五种植物粗多糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟的体外筛选

目的比较灵芝、枸杞、云芝、黄芪、香菇五种植物粗多糖对C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)的体外诱导功能。方法采用GM-CSF体外诱导和培养C57BL/6小鼠BMDC细胞,体外培养6 d后,分别加入灵芝、枸杞、云芝、黄芪和香菇五种植物粗多糖进行培养,24 h后,采用流式细胞术检测细胞表面CD80、CD86及MHCII分子的表达,采用ELISA检测BMDC细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TFN-α的含量。结果云芝多糖可显著诱导BMDC细胞表明的CD80、CD86和MHCII分子表达上调,并刺激BMDC细胞释放IL-6,IL-12p40和TFN-α。枸杞多糖、灵芝多糖和香菇多糖仅显著性的诱导IL-6释放增加。结论云芝多糖对BMDC具有较强的诱导作用,具有潜在的疫苗佐剂活性。

纳米复合佐剂的抗肿瘤免疫调控作用及效果研究

目的:探究纳米复合佐剂在肿瘤内的免疫调控作用及抗肿瘤效果。方法:制备包载CpG的β葡聚糖纳米颗粒(CNP),体外培养小鼠骨髓来源的树突细胞(BMDC),分5组进行体外免疫处理,分别为PBS对照组、β葡聚糖组、β葡聚糖纳米载体(NP)组、CpG组和CNP组,利用流式仪分析BMDC成熟情况。将体外培养的黑色素瘤B16F10细胞接种于C57BL/6N小鼠右后肢皮下,建立肿瘤模型,第6 d挑选肿瘤大小相对一致的24只小鼠均分为4组,即PBS组、NP组、CpG组、CNP组进行治疗,后颈部皮下注射给药,共给药4次,每次间隔3 d,期间隔天测量肿瘤体积,最后一次给药后第3 d眼眶取血,测定血浆中γ干扰素(IFN-γ)浓度,处死小鼠后分离肿瘤及脾脏,流式细胞术检测瘤内浸润性T淋巴细胞比例及脾脏内T细胞比例。结果:CNP佐剂处理后BMDC成熟比例约为CpG佐剂组的2.8倍。在小鼠体内接种肿瘤15 d后,CNP治疗组肿瘤体积较其他组均减小,血浆中IFN-γ含量显著高于其他实验组,约为CpG组的1.5倍,肿瘤浸润性T淋巴细胞与其他组相比也有明显升高。结论:构建的葡聚糖-CpG纳米复合佐剂能够有效激活BMDC,改善肿瘤微环境,具有良好的体内抗肿瘤效果。

HPV16 E786-93纳米颗粒疫苗的免疫杀伤效果研究

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E786-93CTL表位肽与免疫佐剂CpG-ODN自组装纳米颗粒疫苗在肿瘤模型中的免疫效果。方法:化学合成HPV16 E786-93CTL表位肽,与CpG-ODN通过静电相互作用自我组装形成纳米颗粒,采用透射电镜、动态光散射等方法鉴定纳米颗粒的性质;构建治疗性肿瘤动物模型,观察纳米颗粒疫苗在动物模型体内的抗瘤效应;通过流式细胞术测定瘤内浸润性T细胞比例、外周血及脾脏内T细胞比例;体外培养小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),测定经纳米颗粒刺激的BMDC培养上清中的IL-6和IL-12p40浓度。结果:构建了直径约210 nm大小均匀的纳米颗粒,该纳米颗粒疫苗能显著抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,且对于小鼠瘤内浸润性T淋巴细胞及脾脏内、外周血中的T淋巴细胞比例均有提升,同时能在体外有效刺激BMDC分泌细胞因子。结论:HPV16E786-93CTL表位肽联合CpG-ODN自组装纳米颗粒疫苗能有效杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤增长,改善体内免疫微环境。