抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。

鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达

B7-2蛋白为免疫球蛋白超家族(IGSF)成员之一。采用PCR法从分泌鼠抗人B7-2抗体的杂交瘤细胞株克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3编码序列,体外构建抗人B7-2的鼠源单链抗体基因B7-2-ScFv。利用新型杂交病毒HyNPV的Bac-to-Bac表达系统,将B7-2-ScFv基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-B7-2-ScFv,转化大肠杆菌DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-B7-2-ScFv。将此重组杆粒的DNA转染Sf9细胞,获得重组病毒HyNPV-ScFv。感染该重组病毒的BmN细胞经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,至感染24h时目的蛋白已有表达,96h达到最高表达水平,表达产物的分子质量约31kD。用该重组病毒感染家蚕5龄起蚕,感染后96h蚕体表现出明显的发病症状。RT-PCR结果表明,5龄起蚕感染后48h,在脂肪体内已有目的基因转录,一直持续到感染后120h;SDS-PAGE和Western blotting分析表明,5龄起蚕感染96h后方可在脂肪体中检测到目的蛋白表达。构建并在家蚕中成功表达鼠抗人B7-2单链抗体,为深入研究和开发该抗体奠定了基础。

太湖中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)养殖模式优化及其生态环境效应研究

于2003年3—10月,通过在太湖中设置15个封闭性实验围隔,构建出5种生态型中华绒螯蟹养殖模式,即放养中华绒螯蟹(规格6·25±0·36g/ind)+螺蛳+水草分别为:3000ind/ha+0kg/ha+3000kg/ha(Ⅰ)、3000ind/ha+2250kg/ha+3000kg/ha(Ⅱ)、4500ind/ha+2250kg/ha+6000kg/ha(Ⅲ)、4500ind/ha+3375kg/ha+6000kg/ha(Ⅳ)、6750ind/ha+3375kg/ha+6000kg/ha(Ⅴ),比较分析其养殖效果及其生态环境效应。结果表明,生物学效果综合指数依次为Ⅳ>Ⅴ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ,其中Ⅳ、Ⅴ、Ⅲ显著高于Ⅱ、Ⅰ(P<0·05)。各养殖模式的水温、pH值、CODCr含量和浮游动物多样性指数、底栖动物多样性指数与湖区无显著性差异(P>0·05),而各养殖模式的DO和Ⅲ、Ⅳ的SD、水色、电导率、TSS、N、P、浮游植物密度和浮游植物多样性指数等理化和生物环境指标均显著优于湖区(P<0·05);N、P平衡分析表明,在全部采收养殖体系内水草的情况下,各养殖模式均能从水体中净输出N、P,其中Ⅲ、Ⅳ的净输出效率最高。相关分析显示,养殖体系内的水质环境状况随着水草和螺蛳数量的增加而得到显著改善。因此,增栽水草、放养螺蛳、适中的中华绒螯蟹放养量和适宜的管理措施是维持中华绒螯蟹养殖生态系统环境效益和养殖效益良好的重要条件,有利于太湖渔业生产和环境保护的可持续发展。

小学体育教学改革研究

体育教学是学校教学的重要组成部分,能够让学生在文化学习之余得到身心的放松与锻炼,劳逸结合,有利于学生更好地学习。小学体育课程不同于其他文化类课程,体育课程更加注重向学生传授体育知识和技能。在小学体育教学的过程中,教师也要转变自身的教育理念,创新小学体育教学模式。本文就目前小学体育课程存在的问题做了简要说明,并对小学体育教学改革的路径进行了探讨。

广东省中老年女性骨质疏松症患者骨密度、中医证型及其影响因素调查分析

目的对广东省中老年女性骨质疏松症患者骨密度、中医证型及其影响因素做横断面研究并探讨分析其关系。方法对广东省内各地(广州市、中山市、佛山市、惠州市、台山市等)医院1 453名骨质疏松症患者进行问卷调查,对所收集的资料采用SPSS统计软件进行统计分析,分析骨密度、中医证型及其影响因素(年龄、绝经年龄/年限,既往骨折史,髋部骨密度,治疗时间等)。结果最终筛选出符合标准的样本共373例,年龄介于48～95岁之间,平均年龄73.56±9.32岁,其中脾肾阳虚证130例,占34.85%,肝肾阴虚证161例,占43.16%,气滞血瘀证75例,占20.11%,其他证型7例,占1.88%。各年龄段、不同绝经年龄组间、不同绝经年限组间的患者骨密度比较差异有统计学意义(P<0.05),是否有既往骨折史和父母是否发生过髋骨骨折的骨密度比较有明显差异(P<0.05),脾肾阳虚证的患者髋部骨密度明显高于肝肾阴虚证(P<0.05),治疗时间大于6个月的患者活动度改善情况和一般情况优于治疗时间少于6个月的(P<0.05),脾肾阳虚证、肝肾阴虚证的患者接受治疗半年以上的治疗效果明显优于不超过半年的,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论广东省中老年女性骨质疏松症各年龄段的骨密度有一定的差异性,绝经年龄、绝经年限、既往骨折史、父母髋骨骨折史与骨密度有一定相关性,不同中医证型的患者接受治疗的时间不同其效果亦有差别。

跌打接骨片促进实验性骨折愈合的骨组织形态计量学研究

目的：探讨跌打接骨片对实验性骨折愈合的影响。方法：将５６只 ８月龄新西兰大白兔随机分为模型组、跌打接骨片高剂量组、跌打接骨片低剂量组和伤科接骨片对照组 ４组，每组 １４只，所有家兔均行双侧挠骨骨缺损手术。术后第 ２天开始给药，连续用药王术后第 ２２天和 ４２天时处死动物，测定桡骨骨折端的骨组织形态计量学指标。结果：用药２２天时，跌打接骨片高、低剂量组和伤科接骨片组的矿化骨痴面积、骨质面积、活性成骨面％及成骨细胞指数值均大于模型组（Ｐ＜０．０５），而矿化表面积则小于模型组（Ｐ＜０．０５）。用药４２天时，上述３组的成骨细胞活性和矿化延迟时间则分别大于和短于模型组，而其他骨计量动力学参数值则无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：跌打接骨片能明显促进家兔骨折愈合。

全髋关节置换术治疗老年人股骨颈骨折

目的 探讨全髋关节置换术治疗老年人股骨颈骨折的安全性及疗效。方法 对 46例 57～ 95岁股骨颈骨折全髋关节置换术后病例的临床资料进行回顾性分析。结果 术后早期并发症较低 ,无死亡病例。经随访参照Harris标准功能评定 ,全髋关节置换优良率为 96 %。结论 全髋关节置换术治疗老年人股骨颈骨折安全有效 ,尤其是在地区级以下基层医院应尽量开展。

中西医结合治疗骨质疏松性椎体压缩骨折36例疗效观察

目的:观察中西医结合治疗骨质疏松性椎体压缩骨折的临床疗效。方法:将36例骨质疏松性椎体压缩骨折患者的42个椎体施以经皮穿刺椎体成形术(PVP),术后内服中药(处方:肉苁蓉、熟地黄、威灵仙、甘草、菟丝子、鹿角胶、山药、杜仲、当归、白芍、山茱萸、地龙)。观察近远期临床疗效。结果:术后所有患者疼痛症状均缓解,无明显手术并发症出现,X线摄片示伤椎高度无明显变化。术后2月复查,全部病例胸腰背部疼痛未复发,X线摄片示治疗椎体高度未见进一步丢失,椎体形态未有改变。结论:中西医结合治疗骨质疏松性椎体压缩骨折,能够迅速缓解疼痛,增加椎体的强度和脊柱的稳定性,且远期效果肯定,值得推广。

跌打接骨片促进家兔骨折愈合的实验研究

为探讨跌打接骨片对实验性骨折愈合的影响 ,将 5 6只 8月龄新西兰大白兔随机分为模型对照组、跌打接骨片高剂量组、跌打接骨片低剂量组和伤科接骨片对照组 4组 ,每组 14只。所有家兔均行双侧桡骨骨缺损手术 ,术后第 2天开始给药 ,分别于术后第 2 2天和 42天分两批处死 (每次每组 7只动物 ) ,对其桡骨骨折端行 X线摄片观察、组织学观察、透射电镜观察及抗折力观察。结果表明 。

跌打接骨片治疗骨折65例疗效观察

目的:观察跌打接骨片对骨折患者的临床疗效。方法:将180例骨折患者随机分为跌打接骨片组、伤科接骨片组和空白对照组,观察3组间骨折临床愈合时间及骨痂生长情况的差异。结果:跌打接骨片组骨痂出现早,而且质量高,骨折临床愈合时间比空白对照组平均提前7.4天。结论:跌打接骨片具有明显促进骨折愈合的作用。

单侧弹性钉棒加Cage治疗腰椎间盘突出合并腰椎不稳症

目的探讨单侧弹性钉棒单侧椎间融合器治疗腰椎间盘突出合并腰椎不稳症的综合疗效。方法回顾性分析2008年5月-2011年10月于本院采用单侧弹性钉棒单侧椎间融合器进行治疗的29例腰椎间盘突出合并腰椎不稳症患者的临床资料,将其设为观察组,同期采用双侧钉棒双椎间融合器进行治疗的52例患者为对照组,然后将两组患者的治疗优良率、并发症发生率、治疗前后的VAS,ODI评分进行评估及比较。结果观察组的优良率高于对照组,并发症发生率低于对照组,而治疗后的VAS评分及ODI评分均显著优于对照组,P均<0.05,有显著性差异。结论单侧弹性钉棒单侧椎间融合器治疗腰椎间盘突出合并腰椎不稳症的综合疗效较好,且安全性也较高,故认为其综合价值较高。

MED椎间盘镜治疗腰椎间盘突出症

目的 探讨新型的椎间盘镜 -MED椎间盘镜手术系统的临床应用效果。方法 对 5 6例腰椎间盘突出症患者进行MED椎间盘镜摘除手术。结果 5 6例全部获得 1～ 11个月随访 ,术后疗效评定参考Macnab标准 :优 43例 ,良11例 ,可 2例。结论 MED椎间盘镜手术系统具有手术切口小、创伤小、神经根减压彻底、术后恢复快等特点 ,适用于除术后复发以外的所有类型的腰椎间盘突出症 ,近期疗效满意。

跌打接骨片促进实验性骨折愈合的骨组织形态计量学研究

为探讨跌打接骨片对实验性骨折愈合的影响 ,将 5 6只 8月龄新西兰大白兔随机分为模型组、跌打接骨片高剂量组、跌打接骨片低剂量组和伤科接骨片对照组 4组 ,每组 14只。每组实验动物又随机分为前期处死亚组和后期处死亚组 ,每亚组 7只。所有家兔均行双侧桡骨骨缺损手术。术后第 2d开始给药 ,连续用药至术后第 2 2d时处死每组中的前期处死亚组动物 ,测定桡骨骨折端的骨组织形态计量学指标 ;再连续用药至术后 42d时处死每组中的后期处死亚组动物 ,测定桡骨骨折端的骨组织形态计量学指标。

肿节风注射液关节腔内注射配合舒筋汤外洗治疗膝关节骨性关节炎68例疗效观察

目的:观察肿节风注射液关节腔内注射配合外洗舒筋汤治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法:对68例(86膝) 患者以肿节风注射液关节腔内注射,配合中药舒筋汤外洗治疗。疗程为2周。结果:治愈37膝,显效32膝,有效12膝,无效5 膝,愈显率为80．2％,总有效率为94．2％。治疗后止血带加压试验阳性率活动痛膝组为6．7％,休息痛膝组为21．4％,分别与治疗前(活动痛膝组阳性率86．7％、休息痛膝组阳性率92．9％)比较,差异均有显著性意义(P<0．05)。结论:肿节风注射液关节腔内注射配合舒筋汤外洗治疗膝关节骨性关节炎疗效好,可明显降低膝关节内高压,缓解疼痛。

浅谈小学体育教学与德育的有机融合

随着新一轮教育教学改革的不断深入,小学体育教育进入了一个崭新的发展阶段。体育课堂不仅是传递体育知识技能的过程,更是培养学生形成良好道德情操及意志品质的过程。小学时期是学生学习能力和模仿能力最强的时期,也是决定其一生成长轨迹的重要时期。在体育课堂上,教师不仅要对学生进行知识技能的教学,更要将德育教育渗透到课堂教学的各个环节中去,从小培养学生正确的思想观念和科学的思维方法。

突破“左右为难”的困境

本文通过对一则案例的分析,探讨法官在审判实务中碰到"左右为难"的困境时应当做什么以及如何做到的问题,期望能对相关案件的审理有所助益。

显微内窥镜椎间盘切除术结合中医辨证分期治疗腰椎间盘突出症86例疗效观察

目的:观察显微内窥镜椎间盘切除术(MED)结合中医辨证分期治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法:对86例患者采用MED-II型手术治疗,术后采用中医三期辨证施治。结果:86例患者均随访4-25月,平均10月,结果优72例,良11 例,可3例,优良率达96．5%。结论:MED结合中医辨证分期治疗腰椎间盘突出症具有创伤小、出血少、加快受压神经根及手术创伤恢复等优点。

中西医结合护理对腰椎间盘突出症术后患者疼痛的影响

目的 观察中西医结合护理干预对腰椎间盘突出症术后患者疼痛的影响。方法 已行后路开窗髓核摘除术的腰椎间盘突出症术后患者68例,采用随机数字表法分为观察组与对照组,每组34例。对照组进行常规康复护理,观察组在对照组基础上结合中医护理干预,观察比较两组患者治疗前后的疼痛及腰椎功能评分。结果 治疗前,观察组患者疼痛评分为(8.78±2.32)分、腰椎功能评分为(2.85±0.31)分,对照组患者疼痛评分为(8.81±2.27)分、腰椎功能评分为(2.79±0.65)分,比较差异(P>0.05)。治疗后,观察组患者疼痛评分为(3.38±2.07)分、腰椎功能评分为(5.74±1.38)分,对照组的疼痛评分为(5.68±3.12)分、腰椎功能评分为(3.32±3.14)分,两组疼痛评分和腰椎功能评分评分均优于治疗前,且观察组疼痛评分和腰椎功能评分均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 中西医结合护理对缓解腰椎间盘突出症术后患者疼痛和腰椎功能的恢复有较好疗效,具有临床推广价值。