全反式维甲酸抑制核因子E2相关因子2和血红素加氧酶1加重大鼠肾脏缺血再灌注损伤表达

目的 观察用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)抑制核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)是否会加重大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)表达。方法 2020年10月至2022年2月选取24只健康成年雄性SD大鼠切除右肾,并按随机数字表法分为3组(n=8),即假手术组(Sham)、肾脏缺血再灌注(I/R)组、全反式维甲酸(I/R+ATRA)组。其中Sham组和I/R组给予腹腔注射玉米油(1 m L·kg^(-1)·d^(-1))1周,ATRA组则给予腹腔注射溶于玉米油的ATRA(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))1周后,3组大鼠用10%的水合氯醛(0.3 m L/100 g)进行麻醉后固定四肢,将其在37℃条件下沿腹中线打开腹腔并分离出左肾动脉。其中Sham组切除右肾,不予以夹闭左肾动脉;I/R组和ATRA组采用右肾切除联合左肾动脉夹闭45 min后再灌注24 h的方法建立大鼠肾脏I/R模型。实验结束后收集3组大鼠血清及肾组织标本,用比色法检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)浓度;HE染色法观察肾组织病理改变;TUNEL法进行肾组织细胞凋亡的检测;二氢乙啶(DHE)荧光染色评估肾组织活性氧的表达情况;通过比色法检测肾组织丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用蛋白质印迹法分别对Nrf2、HO-1的表达进行检测。结果 与Sham组相比,I/R组大鼠肾组织Nrf2、HO-1蛋白表达量均增加(P<0.01),活性氧表达量增加,SOD活性下降,MDA含量、血清Scr、BUN浓度升高(P<0.01),肾小管损伤评分及凋亡细胞表达较高(P<0.05),其中Nrf2蛋白和HO-1蛋白分别为0.52±0.09和0.37±0.79,高于Sham组的0.06±0.01和0.02±0.01。与I/R组相比,I/R+ATRA组大鼠肾组织Nrf2、HO-1蛋白显著减少(P<0.01),活性氧表达量明显增加,SOD活性严重下降,MDA含量、血清Scr、BUN浓度明显升高(P<0.01),肾小管损伤评分显著增加,肾脏凋亡细胞表达亦增高(P<0.05),其中I/R+ATRA组Nrf2蛋白和HO-1蛋白分别为0.29±0.04和0.15±0.03,显著低于I/R组。结论 Nrf2/HO-1通路参与肾脏缺血再灌注损伤过程,ATRA可能通过抑制Nrf2/HO-1通路,加重氧化应激,进一步加重肾脏缺血再灌注损伤。

硫化氢通过调节Nrf2/HO-1通路对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的观察硫化氢是否可以通过调节Nrf2/HO-1通路减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤。方法选取24只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham组)、肾脏缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组、I/R+NaHS组,每组8只。I/R组及I/R+NaHS组用微动脉夹夹闭左肾蒂45 min后解除,建立缺血性急性肾损伤模型;sham组不给予夹闭,余操作与I/R组及I/R+NaHS组相同。24 h后留取各组肾组织和血标本。Western blot法检测Nrf2及其下游HO-1蛋白表达;比色法检测肾组织SOD、MDA含量;用ROS荧光探针、二氢乙锭(DHE)染色、荧光显微镜下观察肾组织ROS表达;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡情况;比色法检测血中尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平评估肾功能;HE染色法观察肾脏组织学改变。结果与sham组相比,I/R组肾组织Nrf2、HO-1蛋白表达增加(P<0.05),SOD活性下降、MDA含量增高(P<0.01),ROS表达增加(P<0.01),血清肌酐、尿素氮显著增高(P<0.05),肾小管损伤加重(P<0.01),凋亡细胞明显增加(P<0.05)。与I/R组相比,I/R+NaHS组肾组织Nrf2、HO-1蛋白表达增加(P<0.05),SOD活性升高、MDA含量降低(P<0.01),ROS表达减少(P<0.01),血清肌酐、尿素氮降低(P<0.05),肾小管损伤减轻(P<0.01),凋亡细胞减少(P<0.05)。结论硫化氢可能通过调节Nrf2/HO-1通路减轻大鼠肾缺血再灌注损伤。

三棱内酯B的药理作用研究进展

三棱内酯B来源于三棱,是一种具有氧杂蒽酮和异香豆素类的多酚化合物。基于三棱内酯B在抗炎、抗肿瘤、抗纤维化、抗血栓、抗HIV-1病毒等药理方面的多种活性,综述了三棱内酯B的药理作用及其作用机制,以期为三棱内酯B的深入研究提供参考。

外源性硫化氢抑制TLR2和TLR4表达并减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤

目的观察外源性硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)能否抑制Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达、减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)。方法24只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为3组:假手术(Sham)组、肾脏缺血再灌注(I/R)组、NaHS+I/R组。采用右肾切除联合左肾动脉夹闭45 min后再灌注24 h的方法诱导肾IRI。夹闭左肾动脉前,NaHS+I/R组给予NaHS(300 nmol/min)连续输注10 min,Sham组和I/R组则给予等体积生理盐水。分别留取各组腹主动脉血及肾组织标本。Western印迹法检测肾组织TLR2、TLR4蛋白的表达;免疫组织化学法检测肾组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;比色法检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)。HE染色观察肾脏组织学改变;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。结果与Sham组比较,I/R组的TLR2、TLR4、IL-6、TNF-α表达均增加(P<0.05),BUN、Scr亦明显升高(P<0.05),肾小管上皮损伤评分较高(P<0.05),肾组织凋亡细胞增加(P<0.05)。与I/R组比较,NaHS+I/R组的TLR2、TLR4、IL-6、TNF-α表达均减少(P<0.05),BUN、Scr亦明显下降(P<0.05),肾小管上皮损伤评分较低(P<0.05),肾组织凋亡细胞减少(P<0.05)。结论外源性H2S可以抑制TLR2、TLR4途径,减少炎症因子释放及细胞凋亡,减轻大鼠肾脏IRI。