组蛋白蛋白为可溶性形式,表达量占细胞总蛋白的30%,分子量约23kD。经离子交换柱纯化后,重组蛋白纯度达90%以上。Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ELISA分析表明该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论该实验获得了能高效表达MPT64蛋白抗原的大肠杆菌工程菌。纯化的该重组蛋白具有特异的免疫原性,有一定的诊断运用价值。

驻京部队2003～2006年新兵结核感染情况调查

目的掌握驻京部队近年来入伍新兵结核感染状况,了解其动态变化趋势,为部队结核病防治提供决策依据。方法选择驻京部队2003-2006年入伍新兵23 238人,进行结核菌素（PPD）试验,用国产PPD0.1 mL,5 IU皮内注射,72 h查验反应,以双上臂无卡介苗接种疤痕而结核菌素试验阳性者作为结核感染率。结果结核菌素试验结果阳性率为49.9%（11 593人）,强阳性率为2.9%（678人）,无卡痕人数13 665人（58.8%）,无卡痕阳性人数4 104人,结核感染率为30.0%,年感染率为1.88%;城市籍新兵结核感染率（33.7%）明显高于农村籍新兵（27.9%,P〈0.05）。结论在新兵中进行结核菌素试验调查,可以监测新兵结核感染率,筛选卡介苗接种对象,对结核菌素强阳性者可采取预防性治疗措施。

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的 :研究结核分枝杆菌重组 16 0 0 0蛋白 (rPA16 )诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法 :家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组 ,皮下多点注射分别进行免疫。 6次免疫后采血 ,双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验 (ELISA)跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应 ;同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应 ,并用rPA16抗原检测人血清标本 ,分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果 :兔血清抗体效价结果显示 :5个月后 ,加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体 ,不加佐剂组 2个月后血清抗体检测即为阴性。ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感 ,rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达 1∶6 4 0 0 ,不加佐剂组的血清抗体滴度仅为 1∶4 0 0。ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异性较好 ,仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应 ,与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性。同时又分析了rPA16抗原的特异性 ,与人型PPD相比 ,该抗原只与所试各类分支杆菌、BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应 ,而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应。ELISA检测血清标本结果 :肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性?

1992～2005年全军肺结核监测与调查分析

目的掌握军队肺结核发病状况,为控制部队结核病疫情提供依据。方法通过全军疾病监测中心获得军队肺结核发病报告例数,对肺结核病例进行分析。结果1992-2005年,军队肺结核年发病报告例数为1 060-2 272例,占传染病年报告总数的10.1%-24.5%,列军队传染病年发病序位的第2位。新发肺结核平均发病年龄为28.9岁;2005年平均住院天数（41 d）比1992年（79 d）降低48.1%（38 d）。肺结核病例的职别：战士占68.1%,干部占29.9%（含老干部3.5%）,职工占2.0%。肺结核分型：继发型76.8%,结核性胸膜炎11.4%,继发型＋胸膜炎8.6%,原发型1.8%,血行播散型1.4%;痰菌阳性肺结核占发病总数18.2%。新发肺结核治疗采用6-9个月短程化疗,治愈率达98%,远期复发率1%-2%。结论军队肺结核发病以因症就诊与非结核中心发现为主,以战士发病为主,以继发型肺结核为主。肺结核治疗以短程化疗为主。

重组结核分枝杆菌16000蛋白抗原(rPA16)豚鼠皮肤试验效果的研究

目的 :以豚鼠为动物模型 ,分析重组 16 0 0 0蛋白抗原rPA16能否引起迟发型超敏反应 (DTH)。方法 :连续 3次皮下注射结核分枝杆菌H37Rv热灭活菌体 ,使豚鼠致敏后进行皮肤试验。以生理盐水为阴性对照 ,PPD为阳性对照组 ,重组蛋白则设置 0 .1,0 .2 ,0 .4μg三个剂量 ,分别进行背部皮内注射 ,注射后 2 4～ 72h观察豚鼠注射局部皮肤的皮痘、硬结程度。结果 :0 .1～ 0 .4μg/ 0 .2ml的重组蛋白抗原rPA16在 48～ 72h阳性反应平均直径与PPD相比均无显著差异 (均P >0 .1) ,3种浓度的重组蛋白豚鼠皮肤反应的阳性率之间也无显著差异 (P >0 .1)。 48h为rPA16引起豚鼠皮肤反应的较佳测量时间。结论 :重组结核分枝杆菌 16 0 0 0蛋白抗原与PPD相比 ,所引起的豚鼠皮肤DTH的反应能力基本相似 。

Ag85a-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85a的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得约800bp的ag85a基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明ag85a基因正确插入到pYUB295质粒中。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-ag85a重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:ag85a-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85a蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了ag85a-卡介苗重组疫苗。

部队住院肺结核病例35年抽样调查分析

目的探讨部队住院肺结核病情变化特点,为部队结核病防治工作提供依据。方法对1972-2006年驻京部队住院肺结核病例进行抽样调查,每4～5年抽查1年。结果部队住院肺结核1538例,男性为87.7%～95.0%;干部为30.2%～39.4%,战士为51.6%～64.0%,职工为0.0%～13.3%。平均发病年龄27.0～30.9岁,≥60岁组2006年比1972年增加950%,年均递增7.2%。平均住院天数由1972年196.8d下降为2006年42.1d。浸润型肺结核无明显变化,血行播散型肺结核下降46.7%,原发型肺结核与慢性纤维空洞型肺结核均下降为0.0%,结核性胸膜炎上升221.6.%。病灶范围≤5/6、≤6/6的分别下降79.5%和81.0%。肺结核空洞发生率下降58.8%,痰菌阳性率下降55.3%。新发肺结核实施短程督导化疗比传统标准化疗疗程缩短1/2～2/3,治愈率由85.0%提高到98.5%,5年复发率由7.5%降至1.2%。结论驻京部队实施的现代结核病防治技术获得了较为明显的控制效果。

四种卡介苗重组疫苗对结核病的预防作用

目的:评价esat6-卡介苗重组疫苗、mpt64-卡介苗重组疫苗、ag85a-卡介苗重组疫苗、ag85b-卡介苗重组疫苗对结核病预防效果。方法:观察四种卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、T细胞及B细胞免疫功能等指标。结果:卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果最显著,与卡介苗组比差异有统计学意义。实验结束时,esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器大体病变较其他各组轻。脏器结核分枝杆菌培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗组小鼠脏器内结核分枝杆菌较少,其他各组间无显著区别。抗体检测结果表明,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫小鼠抗体水平显著升高,其他各组之间无差别。淋巴细胞增殖实验结果,各组之间差异无统计学意义。结论:初步实验结果表明esat6-卡介苗重组疫苗对结核菌的预防作用强于卡介苗。

esat6-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的:获得结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗。方法:通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果:通过PCR扩增获得300bp左右的esat6基因,与穿梭质粒载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-esat6-卡介苗重组疫苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明esat6-卡介苗重组疫苗构建正确,esat6蛋白在卡介苗中分泌表达。结论:成功构建了esat6-卡介苗重组疫苗。

Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗作用的研究

目的评价Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核病预防及治疗效果,期望得到对结核病的预防效果强于卡介苗的重组疫苗。方法观察Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防试验和治疗实验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价各卡介苗重组疫苗的抗结核作用。结果用Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染进行预防,Ag85a-卡介苗重组疫苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。结核分枝杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,Ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠脏器与其他各组之间无显著差别。各组小鼠脏器研磨、消化后稀释为不同梯度进行培养Ag85a-卡介苗重组疫苗免疫小鼠肺脏结核分支杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-5,肝、脾结核分枝杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-4。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组间无显著差别。卡介苗重组疫苗对结核病的治疗试验结果中半数死亡时间与2个月内的死亡率反而不如预防的效果,说明卡介苗或卡介苗重组疫苗等活体疫苗作为结核病治疗性疫苗无明显的治疗效果。结论初步实验表明:Ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分支杆菌感染的预防作用与卡介苗无显著区别,卡介苗或Ag85a-卡介苗重组疫苗等活体疫苗作为结核病治疗性疫苗无明显的治疗效果。

驻京部队住院肺结核31年抽样调查分析

目的探讨驻京部队住院肺结核病变化特点,为部队结核病防治工作提供依据。方法对1972—2002年驻京部队住院肺结核病例进行抽样调查,每5年抽查1年。结果调查驻京部队住院肺结核1404例,男性87.7%￣95.0%;干部30.2%￣39.4%,战士51.6%￣59.2%,职工3.9%￣13.3%;平均发病年龄28.5岁,≥60岁组2002年比1972年增加1010%,年均递增7.7%;平均住院天数由1972年的196.8d下降为2002年的43.9d;血型播散型肺结核、浸润型肺结核无明显变化,原发型肺结核下降79.0%,慢性纤维空洞型肺结核下降70.0%,结核性胸膜炎上升127.5%;病灶范围≤5/6、6/6的分别下降71.8%、59.5%;肺结核空洞发生率下降58.6%,痰菌阳转率下降54.5%;实施短程督导化疗比传统标准化疗疗程缩短2/3,治愈率由85%提高到98%,5年复发率由7.5%降至1.5%。结论驻京部队实施的现代结核病防治技术获得了较为明显的控制效果。

mpt64-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究mpt64-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比,无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,mpt64-卡介苗重组疫苗组有MPT64特异性抗体产生,而卡介苗组无MPT64特异性抗体产生;卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上。结论结核分枝杆菌mpt64基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体。

5963名新兵结核感染情况调查

目的调查入伍新兵结核感染状况,为部队结核病防治提供决策依据。方法对2006年5963名入伍新兵进行结核菌素(PPD)试验,采用国产PPD0.1mL,5IU皮内注射,72h查验反应,以双上臂无卡介苗接种疤痕而结核菌素试验阳性作为结核自然感染判断标准。结果调查的5963名新兵中,卡痕率为32.47%;结核菌素试验阳性率为51.23%,强阳性率为2.99%;其中有卡痕者PPD阳性率(74.22%)与无卡痕者PPD阳性率(40.18%)比较,差异有显著性(P<0.05);有卡痕者结核菌素反应性的各标准均明显高于无卡痕者;城市新兵结核菌素试验阳性率与强阳性率均显著高于农村新兵。结论在新兵中进行结核菌素试验调查,可以监测新兵结核感染情况,筛选卡介苗接种对象;对结核菌素试验强阳性者可采取预防性治疗措施。

mpt64-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的为提高卡介苗对结核病的保护力,构建结核分枝杆菌mpt64-卡介苗重组疫苗。方法采用基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原MPT64的编码基因与穿梭质粒pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得mpt64基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了mpt64基因pYUB295重组质粒。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。mpt64-卡介苗重组疫苗基因组DNA的PCR扩增及培养上清液PAGE电泳表明,mpt64-卡介苗重组疫苗构建正确,MPT64蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了mpt64-卡介苗重组疫苗。

Ag85b-卡介苗重组疫苗的构建及鉴定

目的构建结核分枝杆菌Ag85b-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性和治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85b的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。结果通过PCR扩增获得Ag85b基因,与穿梭表达载体pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了Ag85b基因pYU295重组质粒。将重组质粒通过电穿孔导入卡介苗,重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-Ag85b重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以及培养上清液的PAGE电泳表明:Ag85b-卡介苗重组疫苗构建正确,Ag85b蛋白在卡介苗中分泌表达。结论成功构建了Ag85b-卡介苗重组疫苗。

esat6-重组卡介苗对结核病预防作用的研究

目的评价esat6-重组卡介苗对结核病预防效果。方法观察esat6-重组卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标,评价esat6-重组卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果用esat6-重组卡介苗对结核分枝杆菌感染进行预防,esat6-重组卡介苗及卡介苗与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-重组卡介苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异。结核分枝杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,esat6-重组卡介苗免疫组小鼠脏器大体病变较轻,其他各组之间无显著差别(各组小鼠脏器研磨、消化后稀释为不同梯度进行培养,esat6-重组卡介苗免疫小鼠肺结核分枝杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-5,肝、脾结核分枝杆菌生长的最低稀释度主要集中在10-4。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组间无显著差别)。结论初步实验表明,esat6-重组卡介苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用。

Esat6-卡介苗重组疫苗的构建免疫原性及抗结核作用的初步研究

目的构建结核分枝杆菌esat6-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原esat6的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用聚合酶链反应(PCR)扩增、聚丙烯酰胺凝胺电泳(PAGE)鉴定重组卡介苗。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防试验中实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价esat6-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了esat6基因pYUB295重组质粒,ESAT6蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组有ESAT6特异性抗体产生,45d时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明各组刺激指数均达2.0以上,esat6重组卡介苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍高于对照组。预防试验表明:esat6-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。其中esat6-卡介苗重组疫苗组效果显著,与卡介苗组比有显著差异。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变及脏器培养结果表明:esat6-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠比其他各组小鼠结核菌的负荷轻。抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验各组结果差异无统计学意义。结论正确构建了esat6-卡介苗重组疫苗,esat6-卡介苗重组疫苗能提高卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用。