基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的芪龙壮儿口服液指纹图谱研究

目的:建立芪龙壮儿口服液UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS正、负离子两种检测模式下的指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考和依据。方法:采用Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm,2.6μm)色谱柱进行色谱分离,加热电喷雾离子源正、负离子同时检测。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了芪龙壮儿口服液正、负离子模式下的指纹图谱共有模式并分别确认了24(正离子模式)和17(负离子模式)个共有指纹峰。10批芪龙壮儿口服液指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.986(正离子模式)和0.968(负离子模式)。在正离子模式下鉴定了15个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认;负离子模式下鉴定了12个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认。结论:所建立的芪龙壮儿口服液正、负离子两种模式下的指纹图谱,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,从正、负两个维度较为全面地表征了该制剂的化学成分指纹特征,为芪龙壮儿口服液的质量评价提供了依据和方法。

正心降脂片多指标成分的含量测定及聚类热图分析

目的:建立同时测定正心降脂片中葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素等7种成分含量的方法,并进行聚类热图分析。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C_(18),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。以含量数据为对象,采用Hiplot科研绘图平台绘制聚类热图。结果:葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为17.00~170.00(r=0.9999)、5.14~51.40(r=0.9998)、3.00~30.00(r=0.9998)、153.00~1530.00(r=0.9999)、7.88~78.75(r=0.9998)、2.85~28.50(r=0.9999)、11.34~113.40μg/mL(r=0.9998)。精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%;平均加样回收率分别为99.58%(RSD=0.83%,n=6)、100.31%(RSD=1.17%,n=6)、100.61%(RSD=1.08%,n=6)、100.05%(RSD=0.82%,n=6)、100.31%(RSD=1.38%,n=6)、100.31%(RSD=0.85%,n=6)、99.85%(RSD=1.01%,n=6)。10批样品中上述成分的含量分别为7.2625~8.9415、2.4649~3.0689、1.4789~1.8834、58.6328~79.4083、3.5694~4.5006、1.0776~1.3415、1.1397~5.9570 mg/g。聚类热图分析结果显示,10批样品可聚为4类,其中S1~S3聚为一类、S4聚为一类、S5~S6聚为一类、S7~S10聚为一类。结论:所建含量测定方法操作简便、准确性高、专属性强,结合聚类热图分析可用于正心降脂片的质量控制;不同批次样品的质量存在一定差异。

梧桐子总黄酮提取工艺研究

目的:优选梧桐子总黄酮乙醇提取最佳工艺。方法:采用正交试验法,以梧桐子总黄酮为指标成分,优选最佳醇提工艺。结果:梧桐子的最佳醇提工艺为60%乙醇提取3次,溶剂用量依次为8倍、8倍、6倍,提取时间为60min、60min、30min。结论:优选的工艺稳定可行,可作为鼻血止颗粒二次开发生产工艺。

FIA法测定扑热息痛片的含量

扑热息痛是一种解热镇痛药,常用于发热,疼痛等症的治疗。扑热息痛的含量测定方法目前文献报道很多,有比色法、化学滴定法、差示分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱法、电化学分析法、核磁共振波谱法、质谱法、喇曼光谱法及FIA法等,但目前国内尚无FIA法的文献报道。

不同炮制方法对大黄有效成分的影响研究

目的:研究不同炮制方法对大黄有效成分的影响。方法:采用HPLC法测定同一批大黄药材3种饮片中的有效成分含量变化。结果:经不同方法炮制的大黄药材,其总含量无明显变化,结合蒽醌含量:酒大黄>生大黄>熟大黄1>熟大黄2,游离蒽醌含量:熟大黄2>熟大黄1>酒大黄>生大黄。结论:不同方法炮制的大黄饮片有效成分含量有差异,要根据需要选择不同的饮片入药。

平消胶囊对乳腺增生模型大鼠的药效学研究

目的研究平消胶囊对乳腺增生(MGH)模型大鼠的改善作用,并探讨其可能作用机制。方法将雌性大鼠随机分为正常组,模型组,平消胶囊低、中、高剂量组(250、500、750 mg·kg^-1)和他莫昔芬对照组(2 mg·kg^-1),正常组和模型组每组10只,其余每组6只。采用肌内注射苯甲酸雌二醇及黄体酮的方法复制雌性大鼠乳腺增生模型。造模成功后,正常组和模型组灌胃给予生理盐水,各给药组灌胃给予相应药物,每日1次,连续30 d;记录药物对大鼠体质量、乳头直径和内分泌激素水平的影响。结果模型组大鼠乳头直径较正常组明显增大。给药治疗后,与模型组比较,各给药治疗组大鼠乳头直径水平均有不同程度的下降,其中平消胶囊高剂量组下降最为明显;病理组织学检查发现,平消胶囊中、高剂量组大鼠乳腺腺体和导管病理改变有明显改善;与模型组比较,平消胶囊高剂量、他莫昔芬组大鼠雌二醇水平均显著下降,孕酮水平升高。结论平消胶囊对乳腺增生模型大鼠具有显著的改善作用,其作用可能与降低雌二醇及升高孕酮激素水平有关。

艽龙胶囊对胃肠动力障碍小鼠的影响

目的探讨艽龙胶囊对胃肠动力障碍小鼠的影响,为该药物的临床应用与深入研究提供实验依据。方法将60只雌雄各半的昆明小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、多潘立酮片(吗丁啉)对照组、艽龙胶囊3个剂量组(30、60、120 mg/kg)。采用腹腔注射左旋精氨酸复制小鼠胃肠动力障碍模型,灌胃黑色半固体营养糊,检测小鼠胃内残留率和小肠推进率;同时检测小鼠体质量、摄食量、血浆胃动素(MTL)和一氧化氮(NO)的水平。结果小鼠在给予左旋精氨酸注射液造模后,相比模型组,给药组摄食量增加,艽龙胶囊中、高剂量组可明显降低胃内残留率,增加小肠推进率,升高小鼠血浆中MTL含量和降低小鼠血浆中NO含量。结论艽龙胶囊具有明显促胃肠排空作用并改善胃肠动力功能。

艽龙胶囊及其主成分对功能性消化不良大鼠的治疗作用

目的观察艽龙胶囊及其主成分对功能性消化不良大鼠的治疗作用。方法 80只SD大鼠,随机分为正常、模型、艽龙胶囊、龙胆苦苷、马钱苷酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、山栀苷甲酯和多潘立酮组。造模后第1天,各试药组依次灌胃给予相应药物治疗,共4周。给药结束后,计算胃排空率和肠推进率,ELISA检测大鼠血清中胃饥饿素(GH)和血管活性肠肽(VIP)水平;Western blot检测胃窦组织中蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和α-真核翻译起始因子2αβ-eIF2α蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃排空率、肠推进率及GH含量显著下降,而VIP、胃窦组织内PERK和p-eIF2α蛋白表达升高(P<0.01);经艽龙胶囊、龙胆苦苷和山栀苷甲酯治疗的大鼠胃排空率和肠推进率及GH含量明显升高,血清中VIP、胃窦组织内PERK和p-eIF2α蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论艽龙胶囊能通过促进GH表达,抑制VIP、PERK和p-eIF2α蛋白表达,改善胃动力,提升胃肠功能,且其主要功效成分为龙胆苦苷和山栀苷甲酯。

高效液相色谱法测定可待敏缓释胶囊的含量

目的建立分离检测复方制剂可待敏缓释胶囊中磷酸可待因、马来酸氯苯那敏含量的高效液相色谱法。方法采用ODS色谱柱；流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾，加入0．01％的己烷磺酸钠溶液（离子对试剂）和0．5％三乙胺，用磷酸调pH至6．0，与甲醇以50：55的比例配成流动相并调节pH至7．0～7．5；流速为1．0mL／min；检测波长为220nm。结果磷酸可待因和马来酸氯苯那敏的平均回收率分别为99．67％和100．54％，RSD分别为0．54％和0．98％。结论该方法简便，结果准确可靠，可作为可待敏缓释胶囊的质量控制方法。

明眸滴丸制备工艺研究

目的优选明眸滴丸的最佳制备工艺。方法采用正交试验法,以丸重变异系数、溶散时限、滴丸硬度作为检测指标,优选滴丸成型工艺。结果滴丸最佳制备工艺条件为,以聚乙二醇6000(PEG6000)为基质,药物与基质配比为1∶1.5,冷却液温度为8℃。结论明眸滴丸制备工艺简便可行、稳定合理,评分指标客观、可靠、合理。

艽龙胶囊对大鼠急性胃溃疡的保护作用及机制研究

目的观察艽龙胶囊对大鼠急性胃溃疡的保护作用及并阐明相关机制,为该产品的临床应用与深入研究提供实验依据。方法 SD大鼠60只,雌雄各半,分为6组,即空白对照组、模型对照组、雷尼替丁对照组(30 mg/kg)、艽龙胶囊治疗组(25、50、100 mg/kg)。采用酒精联合阿司匹林方法复制大鼠急性胃溃疡模型,胃粘膜组织病理学检测;按Guth法计算胃溃疡指数;ELISA方法检测胃粘膜组织中MPO和SOD水平。结果艽龙胶囊50 mg/kg、100 mg/kg剂量组大鼠体重较正常组大鼠体重下降无统计学差异;艽龙胶囊各剂量组可明显改善胃溃疡程度,胃溃疡指数显著低于模型组。与雷尼替丁组比较,艽龙胶囊100 mg/kg组对大鼠胃溃疡程度改善无显著差异;艽龙胶囊使胃溃疡性大鼠粘膜组织中MPO表达较模型组降低,SOD表达水平达较模型组升高;HE结果显示艽龙胶囊100 mg/kg剂量组明显改善大鼠胃粘膜组织病理形态。结论艽龙胶囊对大鼠急性胃溃疡具有一定的防治作用,其可能的作用机制是影响粘膜组织中MPO及SOD表达水平,抑制粘膜损伤。

艽龙胶囊及其主成分对溃疡性结肠炎小鼠的作用

目的探讨艽龙胶囊及其主成分对溃疡性结肠炎小鼠的预防保护作用。方法采用2.5%DSS建立小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型,造模同时各治疗组给予相应治疗药物,模型组及正常组给予等容量生理盐水,连续给药7d,分别进行小鼠疾病活动指数(DAI)和结肠粘膜损伤指数(CMDI)评分,检测血清NO和TNF-α含量及结肠组织SP和VIP含量。结果艽龙胶囊及其主成分龙胆苦苷和马钱苷酸能够显著改善UC小鼠DAI和CMDI评分,显著降低UC小鼠血清NO和TNF-α含量,同时还降低结肠组织SP和VIP含量。结论艽龙胶囊对溃疡性结肠炎具有显著的预防保护作用,其功效成分为龙胆苦苷和马钱苷酸。

高效液相色谱法测定可待敏缓释胶囊的释放度

目的建立测定复方制剂可待敏缓释胶囊释放度的高效液相色谱法。方法按照2010年版《中国药典（二部）》释放度测定法中的第一法，以水900mL为介质，转速为10017／rain，分别在l，4，8h时采样，以高效液相色谱法测定。色谱柱为DiamonsilC18柱（150mm×4．6mm，5μm）；流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾，加入0．01％的己烷磺酸钠溶液（离子对试剂）和0．5％三乙胺，用磷酸调pH至6．0，与甲醇以（50：55）的比例配成流动相并调节pH至7．0～7．5；流速为1．0mL／min；检测波长为220nm。结果可待敏缓释胶囊在12h内缓慢释放，在12h时释放较完全。结论该方法简便，结果准确可靠。

天凤胃痛散中碳酸钙的含量测定

目的:建立天凤胃痛散中碳酸钙的含量测定方法。方法:采用乙二胺四醋酸二钠液为滴定液,测定碳酸钙的含量。结果:该方法精密度RSD%=0.18%,回收率为99.6%,RSD%=0.13%。结论:该方法操作简便,结果准确可靠,可作为天凤胃痛散中碳酸钙的含量测定方法。

基于UHPLC-Q-exactive orbitrap MS和化学计量学分析的芪龙壮儿口服液质量评价研究

建立同时测定芪龙壮儿口服液中19种化学成分的UHPLC-Q-exactive orbitrap MS定量分析方法,并结合化学计量学分析比较不同批次样品的质量差异,为该制剂的质量评价提供依据。采用UHPLC-Q-exactive orbitrap MS方法测定了10批芪龙壮儿口服液中尿囊素、L-脯氨酸、焦谷氨酸、大麦芽碱、腺苷、L-苯丙氨酸、鸟苷、L-色氨酸、咖啡酸、毛蕊异黄酮苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷、芒柄花素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ和黄芪甲苷的含量,并利用Hiplot开源科研绘图平台及MarkerlynxXS软件对含量数据进行聚类热图分析、主成分分析(principal component analysis, PCA)和偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis, PLS-DA),综合评价不同批次芪龙壮儿口服液的质量差异。19个化学成分在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0.999),精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于1.94%,平均加样回收率为97.24%~102.75%(RSD均小于2.74%, n=6)。聚类热图和PCA分析将10批样品分为两大类, PLS-DA法确定了7个差异标志物,分别为3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷、白术内酯Ⅲ、毛蕊异黄酮、白术内酯Ⅱ、芒柄花素、尿囊素和咖啡酸。建立的芪龙壮儿口服液多成分定量方法结合化学计量学分析可以为该制剂质量评价提供参考。

平消胶囊的抗肿瘤作用及其机制研究

目的:观察平消胶囊的抗肿瘤作用及其初步的作用机制。方法:提取平消胶囊活性部位,用于体外抗肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡;灌胃给予平消胶囊,采用4种人体肿瘤裸鼠移植瘤模型观察体内抑瘤作用及初步毒性反应。结果:平消胶囊提取物对10种人体肿瘤细胞具有一定的体外增殖抑制作用,体外作用72h,其IC50值在400-900μg/m L之间。平消胶囊连续经口灌胃给药14d,对人乳腺癌MDA-MB-231、人甲状腺癌SW579、人肠癌colo205、人胰腺癌PANC-1的最大抑瘤率分别达到59.00%、53.13%、49.51%、52.14%,且对动物体质量和脏器没有明显影响。平消胶囊提取物能诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人甲状腺癌细胞SW579凋亡。结论:平消胶囊对人乳腺癌、甲状腺癌、肠癌、胰腺癌的裸鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,量效关系明显,且对主要脏器无明显影响,其机制之一为诱导肿瘤细胞的凋亡。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的正心降脂片化学成分研究

目的建立一种快速鉴定中药复方制剂正心降脂片的高分辨质谱分析方法,系统阐明其化学成分组成。方法采用超高效液相色谱静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对正心降脂片成分进行分析,色谱柱为Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm,2.6μm),流动相采用乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1)。采用加热电喷雾离子源,正、负离子同时扫描模式采集数据。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定正心降脂片的化学成分。结果共鉴定了正心降脂片中105个化学成分,包括21个有机酸、59个黄酮类化合物(黄酮氧苷类37个,黄酮碳苷类10个,多甲氧基黄酮类化合物12个)、19个醌类化合物(11个蒽醌类和8个菲醌类)、3个二苯乙烯类化合物及3个其他类型化合物。其中29个化合物采用对照品比对进行了鉴定,并对各成分的药材来源进行了归属。结论对正心降脂片的化学成分进行了系统、全面地分析,为其药效物质基础、质量控制及作用机制研究奠定了基础。

平消胶囊对实验性乳腺癌的作用

目的观察平消胶囊对实验性乳腺癌的作用。方法将36只SD雌性大鼠随机分为6组:正常组、模型组、他莫昔芬组(0.36 mg/kg)以及平消胶囊低(250 mg/kg)、中(500 mg/kg)、高(750 mg/kg)剂量组。采用腹腔注射二甲基苯蒽(DMBA,80 mg/kg)的方法建立大鼠乳腺癌模型,建模3 d后给予药物干预,正常组大鼠给予正常饮食,25周后观察乳腺肿瘤发生情况及进行组织病理学分析;并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中雌二醇(E_(2))、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化;观察大鼠脏器指数的变化。多组间比较采用单因素方差分析,重复测量数据采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD法。结果(1)大鼠体质量经重复测量方差分析显示,时间因素、分组因素以及时间与分组的交互作用均对大鼠体质量有影响(F=70.385,P<0.001;F=19.389,P<0.001;F=3.184,P=0.020)。(2)模型组大鼠双侧乳腺均发生肿瘤,给予他莫昔芬及平消胶囊干预后,大鼠只发生单侧乳腺肿瘤;模型组乳腺肿瘤体积为(21.5±9.6)cm^( 3),他莫昔芬组及平消胶囊低、中、高剂量组乳腺肿瘤体积分别为(13.6±9.6)、(20.1±5.3)、(15.5±6.2)、(5.2±2.3)cm^( 3),其中高剂量组乳腺肿瘤体积与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.050)。(3)各组大鼠双侧第二乳头直径的差异有统计学意义(右侧:F=11.378,P<0.001;左侧:F=9.600,P<0.001),组间两两比较显示:模型组分别与他莫昔芬组以及平消胶囊中、高剂量组比较,差异均有统计学意义(P均<0.050);他莫昔芬组与平消胶囊低剂量组比较,差异也有统计学意义(P<0.050)。(4)各组大鼠血清中E_(2)、GSH-Px、SOD、MDA、TNF-α水平差异均有统计学意义(F=64.845、60.303、32.583、80.558、46.740,P均<0.001)。其中,模型组与正常组比较,E_(2)、MDA、TNF-α水平明显升高(P均<0.050),GSH-Px、SOD水平明显降低(P均<0.050);模型组分别与他莫昔芬组、平消胶囊中剂量及高剂量组比较,E_(2)、GSH-Px、SOD、MDA、TNF-α水平的差异均有统计学意义(P均<0.050),他莫昔芬组分别与平消胶囊中、高剂量组比较,E_(2)、GSH-Px、SOD、MDA水平的差异均有统计学意义(P均<0.050)。(5)各组间子宫、胸腺、脾脏、肝脏及肾脏脏器指数的差异均有统计学意义(F=3.502、1.696、13.672、2.995、4.465,P均<0.050),其中,模型组分别与正常组、他莫昔芬组以及平消胶囊中、高剂量组比较,子宫、胸腺、脾脏脏器指数的差异均有统计学意义(P均<0.050),他莫昔芬组分别与平消胶囊低、中、高剂量组比较,差异均无统计学意义(P均>0.050)。HE染色结果显示,平消胶囊中、高剂量组大鼠的乳腺瘤样变化程度减轻,腺泡数量减小,导管增生和扩张也有明显改善,病变明显减轻。结论平消胶囊对DMBA诱导的大鼠乳腺癌病变具有显著的防治作用,其作用机制可能与其调节血清中E_(2)、GSH-Px、SOD、MDA、TNF-α水平,调节机体氧化应激状态,进而提高机体免疫调节水平有关。