食品安全检测仪快速测定板栗中脱氢乙酸含量

[目的]建立食品安全检测仪快速测定板栗中脱氢乙酸(DHA)含量的分析方法。[方法]用410 nm波长的食品安全检测仪测定标准溶液浓度并绘制标准曲线。经过丙酮、甲醇萃取后的板栗与检测试剂反应,将反应液放入仪器中自动计算并得出脱氧乙酸浓度。[结果]被测物中脱氢乙酸均能得到很好的提取分离,空白溶剂无干扰;标准溶液浓度在0~2.5 g/kg线性关系良好(R^(2)=0.9998),方法检出限和定量限分别为0.0014和0.0044 g/kg;6种加工板栗样品中脱氢乙酸含量分别为0.156、0.321、0.254、0.450、0.285和0.389 g/kg,相对标准偏差(RSD)在1.5%~2.4%;空白样品在0.2、0.6、1.0 g/kg 3种不同加标量下平均回收率在100.1%~101.7%,RSD在0.9%~2.9%;该方法与国标法对比的测试结果无显著差异。[结论]该方法具有提取过程简便、操作简单、用时短、性价比高、回收率较高、结果准确可靠且重现性较好等优点,适合批量样品快速初筛检测。

交联脲酶聚集体的制备和初步应用

为提高游离脲酶的稳定性 ,将游离脲酶用硫酸铵沉淀下来后 ,以戊二醛作为交联剂对其进行化学交联 ,制备新型的固定化脲酶 交联脲酶聚集体 ,并对其酶学性质进行研究。交联脲酶聚集体的最适pH、最适温度和Km 值分别为 :pH 8 0、70℃和 0 0 2 1mol L。在对交联脲酶聚集体的热稳定性 ,储存稳定性 ,和对抗蛋白水解酶的能力的研究中 ,交联脲酶聚集体均显示了比游离脲酶更高的稳定性。为考察其使用效果和稳定性 ,将其与包醛氧淀粉联合 ,用于慢性肾衰动物模型的口服治疗。以腺嘌呤灌胃法 (每天 30 0mg kg ,共 30d)制备慢性肾衰动物模型 ,将 2 3只大鼠随机分为模型对照组 (每天以 10mL kg蒸馏水灌胃 )、单纯包醛氧淀粉组 (给予含包醛氧淀粉饲料 ,10mL kg蒸馏水灌胃 )和包醛氧淀粉 +交联脲酶聚集体组 (给予含包醛氧淀粉饲料 ,交联脲酶聚集体悬浮液 10mL kg灌胃 ) ,经 2周治疗后 ,模型对照组、治疗对照组和治疗组实验前后的肌酐含量均有小幅下降 ,但差异不显著 (P值分别为0 92 2、0 972和 0 2 2 5 >0 0 5 )。模型对照组的尿素氮含量变化不明显 (P =0 2 11>0 0 5 )。治疗对照组和治疗组实验前后的尿素氮含量均明显下降 (P值分别为 0 0 0 4和小于 0 0 0 1,均小于 0 0 1)。

东海洋山港沿岸土壤、海水样本中Ⅰ型PKS基因的初步筛选鉴定与功能分析

为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复序列后,共获得了23条不同的KS片段(长度为630bp^690bp),提交GenBank皆获登录号,其中19条来自土壤(DQ640993、DQ640997、DQ641926、DQ641927、DQ673137~DQ673151),4条来自海水(DQ673151,EF554859~EF554861),由核苷酸序列推断出的氨基酸序列保守,与GenBank中已知KS基因片段的相似度在45%到85%之间,种系发生分析表明,其中14条KS片段(来源于海水的KS片段皆在其中)应来源于典型的KS群,而剩余9条则来源于杂合的PKS/NRPS(Non-ribosomal peptide synthetase,非核糖体多肽合成酶)群。另外,几条KS基因特征明显,可用于进一步的研究。

产Macrolactins的海洋细菌X-2中Ⅰ型PKS基因簇的筛选鉴定与功能分析

Macrolactins是近年来从Actinomadura sp.和Bacillus sp.等海洋来源的微生物中分离的一群24元大环内酯类化合物,具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤等生物学活性。本室从东海海泥中分离到一株海洋细菌X-2,可产生多种Macrolactins。本研究自行设计了一套针对Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆到了X-2基因组中的一段长约645bp的Ⅰ型KS基因片段,提交GenBank获登录号EF486351,并以之为探针筛选X-2的fosmid基因组文库,得到了3个阳性克隆,测序获得的序列经同源性分析和功能预测,初步证实获得了该菌中负责生物合成Macrolactin的部分Ⅰ型PKS基因簇的功能序列。

H7N9禽流感病毒感染及其实验室诊断

至2013年4月23日,新型H7N9亚型的禽流感病毒已经在中国感染了108人,并致22人死亡。科学家发现甲型禽流感病毒H7N9源自3种病毒株的重配,并出现了实质性的突变。H7N9病毒拥有几个哺乳动物流感病毒的特征,从而形成了对人类的感染力,因此需重视其大规模流行的潜力。本文对该病毒的生物学特性、流行病学、临床表现和实验室诊断进行了简要综述。

新型聚酮合酶基因簇的分离与部分鉴定

目的从海洋沉积物中分离新型聚酮合酶(PKS)基因簇,并解析其基因结构,为研究PKS的组合生物合成提供新组件。方法采集中国东海沉积物样本,并提取宏基因组DNA,以其为模板,通过简并PCR扩增新型PKS片段,用地高辛标记正确的扩增片段作为探针,然后从本研究中构建的海洋沉积物样本Fosmid宏基因组文库中筛选完整基因簇,测序、结构分析。结果(1)所分离得到的海洋沉积物宏基因组DNA可直接作为PCR模板,简并PCR扩增得到26个新型KS编码片段,并成功提交GenBank;(2)所得DNA构建成滴度约5×108cfu/ml的Fosmid文库,插入片段平均长度约为40kb;(3)将其中的一个KS片段(GenBank登录号DQ942531)用地高辛标记并筛选部分文库,得到4个克隆,测序得到7981bp的序列(GenBank登录号EF568935),结构分析发现含典型的I型PKS组件,如酮缩酶(KS)、酰基转移酶(AT)、酰基载体蛋白(ACP)等。结论简并引物扩增、宏基因组文库筛选、测序、结构分析,在本研究中被证明是有效的分离新PKS基因簇的途径;通过系统进化树分析得出26条新KS片段属于Ⅰ型KS片断和杂合PKS/NRPS基因簇,主要来自放线菌门、δ变形菌门、蓝藻门和β变形菌门的微生物。

Kininogen D5和TRAIL融合蛋白的克隆表达及生物学活性的研究

用重组PCR技术得到Kininogen D5和TRAIL的融合编码序列,将该DNA片段克隆到原核表达载体pMAL-c2,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,得到MBP-KT和MBP-TK,经AmyloseResin亲和层析柱层析,得到初步纯化的融合蛋白。结果表明MBP-KT对胰腺癌细胞1990有明显的杀伤作用其作用的ED50为20 ng/ml,而MBP-TK对1990的抑制作用不明显;同时,MBP-KT和MBP-KD5对内皮细胞ECV304有明显的抑制作用,MBP/KT作用于ECV304的ED50为0.1μg/ml,MBP/KD5作用于ECV304的ED50为9.5μg/ml,但是MBP-TK和TRAIL几乎无作用,表明融合蛋白KT既具抗肿瘤作用又有抗新生血管的作用。本研究为进一步开发靶向性杀伤肿瘤药物奠定了基础。

融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。

新型酰基转移酶AT-EF080951的重组表达及底物结合分析

目的研究新型聚酮合酶(PKS)基因簇EF568935(GenBank登录号)中酰基转移酶(AT)EF080951(GenBank登录号)底物特异性,为PKS的功能研究及组合生物合成研究提供新组件。方法从酰基转移酶AT-EF080951结构域两端的连接肽区设计引物,通过PCR克隆其结构域基因at-EF080951;连接入原核表达载体pMAL-c2X,与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达;直链淀粉树脂柱亲和层析纯化MBP-AT-EF080951;融合蛋白用Xa因子切除MBP,得到AT-EF080951单体;以MBP、小牛血清白蛋白(BSA)为对照蛋白,用紫外分光光度法测定MBP-AT-EF080951与AT-EF080951对底物的结合能力,计算结合常数(Ka,μmol/L),分析其结合底物的特异性。结果(1)MBP-AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.0049±0.001;丙二酰辅酶A,0.0049±0.003;乙酰辅酶A,0.107±0.002;辅酶A,0.005±0.003。(2)AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.005±0.002;丙二酰辅酶A,0.0041±0.002;乙酰辅酶A,0.120±0.001;辅酶A,0.0042±0.003。结论MBP-AT-EF080951和AT-EF080951都特异性结合乙酰辅酶A,AT-EF080951可能是乙酰转移酶。

Angioarrestin(hARP1)C端FD区的克隆、表达及其免疫活性鉴定

Angioarrestin是一种具有潜在应用价值的肿瘤血管形成抑制因子.利用DNA重组法构建了angioarrestinC端hFDcDNA和麦芽糖结合蛋白(MBP)重组原核表达质粒pMAL-C2-hFD.将重组质粒转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),经0.3mmol/LIPTG在37℃条件下诱导表达4h,SDS-PAGE检测,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的20%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有MBP标签.取表达上清纯化、透析、浓缩并冻干,以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.此多抗可以与pET-22b(+)表达系统获得的hFD重组蛋白发生良好的抗原抗体反应,ELISA检测多抗效价达1∶10240.实验证明:通过基因重组可获得angioarrestinC端hFD在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.以此为抗原制备的抗angioarrestin多克隆抗体为深入研究angioarrestin提供了材料.

人血管生成素相关家族蛋白-1 angioarrestin基因真核表达载体的构建与鉴定

目的克隆人血管生成素相关家族蛋白-1angioarrestin基因,构建angioarrestin基因的真核表达载体。方法从人肝cDNA文库中经PCR扩增出angioarrestin基因及其C-端FDdomain,经纯化、回收目的片段,将其插入克隆载体pcDNA3.1/His-Myc(-)B,构建重组质粒pcDNA3.1-ARP和pcDNA3.1-FD,稳定转染大细胞肺癌NCI-H460细胞,RT-PCR和Western印迹法鉴定。结果从人肝cDNA文库中扩增出1473bp的angioarrestin目的片段及其C-端560bpFDdomain,构建的重组质粒pcDNA3.1-ARP和pcDNA3.1-FD经PCR及酶切鉴定与预期相符,经RT-PCR和Western印迹法确定稳定转染NCI-H460细胞成功。结论成功构建了angioarrestin和C-FD基因的真核表达重组质粒并转染NCI-H460细胞,为angioarrestin抗肿瘤血管形成作用机制的研究奠定了初步基础。

岳阳城市110kV变电所在设计上所考虑的问题

岳阳市系湖南省七个省辖市之一,市区分南、北、郊三区,人口30万,面积824km^2,建成区面积27.2km^2,1992年市区用电量约9亿kW·h。市内有220kV变电所一座,240MVA,110kV变电所两座,用户专用变四座,主变容量227.5MVA。

熬夜对大学生身心健康的影响及干预策略研究

良好的睡眠习惯和质量是身心健康的重要保障。熬夜,是现代人常常面临的问题,对于大学生而言,熬夜更是在生活和学习中经常发生的事情。当前,熬夜的不良生活习惯在校园内十分普遍,而大学校园情况较为突出。熬夜的原因很多,包括环境的改变、沟通和学习方式的改变以及对手机的依赖。熬夜的危害包括对身体和心理素养以及运动能力的影响。本研究提出了进行科学教育和健康睡眠大环境的构建,个人、学校、家长和社会共同参与到大学生熬夜情况的干预策略,以改善大学生的不良睡眠现状,促进大学生的全面健康发展。

环境监测与环境监察的关系及协作运行

在环境保护工作开展中,环境监测与环境监察是两项重点工 作内容,对于两者来说,相互间存在着一定的关系。本文就环境监 测与环境监察的关系及协作运行进行一定的研究。

“蛋”生希望

在这里,我们要讲述的是恐龙蛋。那么,恐龙蛋里除了会生出恐龙宝宝外还会生出什么呢？希望指的又是什么呢？恐龙蛋在古生物学的研究中是浓墨重彩的华丽篇章,恐龙蛋生出的也不仅仅是一个个憨态可掬的恐龙宝宝,恐龙蛋生出的更是所有脊椎动物（包括我们人类）的希望!

基于HPLC的厌氧-好氧生物降解工艺处理模拟苯胺废水的研究

采用改进的好氧-厌氧方法处理苯胺废水,研究了各个操作变量梯度包括苯胺浓度、硝基苯浓度等对苯胺废水处理的影响,并加入硝基苯作为影响参数。实验结果表明,各个变量均在不同程度上影响苯胺废水的处理。经过厌氧-好氧处理后,COD降到200 mg/L以下;提高苯胺浓度时,COD值增大;进水TOC浓度为167.80 mg/L,去除率为79.6%;加入硝基苯与苯胺的降解具有协同作用。在厌氧温度35～40℃,好氧温度28～32℃条件下,进水COD在4 000～6 000 mg/L,苯胺浓度180～250 mg/L左右,处理后出水COD值达到200～500 mg/L,苯胺4.5～6.5 mg/L左右,去除率约85%以上。出水水质可达到《污水综合排放标准(》GB 8978-1996)的排放标准。

空中龙影——翼龙

两亿多年前的三叠纪,有一类爬行动物,它们竖起那神奇的无名指支撑起皮膜一飞冲天,作为第一个飞向蓝天的脊椎动物,统治了天空1.6亿年。它们就是被誉为“空中之龙”的翼龙。为了飞行,翼龙的骨壁薄而内多中空,身体某些部分的骨骼甚至薄如纸片,因此很难在地层中保存下完整的化石。