党参多糖对衰老模型小鼠的抗衰老作用

目的 研究党参多糖（CPPS）抗衰老的作用.方法 选用D-半乳糖（D-gal）诱导建立衰老模型,CPPS分别按250、150、50 mg/kg连续灌胃,观察CPPS对小鼠血清、肝脏组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）的影响.结果 CPPS可以显著提高SOD、GSH-Px的活性（P ＜0.05～0.01）,降低MDA含量（P＜0.01）.结论 CPPS具有一定的抗氧化抗衰老的作用.

党参多糖抗氧化作用及其对果蝇寿命的影响

目的:研究党参多糖(CPPS)抗氧化及延缓衰老的作用。方法:选用D-半乳糖(D-gal)诱导建立衰老模型,CPPS分别按高剂量(250mg/(kg.d))、中剂量(150mg/(kg.d))、低剂量(50mg/(kg.d))连续灌胃50d,观察CPPS对小鼠脑、肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的影响;用CPPS高剂量(0.08%)、中剂量(0.016%)、低剂量(0.0032%)培养果蝇,进行果蝇生存实验。结果 CPPS可以显著提高SOD、GSH-Px的活性(P<0.05或P<0.01),降低MDA含量(P<0.05)。高、中剂量CPPS都显著提高果蝇平均寿命和最高寿命(P<0.05)。结论 :CPPS具有一定抗氧化延缓衰老的作用。

血管内皮生长因子基因转染的人脂肪干细胞具有较强的增殖和分化能力

目的研究过表达血管内皮生长因子(VEGF)对人脂肪干细胞(hADSC)的细胞表型、增殖能力和多向分化潜能的影响。方法利用脂质体法将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转染第2代hADSC,对照组为脂质体空载体。免疫荧光染色验证转染成功,流式细胞术检测两组细胞表型的差异,MTT法检测细胞增殖能力,诱导其成脂和成骨分化并进行油红O和茜素红染色。结果转染组可见EGFP和VEGF的表达,对照组无EGFP表达。两组细胞均高表达CD29、CD44、CD90,低表达CD31、CD45。转染组hADSC的增殖能力显著强于对照组,且诱导分化后的脂滴和钙结节的数量和面积均显著高于对照组。结论过表达VEGF可增强hADSC的增殖能力,促进其成脂和成骨分化,但并未显著改变细胞表型。

GnRH激动剂主动免疫母羊对生殖激素分泌的作用

目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300、0、7、14和21天各一次,共4次;对照组在0和14天皮下注射抗原溶媒(除不用阿拉瑞林外,其余成分和制备方法与阿拉瑞林抗原相同)2.0 ml。无菌采集不同时段的血液,分离血清。以ELISA测定血清GnRH抗体浓度,用激素检测试剂盒(ELISA)分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果:①阿拉瑞林首次免疫7天后,各实验组的抗体浓度逐渐升高,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28、28和35天达到峰值(P<0.05),EG-IV和EG-V则在在45天达到峰值(P<0.01),至60天时仍明显高于对照组(P<0.05)。14～60天间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ(P<0.05)。②EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21和28天抵谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45天抵谷值(P<0.01),且以EG-Ⅴ为最低。谷值之后逐渐上升趋势,70天时达到免疫注射前水平。③实验组血清FSH浓度始终高于对照组(P<0.05)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于28、28和35天达到峰值(P<0.05),而EG-IV和EG-V在60天达到高峰值(P<0.01)。④实验组绵羊血清LH呈下降趋势,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在21、21和28天达到谷值(P<0.01),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35天达到谷值(P<0.01)。35天时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。⑤各组的血清E2含量无显著差异。结论:GnRH激动剂(阿拉瑞林)抗原主动免疫可促进GnRH抗体的生成,抑制母羊GnRH和LH的合成与分泌,增强FSH的合成与分泌,且随着注射剂量和注射次数的增加,这种作用更加明显,而对血清E2无明显影响。

阿拉瑞林主动免疫对绵羊垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及卵巢GnRHR分布的影响

为探讨促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂主动免疫对绵羊腺垂体GnRH受体(GnRHR)、促卵泡激素受体(FSHR)和促黄体激素受体(LHR)表达及分布的影响,将42只5～6月龄母绵羊分为6组(n=7),即EG-Ⅰ组、EG-Ⅱ组、EG-Ⅲ组、EG-Ⅳ组、EG-Ⅴ组和对照组(CG)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组绵羊分别皮下注射200μg、300μg和400μg阿拉瑞林抗原,分2次皮下注射(0 d和14 d),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组绵羊分别皮下注射200μg和300μg阿拉瑞林抗原,分4次皮下注射(0 d、7 d、14 d和21 d),对照组(CG)绵羊皮下注射2.0 ml溶剂,分2次(0 d和14 d)。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢,提取垂体总RNA,PCR扩增,反转录,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,免疫组织化学SP法染色。结果表明,GnRHR、FSHR和LHR mRNA PCR扩增曲线的起始循环数分别为20、28和24。5个试验组Gn-RHR、FSHR和LHR mRNA值均低于对照,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组的mRNA值逐渐下降;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组的mRNA值分别低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ组。GnRHR阳性染色主要分布在卵泡细胞以及卵母细胞胞质和胞核及胞膜。各组的染色强度不同,以EG-Ⅲ阳性染色最为明显。阴性对照全部为阴性。显微图像的绿色值和亮度无显著差异,各组灰度值差异显著(P<0.05),以EG-Ⅱ均为最小,EG-Ⅴ最高。EG-Ⅰ的饱和度最小(P<0.05),EG-Ⅲ最高。上述结果说明阿拉瑞林抗原免疫抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNA表达,GnRHR阳性染色主要在卵母细胞和卵泡细胞的胞核和胞质。阿拉瑞林免疫可抑制卵巢GnRHR的分布与表达,增加注射剂量和次数作用更明显。

GnRH激动剂主动免疫对GnRHR在腺垂体与子宫表达及分布的作用研究

目的探讨GnRH激动剂主动免疫对绵羊腺垂体与子宫GnRHR表达及分布的影响,为深入研究GnRH-A调节生殖功能的机理及合理应用提供依据。方法 28只5～6月龄健康母绵羊(Ovis aries)随机分为4组(n=7),实验Ⅰ组(EG-Ⅰ)、实验Ⅱ组(EG-Ⅱ)和实验Ⅲ组(EG-Ⅲ)于0 d和14 d分别皮下注射阿拉瑞林抗原200μg、300μg和400μg(0 d和14 d各1次);对照组(CG)皮下注射2.0 ml药物的溶媒(0 d和14 d各1次)。各组于70 d无菌切取腺垂体和子宫。提取腺垂体总RNA,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测GnRHR mRNA表达的变化,Western blotting分析子宫GnRHR蛋白表达,免疫组织化学SP法染色检测GnRHR表达的变化。结果 EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ腺垂体GnRHR mRNA表达量均低于对照组,以EG-Ⅲ最小(P<0.01)。与CG相比,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ子宫GnRHR蛋白表达水平分别减少3.46%、4.90%和24.78%(P<0.05)。子宫组织中有GnRHR分布主要见于子宫内膜细胞和子宫腺上皮细胞的胞质和胞核,EG-Ⅲ灰度值显著低于CG(P<0.05)。结论 GnRH激动剂主动免疫可以剂量依赖性地抑制垂体GnRHR mRNA和子宫组织中GnRHR蛋白的表达。GnRHR主要分布在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞的胞核和胞质,GnRHR激动剂免疫对子宫中GnRHR的分布具有抑制作用。

Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用

目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5～6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、300μg,0、7、14和21 d各1次;对照组皮下注射药物的溶媒。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。实时荧光定量PCR测定GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。ELISA测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNAs的2-(ΔΔCt)值均低于对照组,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的GnRHR、FSHR和LHR mRNA的2-(ΔΔCt)值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ(P<0.05)。EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH在21和28 d达到谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45d达到谷值(P<0.01)。实验组血清FSH始终高于对照组(P<0.05),EG-IV和EG-V在45和60 d达到峰值(P<0.01)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ血清LH分别在21、21和28 d抵至谷值(P<0.05),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35 d抵至谷值(P<0.01);35 d时,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。结论阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNAs表达,促进FSH的合成与释放,降低GnRH和LH的合成与释放,增加抗原的注射剂量和次数,作用更明显。

PttKNI基因过表达对斑叶竹节秋海棠叶型的影响

利用农杆菌介导的叶盘法对斑叶竹节秋海棠进行遗传转化后,采用表现型观察法、石蜡切片法、扫描电镜法对叶片进行观察研究。结果表明:从抗性愈伤组织中分化出168株再生植株,其中72株表现出与野生型相似的表型,96株呈现不同的表型变化,主要有珊瑚状株型、异源小叶型、异常叶序型和矮小簇生型4类。除上述株型改变外,约60%的转基因植株只在局部发生各种叶片形态的改变。横向石蜡切片观察发现野生型叶片的表皮细胞呈规则的四边形或多边形,排列整齐,主脉明显,远轴面微有隆起。异源小叶型叶片则表现为叶片扭曲,无明显主脉,背腹面不易区分;表皮细胞较小,呈不规则圆形或三角形,排列紊乱;叶表面有异源分生组织产生。扫描电镜分析发现,野生型叶片表面平坦光滑,细胞大小相似,呈多边形规则排列。而异源小叶型叶片的近轴面凹凸不平,有许多大小和形状不同的突起,细胞的形状和排列极度不规则,并且有若干异源叶形成;在异源叶的基部可见一些不规则结构,这些不规则结构可以发育为新的异源小叶。

遗传学精品课程建设的实践与探索

介绍西北民族大学生命科学与工程学院近几年来遗传学课程的发展情况,分别从遗传学理论教学改革、遗传学实验课教学改革以及教学方法与教学手段的改革3个方面进行阐述。

蒲公英根际微生物分离及生化初步鉴定

文章采集蒲公英的根际土壤,通过平板划线法分离出单菌落,进行革兰氏染色等生理生化鉴定,结果表明,分离得到的四株蒲公英根际微生物,分别属于假单胞菌属(Pseudomonas)、微球菌属(Micrococcus)、链球菌属(Streptococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus),其中微球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属为常见的革兰氏阳性菌.

兰州大尾羊超数排卵技术试验研究

为了探索兰州大尾羊的超数排卵技术,确定优良方案,27只2-3岁健康母羊均分为3组（EG-1、EG-2和EG-3）,EG-1组用300IU FSH递减法注射、EG-2组应用200IU FSH递减法注射和EG-3组肌肉注射150μg阿拉瑞林法不同处理方法进行超排试验。结果表明：EG-2组（200 IU FSH）的排卵数、回收胚胎数和可用胚胎数均高于EG-3组（P〈0.05）,EG-1组和EG-3组无显著差异。在两个羊场233只母羊应用FSH 200IU递减法超排后,两个羊场的平均怀孕率为90.41%,（89.58%vs 91.24%）,产羔率为146.72%（143.02%vs 150.41%）。200IU FSH递减法是兰州大尾羊的理想超数排卵方案。

发根农杆菌转染纹党产生毛状根试验

试验采用正交试验法探究不同OD值、侵染时间及外植体类型对诱导纹党产生毛状根的最佳条件,结果表明,采用OD值0.8A、侵染时间10min与纹党幼嫩叶片作为外植体的试验组处理效果最好,毛状根诱导率可达55.6%。纹党幼嫩叶片作为外植体诱导毛状根处理效果最好,纹党根、纹党茎段及无菌苗皆不适宜作为诱导材料。经形态学观察,诱导出的根基本符合毛状根的特征,PCR扩增得到865bp的DNA目的条带,证明试验得到的根为发根农杆菌R1601侵染诱导得到的毛状根。

DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达

目的：研究脂质体介导的血管内皮生长因子（VEGF）基因转染人脂肪干细胞（hASCs）及VEGF的表达。方法：胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载。免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化。结果：1ml吸脂术脂肪可得到（4.38±0.21）×10^5个细胞,第4代时hASCs高表达CD90（81.49%）,低表达CD19（6.37%）、CD31（14.91%）、CD34（17.56%）和CD45（15.39%）,诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性。分光光度计显示质粒DNA浓度为595ng/μl。转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为（43.69±18.53）%;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF。转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高。