应用E1区缺陷载体构建携带SEA基因的选择性腺病毒

目的:构建由端粒酶启动子(hTERT)调控的携带超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcus aureusenterotoxin A,SEA)基因的选择性复制重组腺病毒。方法:应用酶切、连接方法将hTERT连接于腺病毒穿梭质粒E1A和E1B序列之前调控E1A和E1B蛋白的表达,CMV启动子和SV40分别调控目的基因SEA的表达和终止,利用脂质体将腺病毒骨架质粒和穿梭质粒共同转染人胚肾293细胞(HEK-293)进行同源重组,获取选择性复制腺病毒CMV-SV40-hTERT(CSS-H),氯化铯梯度离心纯化重组腺病毒,并测定病毒滴度。结果:应用PCR验证、双酶切分析、序列测定等方法验证重组质粒基因片段连接正确无突变,通过同源重组获得携带超抗原SEA基因片段的CSS-H重组腺病毒,测定滴度为2.9×1010pfu/ml。结论:携带SEA基因选择性复制重组腺病毒CSS-H成功构建。