双色上转换纳米荧光探针在套细胞淋巴瘤细胞靶向成像中的应用

目的构建上转换纳米靶向探针,并探究其在特异性标记套细胞淋巴瘤细胞株中的应用价值,为体内套细胞淋巴瘤的靶向诊断提供理论依据和指导。方法采用H_2O_2对Na YF_4:Er^(3+)和Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)上转换纳米粒子表面进行氧化处理,使该粒子由最初的疏水性转变为亲水性;在NHS、EDC的作用下,亲水性的Na YF_4:Er^(3+)上转换纳米粒子与CD20单克隆抗体共价结合,Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)上转换纳米粒子与CD5单克隆抗体共价结合;CD20抗体-Na YF_4:Er^(3+)纳米粒子轭合物和CD5抗体-Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)纳米粒子轭合物的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h;CD20抗体-Na YF_4:Er^(3+)纳米粒子轭合物和Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)纳米粒子的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h;Na YF_4:Er^(3+)纳米粒子和CD5抗体-Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)纳米粒子轭合物的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h;未偶联有任何抗体的Na YF_4:Er^(3+)和Na YF_4:Yb^(3+),Tm^(3+)上转换纳米粒子的混合液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h;使用配备有980 nm近红外激光的尼康Eclipse Ti-S倒置荧光显微镜对各组细胞进行上转换成像,观察细胞表面上转换荧光的强度。结果实验组细胞表面释放出蓝、绿双色的上转换纳米荧光,但通过观察3组对照实验,细胞表面却仅分别释放出单一的绿色荧光、蓝色荧光以及未见任何荧光。结论上转换纳米粒子与CD20或CD5抗体成功共价偶联,可以对套细胞淋巴瘤细胞株进行特异性标记、成像。

小干扰RNA沉默PHF19基因表达后对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的探讨小干扰RNA沉默宫颈癌细胞中PHF19基因表达后对宫颈癌细胞的增殖、凋亡以及对NF-κB信号通路的影响。方法培养人宫颈癌He La细胞,根据转染的si RNA-PHF19及其浓度和时间进行分组。MTT比色法筛选出最佳的si RNA-PHF19及其作用浓度与时间,q RT PCR和Western Blot检测加入转染试剂si RNA-PHF19后PHF19基因及蛋白的表达量,Ed U检测加入转染试剂si RNA-PHF19后He La细胞的增殖情况,TUNEL法检测加入转染试剂si RNA-PHF19后He La细胞的凋亡情况,q RT PCR检测加入转染试剂si RNA-PHF19后Bax、Bcl-2、Caspase-3、TNF、NFKBIA、p53基因的表达量。结果通过q RT PCR分析显示,对比正常组He La细胞中的PHF19的表达量,在24 h时,加入si RNA-PHF19-1-50μM、si RNAPHF19-3-10μM干扰试剂对PHF19基因的抑制极其显著(P<0.0001),加入si RNA-PHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM干扰试剂对PHF19基因的抑制最显著(P<0.0001)。通过Western blot检测24h的正常He La细胞以及加入转染试剂si RNAPHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM和Non-specific control(NC)组的He La细胞中PHF19蛋白的表达发现,对比正常组He La细胞中PHF19的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM和NC组干扰试剂的He La细胞中PHF19降低有显著的统计学差异(P<0.01)。Ed U检测细胞增殖,与He La组相比,加入转染试剂si RNA-PHF19-2-50μM、si RNA-PHF19-3-50μM和NC后Ed U阳性率极低,表现出抑制细胞增殖的作用。TUNEL法检测细胞凋亡,与He La组细胞相比,si RNA-PHF19-2-50μM处理的He La细胞TUNEL阳性细胞显著增多。通过q RT PCR分析显示,对比正常组He La细胞中Bax、Bcl-2和Caspase-3基因的表达量无统计学意义,对比正常组He La细胞中TNF的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM干扰试剂组He La细胞中TNF基因表达量上调极其显著(P<0.001),加入si RNA-PHF19-3-50μM和NC干扰试剂组He La细胞中TNF基因表达量下降有统计学意义(P<0.05)。对比正常组He La细胞中NFKBIA的表达,加入si RNA-PHF19-2-50μM、NC组干扰试剂的NFKBIA基因表达上调最显著(P<0.0001)。结论 PHF19基因在He La细胞中高表达,si RNA-PHF19干扰He La细胞后,会对He La细胞的增殖与凋亡产生影响,其主要作用是使He La细胞发生凋亡,He La细胞凋亡的产生主要是由死亡受体途径介导的,在死亡受体途径中,TNF激活下游的NF-κB通路,使NFKBIA过表达,NFKBIA可能在He La细胞中介导p53基因失活。