皮肤常驻记忆T细胞参与白癜风皮损发生、发展研究

白癜风是一种因黑素细胞丢失造成的色素障碍性皮肤病,治疗较困难,目前相对有效的治疗方案包括窄谱中波紫外线、局部外用或口服糖皮质激素、外用免疫抑制剂,外科疗法等,但大多疗效不能令人满意,且存在复发率高等问题;随着人们对白癜风的发病机制研究的不断深入,白癜风已被证实为自身免疫性疾病,白癜风的发展与皮肤中常驻记忆T细胞和再循环记忆T细胞有关。本文就近年来有关皮肤常驻记忆T细胞参与白癜风皮损发生、发展的研究做出综述。

雪松醇抑制二氢睾酮诱导胎鼠真皮成纤维细胞雄激素受体活化

目的探究雪松醇对体外培养胎鼠真皮成纤维细胞二氢睾酮(DHT)诱导雄激素受体(AR)活化的抑制作用。方法分离第18.5天(E18.5)C57BL/6J胎鼠真皮,建立原代胎鼠真皮成纤维细胞培养;用倒置显微镜观察胎鼠成纤维细胞凝集生长;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒和荧光染色技术检测胎鼠成纤维细胞的ALP活性和CD133表达。将指数生长期胎鼠真皮成纤维细胞分为4组,即空白对照组、DHT组、雪松醇组和雪松醇+DHT联合处理组。不同浓度(0~300mol/L)雪松醇和DHT处理细胞48h后,用细胞计算试剂盒(CCK8)测定细胞存活率;用免疫荧光法、蛋白质印迹法(Westernblotting)和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组AR及其共激活因子四个半LIM结构域2(FHL2)的表达水平和AR核定位;用ALP染色法检测各组细胞ALP活性变化。结果30μmol/L DHT处理胎鼠真皮成纤维细胞,48 h后观察到AR主要分布在细胞核,胞核/胞质荧光强度比值为(3.39±0.04)/高倍镜视野(HPF)。然而,雪松醇+DHT联合处理组胎鼠真皮成纤维细胞AR着色分布在胞浆和胞核,胞核/胞浆荧光强度比值为(1.24±0.02)/HPF,二者比较差异有统计学意义(P<0.05),提示雪松醇可抑制DHT诱导的AR核转位;此外,笔者还观察到,DHT可以下调ALP表达并上调AR共激活因子FHL2的表达,而雪松醇可以逆转DHT对成纤维细胞的作用。结论雪松醇除阻止DHT诱导AR核转位以外,还能抑制共激活因子FHL2的表达,双靶点下调DHT-AR信号活性。外用雪松醇治疗雄激素源性脱发(AGA)值得进一步研究。

单乙酰氢醌对中波紫外线诱导小鼠尾部皮肤黑色素生成的影响及其机制研究

目的:探讨单乙酰氢醌(4-AC)对中波紫外线(UVB)诱导小鼠尾部皮肤黑色素生成的影响及其相关机制。方法:对比观察含不同浓度氢醌(HQ)、熊果苷(Arb)和4-AC的乳膏制剂暴露于环境空气中14 d后乳膏颜色的变化。使用Dct-LacZ转基因小鼠,UVB照射构建鼠尾皮肤色素沉着(以下简称色沉)模型后,将小鼠随机分为4组(每组5只):乳膏基质组(对照组)、2%HQ组、2%Arb组、2%4-AC组,每日涂药1次,共4周。采用Image J软件分析测定皮肤色沉斑的脱色效率、黑色素细胞(MC)数、多巴阳性MC数、表皮厚度以及黑色素颗粒数,以评估4-AC对鼠尾皮肤黑色素生成的影响。用含有HQ、Arb及4-AC的培养基处理体外培养的MNT-1人黑素瘤细胞48 h,测定酪氨酸酶(TYR)活性及黑色素含量的变化,并检测TYR基因与蛋白表达水平。结果:暴露于空气中14 d后,随着浓度升高,含HQ的乳膏制剂颜色逐渐变深至棕红色,而Arb组与4-AC组无明显变化。涂药4周后,与对照组相比,3种化合物处理组鼠尾色沉斑颜色均变淡,表皮多巴阳性MC数与黑色素颗粒数下降,但表皮MC数与对照组差异无统计学意义;与对照组相比,HQ组表皮增厚,Arb组及4-AC组表皮厚度与对照组比较差异无统计学意义。细胞实验结果表明4-AC可抑制TYR活性从而减少MNT-1细胞的黑色素生成,但对其TYR mRNA与蛋白的表达无影响。结论:4-AC具有较好的抗氧化变色能力和抗黑色素生成活性,能否成为HQ的替代化合物用于治疗黄褐斑等色素增加性皮肤病,有待临床进一步验证。

P物质通过激活NF-κB诱导人角质形成细胞产生抗菌肽

目的:明确P物质和FK-506对人角质形成细胞产生抗菌肽(CAMP)和NF-κB信号活化的影响。方法:P物质单独或联合FK-506处理培养HaCaT细胞24h,用实时荧光定量PCR检测CAMP mRNA表达,免疫蛋白印迹法检测CAMP蛋白表达,免疫荧光染色观察CAMP蛋白原位表达及NF-κB/p65核转位。结果:P物质刺激HaCaT细胞CAMP mRNA及蛋白表达增加,其中1μM处理24 h效果最明显,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);此外,P物质处理30 min可诱导HaCaT细胞NF-κB/p65发生核转位,此后随处理时间延长核转位减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FK-506抑制P物质诱导HaCaT细胞NF-κB/p65核转位并减低了P物质刺激的CAMP表达,P物质与FK-506联合处理组与P物质组比较,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:P物质通过激活NF-κB信号诱导角质形成细胞产生抗菌肽。针对抑制“P物质-NF-κB信号活化-抗菌肽”机制可能是治疗玫瑰痤疮的潜在新靶点。