LAMS对肝癌细胞株Bcl-2、BaX基因蛋白的影响

目的：研究ＬＡＭＳ对肝癌细胞株的Ｂｃｌ－２、ＢａＸ基因蛋白影响。方法：用ＭＴＴ法测定不同浓度ＬＡＭＳ对肝癌细胞株增殖的抑制作用；用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化法测定不同抑制程度下凋亡细胞量和Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ基因蛋白的变化。结果：ＬＡＭＳ浓度与肝癌细胞增殖的抑制程度、凋亡细胞数、Ｂｃｌ－２基因蛋白表达减少及ＢａＸ基因蛋白表达增加呈正相关。结论： ＬＡＭＳ可通过影响Ｂｃｌ－２、ＢａＸ基因蛋白的表达促使肝癌细胞凋亡。

A_(549)细胞免疫抑制因子及香菇多糖对T细胞增殖的影响

目的 :研究A54 9人肺腺癌细胞产生的免疫抑制因子及香菇多糖对T细胞转化的影响。方法 :以MTT法测定加A54 9细胞免疫抑制因子及香菇多糖后T细胞的转化率。结果 :T细胞的转化受该免疫抑制因子抑制 ,且抑制程度与免疫抑制因子浓度成正相关。适当浓度的香菇多糖能有效地拮抗此抑制。结论 :A54 9细胞产生的免疫抑制因子可抑制T细胞转化 。

肝癌细胞分泌物对凝血系统的直接影响

目的：探讨肝癌细胞分泌物对凝血系统的直接影响。方法：以一期法测定肝癌细胞分泌物对ＡＰＴＴ、ＰＴ、ＴＴ及Ⅷ、Ｖ因子活性的影响。结果：肝癌细胞分泌物使正常血浆ＡＰＴＴ缩短、ＴＴ延长、Ⅷ因子活性增加、Ｖ因子活性降低。异常血浆ＰＴ、ＴＴ延长。结论：肝癌细胞分泌物可直接改变血浆凝血像。

LAMS抑制肝癌细胞增殖和促凝活性的实验研究

目的：观察ＬＡＭＳ抑制肝癌细胞增殖和促凝活性的效果。方法：比较ＬＡＭＳ处理的肝癌细胞生长曲线、ＡｇＮｏＲｓ含量变化；用一步法ＡＰＴＴ测定ＬＡＭＳ拮抗肝癌细胞分泌物的促凝血作用。结果：ＬＡＭＳ处理后的肝癌细胞增殖受抑制、ＡｇＮｏＲｓ数量减少，ＬＡＭＳ能拮抗肝癌细胞分泌物对ＡＰＴＴ的影响。结论：ＬＡＭＳ可有效地抑制肝癌细胞增殖和促凝活性。

昆布多糖硫酸酯对化疗药物治疗肝癌细胞的增敏作用

目的 :探讨LAMS对肝癌细胞化疗的增敏作用。方法 :以免疫组化法测定用LAMS前后肝癌细胞Bcl -2基因蛋白含量 ,以MTT法分别测定5 -Fu、MTX、MMC、ADM、CTX与LAMS联合及单独治疗肝癌细胞的IC50 以及有效作用时间。结果 :LAMS使肝癌细胞Bcl-2基因蛋白表达下降 ,并使肝癌细胞对5 -Fu、MTX、MMC、ADM、CTX的敏感性增加 ,有效作用时间延长。结论 :LAMS可有效地增加肝癌细胞对5 -Fu、MTX、MMC、ADM。

人EGFR显性负性突变体负调控内源性EGFR功能的机制分析

通过定向克隆法构建真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR,脂质体介导下转染体外培养的SGC-7901细胞,应用Western blotting检测DNEGFR-EGFP蛋白的表达,激光共聚焦显微镜对DNEGFR-EGFP亚细胞结构定位检测;并经RT-PCR、Western blotting检测DNEGFR-EGFP对内源性EGFRmRNA水平、蛋白及磷酸化水平的影响.成功检测到DNEGFR-EGFP蛋白的表达,DNEGFR-EGFP蛋白主要定位于细胞膜,DNEGFR-EGFP能降低内源性EGFR蛋白磷酸化水平,而对内源性EGFRmRNA水平及蛋白水平无影响.研究证明DNEGFR通过降低内源性EGFR蛋白磷酸化水平负调控EGFR功能,为靶向EGFR显性负性策略在肿瘤生物治疗中的进一步研究打下基础.

人表皮生长因子受体显性负性突变体对胃癌细胞体外侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨人表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)显性负性突变体(Dominant negative epidermalgrowth factor receptor,DNEGFR)对胃癌细胞体外侵袭转移能力的影响及其分子机制。方法:构建pEGFPN1-DNEGFR,转染人胃癌细胞并筛选稳定转染株,采用Transwell侵袭小室模型检测人胃癌细胞体外侵袭转移能力,RT-PCR检测细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA水平,酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养液MMP-2和MMP-9蛋白水平。结果:成功构建pEGFPN1-DNEGFR,转染并筛选出稳定转染株,检测到人胃癌细胞体外侵袭转移能力降低,细胞MMP-2和MMP-9 mRNA水平降低,培养液MMP-2和MMP-9蛋白水平降低。结论:DNEGFR通过抑制人胃癌细胞分泌MMP-2和MMP-9,使其体外侵袭转移能力显著降低,将为DNEGFR在胃癌生物治疗中的深入研究打下基础。

人瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养及生物学行为研究

目的:建立可靠的人瘢痕疙瘩成纤维细胞培养方法,为瘢痕疙瘩体外研究提供平台。方法:采用组织块贴壁法进行瘢痕疙瘩成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养;描述其生长曲线、分裂指数、形态及波形蛋白表达。结果:瘢痕疙瘩成纤维细胞培养成功率43%(6/14),48～65天可传第一代,以后每5～10天可传一代,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性。结论:培养出的瘢痕疙瘩成纤维细胞可用作体外实验研究。

人表皮生长因子受体显性负性突变体诱导胃癌细胞发生G0／G1期阻滞

目的:探讨人表皮生长因子受体显性负性突变体(dominant negative epidermal growth factor recep-tor,DNEGFR)对胃癌细胞细胞周期的影响及其分子机制。方法:选用2株人胃癌细胞,分为如下6组:SGC-7901细胞未转染组(US组)、SGC-7901细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组)、SGC-7901细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组)、NCI-N87细胞未转染组(UN组)、NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(EN组)和NCI-N87细胞pEGF-PN1-DNEGFR质粒转染组(DN组)。采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2(CDK2)、cyclin D1、Ser9位点磷酸化糖原合成酶激酶3β[p-GSK-3β(Ser9)]、p21和p27蛋白水平。结果:转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现G0/G1期阻滞,CDK2、cyclin D1和p-GSK-3β(Ser9)蛋白水平降低,p21和p27蛋白水平则升高。结论:DNEGFR通过激活GSK-3β使cyclin D1蛋白水平降低,并降低CDK2蛋白水平,上调p21和p27蛋白水平,最终导致胃癌细胞发生G0/G1期阻滞。这一结果将为胃癌生物治疗研究提供新思路。

昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞的调控

目的 :研究昆布多糖硫酸酯 (LAMS)对急性髓性白血病HL - 6 0细胞株的调控作用。方法 :用MTT法测定不同浓度LAMS对HL - 6 0细胞株的增殖抑制作用 ;流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率 ;免疫组化法测定LAMS对HL - 6 0细胞株NF -κB家族P6 5亚单位的作用。结果 :HL - 6 0细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关 ;HL - 6 0细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高 ;在LAMS浓度为 0 .75 μg/ml作用下 ,P6 5在 12h表达呈强阳性 ,2 4h几乎不表达 ,而IKbα在6h表达呈强阳性。结论 :LAMS可以诱导体外HL - 6 0细胞凋亡 ,其中对凋亡的调控作用可能为负调控 ;LAMS能够调控NF-κB的表达 ,其表达有时间差异性。说明LAMS已作用于分子水平。

汉防己甲素预防椎板切除术后硬膜外粘连的实验研究

目的观察汉防己甲素预防椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法制作动物模型,以汉防己甲素为植入材料,并设阳性及空白自身对照,在不同时相点行大体、显微观察及MRI检测。结果椎板切除后硬膜粘连发生的高峰在8周以内,汉防己甲素能抑制椎板切除术后硬膜外粘连,4周以内效果与游离脂肪移植效果相近,8周以后的效果则强于游离脂肪移植,在观察时间内没发现明显不良反应。结论汉防己甲素能有效地降低椎板切除术后硬膜外粘连,且无明显不良反应。

乳癌细胞分泌物对凝血系统的影响

目的 探讨乳癌 (MCF- 7)细胞株分泌物对凝血系统的影响 .方法 分别测定高低两种浓度的乳癌细胞分泌物对正常血浆和异常血浆的部分凝血活酶时间 (APTT) ,凝血酶原时间 (PT) ,凝血酶时间 (TT)值和 V ,V因子活性的影响 .结果 两种浓度的乳癌细胞分泌物均可使正常血浆APTT(s)显著缩短 (37.6± 0 .3) vs (31.0± 0 .5 ) ,(2 6 .0±0 .5 ) ,P<0 .0 5 ,而对 PT无影响 ,使异常血浆的 PT(s)延长(18.7± 0 .5 ) vs(2 3.6± 0 .5 ) ,(31.6± 0 .8) ,P<0 .0 5 ,而对APTT无影响 ;只有高浓度的分泌物能使 TT(s)延长 [正常血浆 (15 .8± 0 .6 ) vs(18.8± 0 .4 ) ,异常血浆 (18.8± 0 .5 ) vs(2 2 .4± 0 .5 ) ,P<0 .0 5 ].两种浓度的乳癌细胞分泌物均可使 V 因子活性增强 (12 5± 11) vs(170± 10 ) ,(2 5 0± 13) ,P<0 .0 5 ,只有高浓度的分泌物能使 V因子活性降低 (89± 10vs75± 9,P<0 .0 5 ) .

探讨端粒酶在沙利度胺诱导U266细胞增殖抑制及凋亡中的意义

目的:探讨端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA的变化在监测沙利度胺诱导多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)U266细胞增殖抑制、凋亡中的意义。方法:CCK-8法测定沙利度胺对U266细胞增殖抑制作用;流式细胞仪检测U266细胞凋亡率;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附实验(TRAP-ELISA)检测端粒酶活性;逆转录聚合酶链反应检测hTERT mRNA表达水平。结果:沙利度胺对U266细胞有增殖抑制和促凋亡作用,且均呈时间-浓度依赖性;10μg/ml沙利度胺作用24 h和48 h,端粒酶活性值分别为(7.96±0.09)和(7.65±0.07),相比对照组均无明显变化(P=0.082 0),hTERT mRNA表达分别为(2.82±0.03)和(2.31±0.04),与对照组相比表达均下降,差异有统计学意义(P=0.033 0);50μg/ml和100μg/ml沙利度胺作用U266细胞24、48 h及72 h,端粒酶活性、hTERT mRNA表达分别与对照组比较表达均下降,差异有统计学意义(P=0.002 8)。结论:沙利度胺诱导U266细胞增殖抑制、凋亡与端粒酶有关;与端粒酶活性相比,hTERT mRNA改变更灵敏,可作为沙利度胺治疗MM疗效判定指标之一。

HO-1对DXR免疫反应影响的实验研究

目的探讨HO1对延迟性异种心脏移植免疫反应的影响。方法应用NIH小鼠Wistar大鼠颈部异位心脏移植模型,用CoPP(cobaltprotoporphyrin,CoPP)诱导HO1并结合免疫抑制剂CyclosporineA(CSA)及Cyclophosphamid(CYP)处理受体。比较移植心脏存活时间并分别用免疫组化、Westernblot蛋白印迹杂交等检测移植心脏HO1、IL1β、INFγ、TNFα和STAT3表达,免疫组化检测并计数分析CD68细胞,比较不同处理因素之间的差异。结果单用CoPP诱导HO1后移植心脏存活时间较CSA组及空白对照组长(t=2.6936,P<0.05),CSA+CoPP组移植心脏存活时间和CYP+CoPP组均长于单用CSA组和CYP组(t=2.8511,P<0.05),CoPP+CSA+CYP组移植心脏存活时间优于其余任何组(t=3.8644,P<0.001)。CoPP组TNFα、IL1β低于在空白对照组的表达(t=2.6364,P<0.05),但INFγ除外。三者在CoPP+CSA+CYP组表达均低于其余各组。CoPP及CSA、CYP组间STAT3表达无差异(t=1.0854,P>0.05),但均高于空白对照组(t=10.1254,P<0.001)。CoPP与CSA及CYP联合应用时STAT3表达高于单用CoPP组(t=2.8164,P<0.05),三者联合使用时高于任何组(t=2.5605,P<0.05)。CoPP组移植心肌组织中CD68阳性细胞数低于空白对照组(t=3.1837,P<0.01),CoPP+CSA+CYP组最低(t=2.5099,P<0.05)。结论HO1并联合免疫抑制剂CSA、CYP可能通过上调STAT3蛋白表达,减少CD68细胞对移植心脏的浸润,降低心脏移植后炎症细胞因子IL1β、TNFα和IFNγ的产生,并可能由此推迟了DXR的发生。

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响。方法制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率。结果经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高。结论昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化。

供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响

目的探讨供体血管内皮细胞对小鼠-大鼠移植心脏存活时间的影响。方法分离小鼠血管内皮细胞并于移植前14d注入大鼠阴茎背静脉2×106细胞/只或联合注射环磷酰胺20mg/kg.d。异位小鼠-大鼠心脏移植后观察供心存活时间。结果成功分离小鼠血管内皮细胞,注射小鼠血管内皮细胞14d后,移植心脏平均存活时间(10±1.414)min,组化染色显示供心有IgM、C3沉积,血浆IgM、IgG、C3、C4较未注射血管内皮细胞组明显增高;联合使用环磷酰胺能延长供心成活时间(19.44±2.6034)min(t=2.880,P<0.01)。结论外周静脉注射供体血管内皮细胞不能诱导延迟性异种移植排斥反应(DXR)的免疫耐受,却促使发生HAR。联合环磷酰胺可延长供心存活时间。

人EGFR显性负性突变体抑制胃癌细胞促血管形成能力

目的探讨人表皮生长因子显性负性突变体(dominant negative epidermal growth factor receptor,DNEGFR))对胃癌细胞促血管形成能力的影响及其分子机制,并检测其对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法选用2株人胃癌细胞,分为如下6组:SGC-7901及NCI-N87细胞未转染组(US组,UN组),SGC-7901及NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组,EN组),SGC-7901及NCI-N87细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组,DN组)。采用人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cell,HUVEC)管腔结构形成实验检测体外促血管形成能力,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平,建立人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,标本微血管密度(microvessel density,MVD)检测体内促血管形成能力,标本体积检测其对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。结果转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现HUVEC管腔结构形成抑制,培养液中VEGF水平降低,MVD计数降低,裸鼠皮下移植瘤体积变小。结论 DNEGFR可能通过下调VEGF分泌抑制胃癌细胞体外及裸鼠体内促血管形成能力,最终抑制裸鼠皮下移植瘤生长。

大肠癌病人血清总胆固醇水平的观察

本文报道51例大肠癌病人手术前后血清总胆固醇（TSC）的变化，同时以26例大肠良性病人和30例健康人作为对照。结果表明大肠癌病人TSC明显高于大肠良性病组和健康组，而健康组与大肠良性病组之间无明显差异。手术切除癌瘤后，TSC明显降低；而癌瘤未切除者及大肠良性病者，其手术前后的TSC则无差异。因此，笔者认为，高TSC可能与大肠癌的发病有一定关系，并对初步评估手术疗效和预后也可能有一定价值，但尚缺乏动态观察和随访，有待日后继续研究。

血清碱性蛋白联合紫色反应对肿瘤的筛检价值

目的:用比色及电泳法探索肿瘤生化标志物对常见肿瘤的筛检价值。方法:用改良的血清碱性蛋白电泳(SBPE)及紫色反应检测对照组、炎症组及肿瘤组的血清碱性蛋白(SBP)及肿瘤指数。结果:两项指标对肿瘤组的阳性率为86.7%,特异性77.2%,总有效率83.5%;对常见肿瘤的阳性率分别为:子宫及卵巢癌96.6%,子宫及卵巢肿瘤95.1%,胰腺癌91.2%,肺癌91.2%。肝癌91.1%,直/结肠癌79.4%,胃癌62.5%;子宫及卵巢癌的SBP阳性率90.0%、肿瘤指数83.3%,良性肿瘤时分别为90.2%及31.7%。结论:SBP与肿瘤指数串联是常见肿瘤简单、经济、快速而灵敏的筛查方法,并在子宫及卵巢肿瘤的鉴别诊断中有意义。