刺梨果多糖对异丙肾上腺素诱导的心肌缺血小鼠保护作用及机制

目的:探究刺梨果(Rosa roxburghii Tratt)多糖对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌缺血(myocardial ischemia,MI)小鼠保护作用及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组:对照组,模型组,普萘洛尔(30 mg/kg)组,刺梨果多糖低、高剂量(50、100 mg/kg)组,每组8只。各给药组小鼠连续灌胃(ig)给药14 d,从第8天开始,ig给药1 h后,除对照组腹腔注射(ip)相同剂量的生理盐水外,其余各组小鼠ip ISO(10 mL/kg),连续7 d,构建MI小鼠模型。末次给药1 h后检测小鼠心电图变化,麻醉后取心脏,计算心脏指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化;采用2%2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色液(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色检测心肌梗死面积;采用生化试剂盒检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用免疫印迹法(Western blot)检测心脏组织中NADPH氧化酶2(NADPH oxidase2,NOX2)、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl2)、Bcl2相关X(Bcl2-associatedX,Bax)、半胱天冬酶3(Caspase 3)、中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-related protein 1,Keap1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白的表达情况。结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠心脏肿大,心电图ST段发生明显升高,HE染色可观察到心脏组织出现明显的炎症浸润和细胞间隙,TTC染色结果发现明显的心肌组织梗死。进一步实验发现模型组小鼠血清MDA含量和LDH活性显著升高(P<0.001),自由基清除酶SOD活性降低(P<0.05),Western blot结果显示,Nrf2、HO-1和Bcl2显著下调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组小鼠比较,刺梨果多糖组小鼠心肌损伤都有不同程度的恢复,心电图ST段降低,小鼠心脏组织病理损伤减少,血清MDA含量和LDH活性显著降低(P<0.001),SOD活性显著升高(P<0.01,P<0.001),心脏组织蛋白Nrf2、HO-1和Bcl2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Keap1、NOX2、Bax和Caspase 3表达显著下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论:刺梨果多糖能通过调节Keap1-Nrf2信号通路,抑制氧化应激损伤,继而调控Caspase 3、Bax、Bcl2蛋白,减少心肌细胞凋亡发生,从而对ISO诱导的MI小鼠起到保护作用。

蒙花苷体内外抗肺纤维化作用及其机制研究

目的 考察蒙花苷的体内外抗纤维化作用,并初步探讨其作用机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为正常组(羧甲基纤维素钠)、模型组(羧甲基纤维素钠)、阳性对照组(吡非尼酮,200 mg/kg)和蒙花苷低、高剂量组(12.5、25 mg/kg),每组8只。除正常组外,其余各组小鼠均制备肺纤维化模型。造模结束后,灌胃给药,每天1次,连续14 d。观察小鼠一般情况,测定其肺指数,检测其血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平以及肺组织中白细胞介素6(IL-6)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色观察其肺组织病理学变化,并参照Ashcroft评分标准进行肺纤维化评分;检测其肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、TGF-β1的表达水平。使用TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞HFL1建立体外肺纤维化模型,实验设置正常组、模型组和蒙花苷低、中、高浓度组(3.7、7.4、14.8 mg/L),培养48 h后,检测细胞中α-SMA、CollagenⅠ、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果 在体内实验中,与正常组比较,模型组小鼠肺指数和TNF-α、TGF-β1、IL-6水平均显著升高(P<0.01);肺泡中出现大量炎症浸染及细胞纤维化等病变,且有大量胶原蛋白沉积,HE染色和Masson染色评分均显著升高(P<0.01);肺组织中α-SMA、CollagenⅠ、p-ERK1/2及TGF-β1蛋白表达均显著上调(P<0.01)。与模型组比较,蒙花苷高剂量组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01),蒙花苷低剂量组大部分指标(除肺指数外)均显著改善(P<0.05或P<0.01)。在体外实验中,与空白组比较,模型组细胞出现密度变大、明显增殖等变化,细胞中α-SMA、CollagenⅠ和p-ERK1/2蛋白表达均显著上调(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,蒙花苷各浓度组细胞密度变小,形态逐渐恢复正常;蒙花苷高浓度组细胞中上述蛋白及蒙花苷中浓度组细胞中p-ERK1/2蛋白表达均显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论 蒙花苷可能通过调控ERK及炎症相关通路,减轻炎症反应,从而发挥抗肺纤维化作用。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定雪胆胃肠丸中黄芪甲苷的含量

目的：建立雪胆胃肠丸中黄芪甲苷含量测定的方法。方法：采用HPLC—ELSD法，0DS2柱（250mm×4．6mm，5μm，Hypersil），乙腈-水（35：65）为流动相；流速1．0mL·min^-1；柱温：25℃；检测器：SHIMADZU ELSD-LTⅡ型检测器；检测温度：40℃；ELSD载气：高纯氮气：载气压力：0．35MPa。对黄芪甲苷峰面积值的常用对数值采用外标二点法计算其含量。结果：黄芪甲苷在50．4-252．0mg·L^-1范围内与其峰面积线性关系良好，其平均回收率为100．78％，RSD为0．93％（n=6）。结论：所建方法简便易行、准确可靠，可用于雪胆胃肠丸中黄芪甲苷的含量测定。

HPLC测定雪胆胃肠丸中的延胡索乙素

目的建立雪胆胃肠丸中延胡索乙素含量测定的方法。方法采用Hypersil ODS2柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH至6.0）（40∶60）为流动相;流速1.0 mL.min^-1;检测波长225 nm;柱温：25℃。结果延胡索乙素在4.8-48.0μg.mL^-1内与其峰面积有良好的线性关系,其平均回收率为99.82%,RSD为1.00%（n=6）。结论所建方法简便易行、准确可靠,可用于雪胆胃肠丸中延胡索乙素的含量测定。

基于Nrf2/Keap1信号通路探讨金盏银盘水提液对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠抗氧化应激作用

目的探究金盏银盘Bidens biternata(Lour.)Merr.&Sherff.水提液对四氯化碳诱导的急性肝损伤改善作用及其机制。方法将60只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟素(0.15 g/kg)组和金盏银盘低、高剂量(3.9、7.8 g/kg)组,每组12只。各组小鼠连续ig给予相应药物7 d,末次给药后除对照组外均ip 0.4%四氯化碳构建急性肝损伤小鼠模型。24 h后收集小鼠血清及肝脏组织。用生化试剂盒检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,并取肝组织匀浆检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。采用苏木精–伊红染色(HE)切片观察小鼠肝脏病理变化。Western blotting测定肝组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、抗体Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的表达情况。结果与模型组比较,金盏银盘水提液组小鼠组织病理学观察发现肝脏炎症细胞浸润明显减少,血清AST、ALT、MDA水平降低,血清SOD和肝组织GSH-Px活性升高(P<0.05、0.01);金盏银盘水提液组可以增加小鼠肝脏Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达。结论金盏银盘能够有效改善四氯化碳诱导的急性肝损伤,作用机制与激活Nrf2/Keap1信号通路抑制氧化应激损伤有关。