中草药和铬对心肌细胞生长代谢及其抗病毒的实验研究

选用中草药人参、黄芪、麦冬及微量元素铬于体外培养的人及鼠心肌细胞上，研究药物对细胞生长代谢及其抗病毒作用。实验表明：中草药及铬均有促进细胞生长代谢、延长细胞存活时间、增强鼠心肌细胞自发收缩搏动及提高人心肌细胞抗病毒的作用，其中麦冬、黄芪及铬的作用更明显。

宫内节育器与细菌及其L型相关性的研究

自 1995年 6月～ 1998年底于山东医科大学第一附属医院计划生育门诊选择 148例患者 ,放置有活性的宫内节育器 ( IU D) 32例 (均为有尾丝者 )为 A组 ,放置惰性 IU D者 5 6例为 B组 ;未放置 IU D的育龄妇女 ,其中无生殖器炎症者 30例为 C组 ,有盆腔炎症者 30例为 D组。各组均采用无菌操作取出宫腔内分泌物 ,同步进行了需氧菌、厌氧菌及其 L 型菌的分离培养 ;A、B两组同时取出 IUD做需氧菌培养 ,其培养阳性结果是 :A、B、C三组间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ;A、B、C与 D组间均有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ;并用免疫酶染色法检测宫腔分泌物涂片中的金黄色葡萄球菌及该菌的 L 型 ,与培养结果相比无显著性差异。用 PCR法检测了单纯疱疹病毒 型 ( HSV- ) ,淋球菌 ( NG) ,解脲脲原体 ( U U)及生殖道衣原体 ( CT) ,结果是 A、B、C三组与 D组均有显著性差异 ( P<0 .0 5 )

四种中草药抗柯萨奇及埃柯病毒的实验研究

在培养的细胞上研究探讨了四种中草药(贯众、虎杖、金银花、连翘)对病毒性心肌炎及其抗病毒作用的机制。实验结果证明:四种中草药细胞外抑制 COX β_3V 及 ECHO19V 的作用很明显(P<0.05)。为治疗病毒性心肌病及其它病毒性疾病提供了用药依据。

病毒性心肌炎发病机理的实验研究──T细胞亚群和抗心肌抗体检测

以柯萨奇Ｂ＿３病毒（ＣＶＢ＿３）感染Ｂａｌｂ／ｃ小鼠建立心肌炎模型，检测了小鼠脾脏中Ｔ细胞亚群和血清中的抗心肌抗体，并进行了心脏病毒分离及组织病理学检查。结果显示，病毒感染后５天，脾脏中Ｔｈｙ１，２￣＋（Ｔ＿总）增高，７一１５天降低，第２１天恢复正常。Ｌ３Ｔ４￣＋（Ｔｃ／Ｔｓ）于病毒感染后５一２１天均明显高于对照组。Ｌ３Ｔ４＋（Ｔｈ／ｉ）于病毒感染后７天开始增高，直到２１天均明显高于对照组。病毒感染后１５天，抗心脏肌球蛋白抗休开始增高，第２１天继续增高。病毒感染后３一５天，心脏病毒分离均为阳性；第７天部分小鼠心脏中仍可分离出病毒；第１５天心脏病毒分离为阴性。病毒感染后７一２１天，心肌坏死、间质炎细胞浸润等病理变化进行性加重。上述结果提示，病毒感染本身和免疫因素都可能参与心肌炎的发病。

不同类型宫内节育器与细菌L型及子宫内膜感染的关系

1995年6月～1997年12月,对山东医科大学附属医院计划生育门诊选择的146例放置宫内节育器者,分为置器活性组32例(A组),惰性组56例(B组),正常对照组30例(C组),感染组28例(D组),观察不同类型宫内节育器对子宫内膜的感染情况。采取子宫内膜石蜡切片,经过革兰氏染色、HE、免疫组化、PCR等方法检查细菌及L型。A、B、C三组阳性结果均无明显差异(P>0.05),分别与D组比较,有明显差异(P<0.05),说明置不同类型宫内节育器并不增加子宫内膜感染。与微生物检查及培养结果基本一致。

鹿蹄草素的体内外药效学研究

观察了鹿蹄草素的体内外抑菌效果和对小鼠感染模型的保护效应。结果表明，鹿蹄草素对Ｇ＋和Ｇ－的体外抑菌效果均超过青霉素，但不如丁胺卡那霉素。对小鼠金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌感染模型几乎无保护作用。体内血药浓度检测结果表明，对家兔静脉给药后１５ｍｉｎ血药浓度约为１００ｍｇ／Ｌ，而４０ｍｉｎ的血药浓度仅为０．０８ｍｇ／Ｌ。

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白质基因L_1的克隆及表达

人乳头瘤病毒16型(HPV16)含有两个晚期开放读码框(L_1ORF和L_2ORF),L_1ORF编码主要衣壳蛋白,我们用质粒pHPV16、p16L_2BX_5和pATH,采用基因重组技术,制备了含有HPV16个长L_1ORF序列的基因克隆p16L_1BN(5071—253),它能在大肠杆菌中有效表达,产生分子量约90KD的含有E. coli trpE的融合蛋白。Western blot检测,该蛋白可被抗牛乳头瘤病毒的抗体识别,这说明克隆p16L_1BN能有效表达,基因产物具有乳头瘤病毒型的共同抗原的性质。

HPV16L1 ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :获得足够量的人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1融合蛋白及含HPV 16L1ORF序列的基因重组体。方法 :通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段 ,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX 1,构建相应的重组表达质粒 pGEMEX L1,将此质粒转化大肠杆菌JM 10 9(DE3) ,得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Westernblotting免疫印迹分析。结果 :HPV16L1基因重组体构建成功 ,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Westernblotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论 :HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达 。

人乳头瘤病毒16型完整E6开放读码框的基因克隆和鉴定

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）基因组中扩增得到５５５ｂｐ的Ｅ６ＤＮＡ片段，并重组到载体ｐＧＥＭＥＸＴＭ－１中，构建克隆扩增质粒ｐ１６Ｅ６－Ｇ，将此重组质粒转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经菌落原位杂交鉴定和限制性酶切图谱分析，证实该产物为Ｅ６基因完整开放读码框（ＯＲＦ），从而为获得Ｅ６ＯＲＦ基因片段提供了一个高效。

HPV16E6羧基端编码基因的克隆及真核细胞表达

目的 :探讨用人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)早期基因E6羧基端基因片段 (E6C)研制DNA疫苗的可行性。方法 :采用PCR方法从质粒 pHPV16中获得E6C端基因片段 ,将其克隆入含巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体 ,脂质体介导基因转染LA795小鼠肺腺癌细胞并检测E6C的表达。结果 :成功构建了真核表达质粒 pLNCE6C ,免疫组化结果显示真核表达质粒pLNCE6C在LA795细胞中获得有效表达。结论 :选择去除转化功能区的E6C端基因构建真核表达质粒是一有益的尝试 。

人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段，采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法，将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体，构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ，Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ｐＴＡＬ１，回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段，利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产生相同粘末端的特点，产生Ｌ１Ｅ７Ｃ重组基因片段，将其克隆入质粒ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔｓｋ，构建了ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ重组克隆质粒，ＨｉｎｄⅢ、ＸｈｏⅠ酶切ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ，释放Ｌ１Ｅ７Ｃ基因片段，定向重组入ｐＣＡ１４腺病毒载体，成功构建真核表达载体ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组腺病毒载体：ｐＣＡ１４Ｌ１Ｅ７Ｃ。

HPV58 E6基因的克隆及体外表达

目的 :克隆并体外表达HPV5 8E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础。方法 :通过PCR方法从HPV5 8全基因克隆中扩增出HPV5 8E6基因片段 ,利用基因重组技术 ,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游 ,体外转录成mRNA后 ,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV5 8E6蛋白 ,化学发光法检测 ,X光胶片曝光显影鉴定。结果 :酶切电泳证实质粒构建正确 ,SDS PAGE电泳显示在相当于HPV5 8E6分子量约 18.8kD的位置出现条带 ,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带。结论 :成功表达了含有生物素标记的HPV5 8E6蛋白 。

宫颈癌组织中HPV16 E6C基因变异的研究

为探讨ＨＰＶ１６ 肿瘤相关抗原Ｅ６ 羧基端基因片段（Ｅ６Ｃ）在宫颈癌组织中的变异性以及采用Ｅ６Ｃ做为肿瘤治疗性疫苗抗原基因的可行性，采用ＰＣＲ方法自１８ 例单纯ＨＰＶ１６ ＤＮＡ 阳性的宫颈癌组织中扩增ＨＰＶ１６ Ｅ６ＣＤＮＡ，经单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列测定法检测其基因变异性。ＳＳＣＰ分析结果显示，１８ 例宫颈癌组织中ＨＰＶ１６ Ｅ６ＣＤＮＡ 电泳条带与标准对照ＤＮＡ 条带一致，提示无基因变异现象存在，ＤＮＡ 序列测定也证实Ｅ６Ｃ编码区内无核苷酸突变。该研究证实采用ＨＰＶ１６ Ｅ６Ｃ端基因片段作为ＨＰＶ疫苗候选基因可行，为进一步研制ＨＰＶ１６ ＤＮＡ

子宫颈鳞癌 Rb 基因与 HPV16 E7 基因的相关性研究

用多聚酶链反应—单链构象多态性分析（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）以及地高辛标记探针斑点杂交技术对３０例子宫颈鳞癌组织中Ｒｂ抑癌基因及ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因进行分析。结果３０例子宫颈鳞癌组织中未检出Ｒｂ基因突变或缺失；２０例癌组织中检出ＨＰＶ１６Ｅ７ＤＮＡ，阳性率为６７％。提示ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因与子宫颈鳞癌密切相关。子宫颈鳞癌中Ｒｂ基因结构异常并不常见，而且与ＨＰＶ１６Ｅ７基因的存在状况无明显相关性。

人乳头瘤病毒6b型晚期蛋白L_2免疫反应表位的确定

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）含有２个晚期开放读码框（ＯＲＦ），Ｌ＿２ＯＲＦ编码的蛋白具有型特异性。本研究用能表达产生完整ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的质粒ｐ６ｂＬ＿２ＮＸ，采取核酸外切酶Ⅲ定向连续次级克隆的方法，制备了一系列一端逐渐删切的ＤＮＡ片段，诱生一组从Ｃ端至Ｎ瑞依次减少的Ｌ＿２蛋白与相应血清作免疫印迹实验，最小的仍保持阳性反应的多肽即含有抗原表位，实验结果ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的核酸编码区位于５４８１－５５０６之间，其相应氨基酸序列是ＥＰＧＩＮＰＴＱ。

“课程渗透模式”与七年制医学微生物教学

七年制高等医学教育是以培养达到硕士水平高级医学人才为目标的新型培养形式。如何针对七年制教育的特点，探索医学教育新模式，培养符合21世纪医学科技发展要求的高层次医学人才，是当今医学教育改革的一个重要课题。医学微生物学在七年制教学全过程的第四年第一学期开设，作为一门独立的专业基础课，学时多，要求高。显然，该层次的教学内容和方法不应等同于医学本科的教育和一般的硕士研究生培养。在目前尚无统一的七年制医学教育教学大纲和相应教材的情况下，如何达到加深、拓宽教学之目的，我们认为采用“渗透模式”教学方法较为理想。

黄芪、人参增强人心肌细胞代谢的实验研究

实验表明,黄芪或人参使人心肌细胞乳酸脱氢酶及琥珀酸脱氢酶含量有不同程度的增高;人参使培养心肌细胞cAMP含量升高,而黄芪无明显影响。

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试。

用原位杂交技术检测人子宫颈癌组织中HPV16E_6转化基因的研究

应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒１６型Ｅ６（ＨＰＶ１６Ｅ６）转化基因ＤＮＡ探针，经用斑点杂交检测，探针特异性强，灵敏度达０．１ｐｇ，应用组织切片原位杂交技术检测了４４例子宫颈癌组织。结果表明，ＨＰＶ１６Ｅ６阳性２７例、占６１．３６％，５例正常对照子宫颈组织中未检出。提示ＨＰＶ１６Ｅ６转化基因与子宫颈癌密切相关，为阐明子宫颈癌的病因和ＨＰＶ１６Ｅ６在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据。