猪细小病毒X株在不同细胞上增殖效果比较

为选择猪细小病毒X株增殖的细胞系,对猪细小病毒X株在ST、PK-15、CEF、Vero细胞系上增殖情况进行比较,观察病变时间和病变情况,并分别测定其TCID50和血凝价。结果表明,猪细小病毒X株在这4种细胞上都能产生细胞病变,在ST、PK-15、CEF、Vero细胞上最先开始出现病变的时间分别为24、36、72和48 h,测其在以上4种细胞上的TCID50分别为10-6.4/0.1 mL、10-5.8/0.1 mL、10-2.1/0.1 mL和10-3.2/0.1 mL,HA分别为1 210、1 28、1 23、1 25,因此,建议选用ST细胞作为猪细小病毒X株的增殖细胞系。

特布他林残留酶联免疫检测方法的建立

采用自主制备的特布他林特异性抗体建立特布他林残留的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性进行测定,并将该检测方法与高效液相色谱(HPLC)法进行对比分析。结果表明:特布他林残留检测体系的检测范围为1～100ng/mL,灵敏度为0.47ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率80%～99%,与盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇的交叉反应率分别为94.9%、93.9%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%。采用HPLC法进行沙丁胺醇残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为79.2%～94.8%。ELISA法与HPLC法相比,灵敏度较高、特异性强、检测结果准确度相近,但在检测结果稳定性方面逊于HPLC法。

猪伪狂犬病病毒SD-1株在几种不同细胞上的增殖效果比较

为了选择增殖猪伪狂犬病病毒SD-1株的最适细胞系,试验采用BHK-21、PK-15、CEF和Vero细胞作为该毒株的接种对象,并将该毒株在这几种细胞上的增殖情况进行了比较,观察病变时间和病变特点,分别测定其毒价(TCID50),并采用PRV阳性血清(抗体效价为1∶128)对接种组进行中和试验。结果表明:猪伪狂犬病病毒SD-1株在BHK-21、PK-15、CEF和Vero传代细胞上均能产生明显的细胞病变(CPE),开始出现病变的时间分别为接毒后12,15,20,24小时;其在4种细胞上的TCID50分别为1×10-7.3/0.1 mL、1×10-6.3/0.1 mL、1×10-6.7/0.1 mL、1×10-5.7/0.1 mL,且中和组均无任何细胞病变。因此,建议选用BHK-21细胞作为猪伪狂犬病病毒SD-1株的增殖细胞系。

沙丁胺醇残留的酶联免疫检测方法的建立

用自主制备的沙丁胺醇特异性抗体建立了针对沙丁胺醇残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并与高效液相色谱方法进行了对比性分析。结果显示:沙丁胺醇药物残留的间接竞争酶联免疫检测体系的检测范围为1～80ng/mL,灵敏度为0.58ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率为70～99%,与盐酸克仑特罗、硫酸特布他林交叉反应率分别为107%、10%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%;采用HPLC方法进行沙丁胺醇药物残留的检测时,其检测范围为10μg/mL～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为80～95%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊与HPLC方法。

鸡γ-干扰素联合新城疫活疫苗对肉鸡免疫效果的研究

选用350只1日龄罗氏308商品肉鸡,比较不同剂量的鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)在新城疫活疫苗免疫前、后使用以及与疫苗同时使用对淋巴细胞刺激指数、巨噬细胞吞噬指数以及鸡新城疫HI抗体滴度的影响。结果显示:各试验组淋巴细胞刺激指数(SI)均高于空白对照组,表现差异显著(p<0.05);与疫苗对照组相比,疫苗免疫后给药组SI优于免疫前给药组和同时给药组,其中两次免疫后给药组好于一次免疫后给药组,500IU/羽的使用剂量优于100IU/羽;ChIFN-γ在免疫的不同时期使用均能有效提高巨噬细胞吞噬指数;两次免疫后给药组较疫苗对照组能明显提高28日龄以后新城疫抗体滴度,表现差异显著(P<0.05);一次免疫后给药组和免疫前给药各组的新城疫抗体滴度及变化趋势与疫苗对照组接近;但同时给药组各日龄段的新城疫抗体滴度都明显低于疫苗对照组。本试验结果显示ChIFN-γ联合新城疫活疫苗使用有助于提高疫苗免疫效果,其使用最佳时机为新城疫活疫苗免疫后使用,使用剂量为500IU/羽。

3拷贝鸡胸腺素α1基因在大肠杆菌中的融合表达及活性分析

为表达鸡胸腺素α1(Thymosin alpha l,Tα1),并对其进行纯化及生物学活性分析,本研究根据大肠杆菌基因密码子偏嗜性对Tα1基因进行优化,人工合成了Tα1三拷贝融合基因。并将其克隆至原核表达载体pET-30a中,转化至BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达和镍柱纯化,获得融合蛋白。融合蛋白经羟胺切割后获得Tαl单体。将单体Tα1按高、中、低3个剂量肌肉注射160只7日龄非免疫商品肉鸡,于不同日龄比较Tα1单体对鸡体内淋巴细胞刺激指数(SI)的影响。结果显示,鸡Tα1三串体为约19 ku大小的融合蛋白,单体约为3.0 ku,与天然Tα1相符。活性分析结果显示,0.03 mg/kg、0.06 mg/kg和0.12 mg/kg 3个剂量的Tα1均能提高鸡体内SI,其中21日龄、28日龄、35日龄各试验组与对照组相比均表现差异显著(p<0.05),以高剂量组最为明显,各试验组间差异不显著。研究表明,通过表达串联体基因方式制备有活性的Tα1是可行的,为Tα1进一步在兽医临床应用提供依据。

鸭病毒性肝炎病毒的分离鉴定及其病原特性研究

[目的]调查鸭病毒性肝炎的病原,并分析近年来该病不断发生和难以控制的原因。[方法]从山东临沂、潍坊、滨州等地区鸭场有鸭肝炎典型症状的雏鸭的肝、脾中分离病毒,通过鸡胚和鸭胚接种、RT-PCR检测、血清学试验、攻毒试验等研究其病原特性。[结果]分离到4株鸭病毒性肝炎病毒(DHV),第5代鸭胚分离毒的ELD50为103.41～105.20,与传统的Ⅰ型DHV的血清交叉保护率为20%～80%。分离株对4日龄雏鸭的致死率为50%～100%。攻毒后雏鸭均出现典型的鸭肝炎症状,24～48 h出现死亡高峰。[结论]DHV分离株的毒力存在地区差异。

重组鸡γ干扰素的高密度发酵生产及对肉鸡巨嗜细胞活性影响

研究了培养条件和诱导条件等对工程菌CH1的最终菌体量和表达量的影响,确立最优的高密度发酵条件,还探讨了不同补料流加方式对菌体生长的影响。结果表明,DO-stat流加方式具有显著增加菌体量的作用,发酵液最终菌体密度D600达25.31,湿菌体53.4 g/L,蛋白表达量也达到32.3%,实现了ChIFN-γ的高密度发酵和高表达。初步纯化的鸡γ干扰素以500 U/只的剂量对双A肉鸡口服给药,可以提高机体的巨嗜细胞吞噬活性(P<0.05)。本试验为鸡γ干扰素的工业化生产和临床应用提供了依据。