提高病理学教学质量的实践

为了提高学生病理学教学质量,加强病理解剖学教学实验室建设,购买先进仪器和设备,组成国内一流实验教师队伍,制备大量标本、切片、照片及多媒体课件,病理案例收集,编写大量临床病理案例,国内外进修及国内外专家交流,增加学生感性认识,让学生理论联系实际,提高学习病理学的兴趣,能提供学生分析问题和解决问题的实践工作能力场所。让学生掌握病理学理论和实践知识。病理学实验教学是提高病理学教学质量的重要因素。

番茄红素对慢性铁负荷大鼠肝细胞自噬的保护作用

目的 :探讨番茄红素对慢性铁负荷大鼠肝细胞自噬的影响。方法:通过饲喂高铁饲料和灌胃番茄红素的方法构建SD慢性铁负荷模型,采用铁染色和透射电镜方法观察肝组织细胞的形态结构及其超微结构的变化,采用免疫组化方法观察肝组织切片中LC3-B蛋白的表达。结果:慢性铁负荷组与对照组及番茄红素组动物比较,肝细胞中有大量铁蛋白颗粒累积,线粒体和内质网膜膨胀,胞质中形成自噬前体,LC3-B微管相关蛋白有较强表达。结论:番茄红素能降低肝细胞中铁诱导线粒体膜的改变和细胞的自噬,具有一定的保护作用。

P53,Fas,Bcl-2蛋白在尖锐湿疣组织中的检出及其与HPV感染的相关性

目的 探讨P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白在尖锐湿疣 (CA)组织中的检出情况及其与人乳头瘤病毒 (HPV)感染的关系。方法 采用标准免疫组化法检测了 2 4例CA、46例宫颈癌和 2 8例正常宫颈组织P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白 ,用PCR技术对各组织标本的HPV DNA进行检测和 6,11,16,18分型。结果 P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白在CA组的阳性率显著高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ;CA组和宫颈癌组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。综合分析 ,蛋白阳性率与HPV感染率密切相关 (P <0 .0 5 ) ,但CA组或宫颈癌组的蛋白阳性率与HPV 6/11型或 16/18型的检出与否无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白与尖锐湿疣的发病有密切关系 。

α7nAChR的激活通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口愈合

目的:观察糖尿病小鼠伤口愈合期间巨噬细胞浸润及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达特征,探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)特异性激动剂PNU-282987是否可通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口的愈合。方法:(1)制作糖尿病小鼠切创模型(糖尿病组),正常小鼠在相同部位制作相同大小创口作为对照(对照组),分别于切创后1 d、3 d、5 d、10 d、14 d和21 d(每个时间段5只)提取创口样本。免疫组化观察创口中巨噬细胞和成纤维细胞数量,Western blotting检测TNF-α表达水平,Masson染色观察胶原沉积情况。(2)在糖尿病小鼠切创后,选择合适的干预时间窗进行PNU-282987干预,然后观察上述指标变化。结果:(1)与对照组相比,糖尿病组创口愈合明显延迟,在切创初期的伤口中巨噬细胞数量和TNF-α表达水平较低(P<0.05),而切创5 d后的伤口巨噬细胞数量和TNF-α表达水平显著增加(P<0.05),成纤维细胞数量和胶原含量减少(P<0.05)。(2)在切创5 d后对糖尿病小鼠腹腔注射PNU-282987,可显著减少伤口中TNF-α表达,提高成纤维细胞数量和胶原含量,促进伤口愈合。结论:糖尿病伤口愈合具有炎症反应发生迟但不易消退的特征。在炎症反应明显期激活α7nAChR可抑制TNF-α表达,促进糖尿病小鼠的伤口愈合。

全髋关节置换扩大后路软组织修补关节囊切开线的解剖学研究

目的研究髋后方关节囊的解剖特点及胶原纤维的分布差异,探讨能保留最佳力学强度的髋后方关节囊切开线。方法采用10个(20侧)福尔马林固定的成人尸体髋标本,男6个,女4个;年龄28～64岁。右侧10髋解剖出髋后方关节囊,将其划分为3区(Ⅰ～Ⅲ区)9部(ⅠA～C、ⅡD～F、ⅢG～I),测量髋后方关节囊各部厚度,观察坐股韧带走行。左侧10髋选取5髋对其较厚的Ⅰ区和Ⅱ区进行Masson染色观察和胶原纤维含量分析。采用自愿捐赠的冰冻新鲜尸体标本2髋与固定标本比较,设计最佳的切口线并临床应用。结果各部髋后方关节囊厚度分别为:ⅠA(2.30±0.40)、ⅠB(4.68±0.81)、ⅠC(2.83±0.69)、ⅡD(2.80±0.79)、ⅡE(4.22±1.33)、ⅡF(2.50±0.54)、ⅢG(1.57±0.40)、ⅢH(2.60±0.63)、ⅢI(1.31±0.28)mm,具有不均一性,差异有统计学意义(P<0.01),ⅢG部和ⅢI部的平均厚度较ⅠB部和ⅡE部薄,差异有统计学意义(P<0.01)。较薄弱的两部在Ⅲ区,坐股韧带主干经过较厚的ⅠB部和ⅡE部。Masson染色可见ⅠB和ⅡE部的绿色面积明显较Ⅰ、Ⅱ区其余4部大。各部胶原纤维含量分别为:ⅠA20.34%±5.14%,ⅠB48.79%±12.67%,ⅠC19.87%±5.21%,ⅡD17.57%±3.56%,ⅡE46.76%±11.47%,ⅡF28.65%±15.79%;各部胶原含量亦具有不均一性(P<0.01),ⅠB部和ⅡE部与其余4部比较差异有统计学意义(P<0.01)。新鲜冰冻标本的厚度和坐股韧带分布特点经观察与固定标本无明显差别。在标本上设计并应用包括大部坐股韧带主干且连带部分臀小肌束的髋后方关节囊切开线。结论全髋关节置换扩大后路软组织修补虽不断深入研究和发展,但术后脱位率仍未完全消除;优化关节囊切开线,保留最佳力学强度部分,使坐股韧带发挥其固有生物力学功能,具有较大意义。

地塞米松对庆大霉素和丁胺卡那霉素所致豚鼠耳毒性的保护作用

目的 :观察地塞米松能否拮抗庆大霉素和丁胺卡那霉素所致的耳毒性。方法 :取听力正常的豚鼠 5 0只 ,雌雄各半 ,随机分为 5组 :庆大霉素组 ;丁胺卡那霉素组 ;庆大霉素 +地塞米松组 ;丁胺卡那霉素 +地塞米松组和生理盐水对照组。用药 2wk后饲养 1wk ,检查中耳粘膜反应、眼震抑制率及耳蜗的形态学变化。结果 :庆大霉素 +地塞米松组与庆大霉素组比较 ;丁胺卡那霉素 +地塞米松组与丁胺卡那霉素组相比有显著性差异。结论

大蒜素对慢性铁中毒大鼠氧化应激与肝细胞自噬的抑制作用

目的探讨大蒜素(allicin)对慢性铁中毒大鼠氧化应激与肝细胞自噬的抑制作用及可能机制。方法 36只SD大鼠按体质量随机分为6组,即正常对照(饲喂基础饲料)、慢性铁中毒模型(饲喂高铁饲料)、正常+大蒜素40 mg·kg-1、慢性铁中毒+大蒜素30,40和60 mg·kg-1组,每组6只。持续饲喂6周后,取血及肝、结肠和肾组织用试剂盒测定铁含量、总铁结合力、丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。透射电镜和免疫组织化学方法观察肝细胞形态结构、自噬以及胱天蛋白酶3凋亡蛋白、Ki-67细胞增殖抗原和LC3-B微管相关蛋白表达的变化。结果与正常对照组比较,模型组血清铁含量增加(P<0.01),总铁结合力下降(P<0.01),肝和结肠组织铁含量增加(P<0.05)。与模型组比较,饲喂不同剂量大蒜素大鼠血清铁含量显著下降(P<0.05),总铁结合力显著增加(P<0.05),结肠组织铁含量显著下降(P<0.05);饲喂大蒜素40和60 mg·kg-1肝组织铁含量显著下降(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组肝和结肠组织MDA含量显著增加(P<0.05),肝组织T-SOD活性增加(P<0.01),结肠组织T-SOD活性下降(P<0.01)。与模型组比较,饲喂大蒜素组肝组织MDA含量显著下降(P<0.05),结肠和肾组织T-SOD活性显著增加(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组肝实质细胞和肝非实质细胞Ki-67增殖抗原表达显著增加(P<0.05),胱天蛋白酶3凋亡蛋白表达无明显变化(P>0.05)。观察肝细胞超微结构,模型组大鼠肝细胞有大量铁蛋白颗粒累积,线粒体和内质网膜膨胀,胞质中形成自噬前体。模型组大鼠肝细胞LC3-B微管相关蛋白有较强表达,正常对照和正常+大蒜素组肝细胞未发现LC3-B免疫阳性染色。结论大蒜素能有效清除体内自由基,增强机体抗氧化能力,降低肝中铁诱导的氧化压力、线粒体膜的改变和细胞自噬,对慢性铁中毒肝细胞具有一定的保护作用。

补锌对酒精性肝病的影响及其分子机制

目的:本研究是为了观察饮食补充锌减轻酒精性肝病损伤的作用及与HNF-4α的关系。方法:选用成年C57BL/6小鼠40只,按随机数字表分为4组(n=10):正常对照组、酒精中毒组、正常补锌组及酒精补锌组,用不同饮食喂养6个月处死,在正常补锌组和酒精补锌组小鼠饮用水中加入硫酸锌,使锌的含量达到75 mg/L。取各组小鼠肝组织进行病理切片及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,RT-PCR检测肝细胞核因子-4α(HNF-4α)含量,Western blot检测肝组织HNF-4α蛋白表达,检测"肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量"。结果:酒精中毒组小鼠HNF-4α转录及表达均明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),该组小鼠MDA含量增高,SOD活性下降与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);而酒精补锌组小鼠PCNA阳性肝细胞数目及HNF-4α蛋白表达水平明显高于酒精中毒组,差异有统计学意义(P<0.05),该组小鼠SOD活性增加,MDA下降,与酒精中毒组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:长期酒精喂养导致小鼠氧化还原失衡,而补锌可逆转该状态。我们推测饮食补锌可能是通过增加HNF-4α的转录及表达而增强酒精喂养小鼠的肝再生,因此,饮食补锌可能对酒精性肝病有较好的影响。

失血性休克复苏大鼠肺组织中NO、NOS变化及丹参影响

目的观察失血性休克复苏大鼠肺组织中的NO、NOS的变化以及复方丹参注射液的影响,探讨失血性休克复苏大鼠肺损伤的机制及丹参的治疗机制。方法健康SD大鼠30只,随机均分成正常对照组(NC组)、失血性休克复苏组(HS组)和丹参治疗组(SM组)。实验结束时,取全肺测定肺系数,取血和肺组织测定一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性,并对肺组织作光镜病理学检查。结果与HS组相比较,SM组血清和肺组织中的NO含量、NOS活性均显著升高;肺系数降低;肺组织病变明显减轻。结论大鼠失血性休克复苏后,NO的大量释放参与肺损伤过程,丹参对这种肺损伤有良好的保护作用。

庆大霉素对不同年龄组豚鼠的药动学与耳毒性研究

目的 :观察庆大霉素治疗剂量对幼年和成年豚鼠耳毒性的程度有无差异。方法 :幼年组、成年组豚鼠各 35只 ,对照组各 7只。按照与人类等效剂量肌肉注射庆大霉素 ,用高效液相法分析两组药动学特点 ;用光镜和电镜观察两组耳蜗损伤情况。结果 :单剂给药 2组均为二室开放模型 ,峰浓度和达峰时间差异无显著性 ;多次给药幼年组血药浓度明显高于同点成年组 ,存在明显体内药物蓄积 ;耳蜗损伤情况 ,幼年组较成年组重 ,且停药后毛细胞缺失数持续增加。结论 :等效人类治疗剂量的庆大霉素对幼年组豚鼠造成的耳毒性损害较成年组严重 ,且随用药时间延长而加重。幼年豚鼠的这种高敏性可能与药物从体内排出慢、易蓄积有关。

乳腺癌变过程中的P53基因点突变

目的 :探讨乳腺癌变、发展与P5 3基因点突变的关系。方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性(PCR SSCP)方法对 87例癌前状态、癌症初期、癌症后期及正常乳腺组织的P5 3基因 5～ 8外显子点突变进行检测。结果 :3例癌前状态、8例癌症初期和 14例癌症后期者发生点突变 (突变率分别为 15 .8%、34 .8%和6 3.6 % ) ,三者 (亦即乳腺癌变、发展过程 )P5 3基因突变率 (统计学结果 )呈明显渐进性。结论 :P5 3基因突变是乳腺癌的早期、多发事件 ,是引起乳腺癌变、发展的因素和标志之一。

法医毒理学开放性实验教学

目的探索开放式实验教学在法医毒理学实验中的应用效果。方法设甲胺磷中毒为开放式实验内容,家兔为实验动物,由学生自行设计实验内容、自己动手操作、分析讨论、提交综合性实验报告,最后由指导教师进行讲评。结果通过对甲胺磷中毒的实验设计、组织切片的制作,以及镜下观察,初步掌握了实验原理、方法、步骤等相关理论知识。结论该学习方式对学生的未来发展有重要帮助,是培养本科生动手能力、分析解决问题能力,提高综合素质的有效途径。

P53、Fas、Bcl-2基因在尖锐湿疣和宫颈癌组织中的表达

目的 :探讨P5 3、Fas、Bcl 2基因蛋白表达与尖锐湿疣和宫颈癌发病的关系。方法 :采用标准免疫组化技术 ,分别检测 2 4例尖锐湿疣、4 6例宫颈癌、2 2例宫颈糜烂和 2 8例正常宫颈组织P5 3、Fas和Bcl 2基因产物。结果 :三种基因蛋白在尖锐湿疣组和宫颈癌组的表达程度和表达率均显著高于宫颈糜烂组和正常对照组 (P <0 .0 0 1)。尖锐湿疣组和宫颈癌组之间在P5 3的表达程度上差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :P5 3、Fas、Bcl 2基因表达与尖锐湿疣和宫颈癌的发病均有密切关系。

大鼠电击死后心肌骨骼肌脑的病理学观察

目的探讨电击死后心肌骨骼肌脑的损伤病理机制．方法将电线连接大白鼠左前肢和右后肢，右前肢和左后肢，左耳和右后肢，右耳和左后肢，用２２０Ｖ，５ＭＡ交流电定时电击，制造电击死时心肌（左心室）、骨骼肌（四肢）、脑的损伤的动物模型．结果光镜下心肌纤维广泛断裂，间质出血，小血管周围水肿，心肌灶性坏死；骨骼肌肌纤维呈碎裂及断裂，部分肌纤维发生凝固性坏死；脑神经细胞变性，尼氏小体消失，染色质溶解．电镜下心肌线粒体嵴排列紊乱，个别嵴溶解，轻度水肿，有透明血栓形成，内皮细胞不清楚，基底膜疏松，肌纤维中部分线粒体肿胀，嵴消失，其排列紊乱，集合成束；骨骼肌肌纤维中间可见两条带状坏死，部分肌丝有溶解现象，上图局部放大，可见肌丝排列紊乱、断裂、均质化，肌浆网扩张；脑组织神经胶质细胞核肿胀，胞浆结构模糊，核蛋白体部分消失，部分不正常聚集成堆，基底膜水肿，Ｗｉｌ’ｓ间隙扩张，未见足突，神经胶质细胞胞浆见大量空泡．结论本实验光镜和电镜的研究对电击死法医学鉴定提供病理学基础．

家兔烧死后气管、肺及心肌的病理形态学观察

目的探讨烧死的病理形态学依据。方法建立家兔烧死动物模型,用光镜、透射及扫描电镜观察10只生前烧死家兔气管、肺及心肌的病变;并与死后焚尸及非烧死的正常组(各5只)对照。结果透射电镜下,气管粘膜上皮完全脱落,成堆红细胞和纤维蛋白成分粘附在平滑肌表面。肺Ⅰ型上皮细胞结构基本完整连续,线粒体嵴有断裂、缺失;Ⅱ型肺泡上皮细胞微绒毛消失,多数细胞线粒体、板层小体、高尔基体未见异常,少数Ⅱ型肺泡上皮细胞质膜破损、染色质浓集、胞质内容丢失。心肌严重变性坏死,细胞膜破坏,线粒体极度肿胀,肌丝溶解并出现收缩带坏死。扫描电镜下,气管粘膜上皮有完整纤毛,但上皮大片脱落,少数区域纤毛上皮稀疏排列,有脱落柱状上皮附着在纤毛上;肺间皮细胞结构基本完整,微绒毛数量不一致;心内膜的内皮细胞大部脱落,暴露内皮下结缔组织,心肌纤维呈扭曲排列。死后焚尸及正常组对照组未见上述变化。结论烧死兔的光镜和电镜下气管、肺及心肌的病理形态学变化,能为生前烧死与死后焚尸的鉴别提供依据。

NF-κBp50、p53、Bcl-2在子宫颈癌组织中的表达及其与人乳头瘤病毒感染的关系

目的探讨子宫颈癌组织中NF-κBp50、p53、B cl-2的表达及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对46例子宫颈癌、26例正常子宫颈组织进行NF-κBp50、p53、B cl-2蛋白检测;用PCR技术对各组织标本的HPV-DNA进行了检测。结果NFκ-Bp50、p53、B cl-2蛋白在子宫颈癌组织中的表达率显著高于正常对照组(P<0.01)。NF-κBp50与p53或B cl-2之间的表达具有相关性(P<0.05),p53与B cl-2之间无相关意义(P>0.05)。在HPV-DNA阳性子宫颈癌组织中NF-κBp50的阳性率显著高于阴性组(P<0.05)。p53、B cl-2的阳性率在HPV-DNA阳性和阴性组之间差异无显著性(P>0.05)。结论NFκ-Bp50、p53、B cl-2的表达与子宫颈癌的发病有密切关系,HPV感染与NF-κBp50活化有关。

特殊染色在法医病理学中的应用

在法医病理学工作中，常规HE染色组织切片应用得非常广泛．然而很多问题仅以单纯HE染色是难以解决的，虽然可借免疫组织化学、电镜以及细胞分子生物学技术来解决，但由于其需要一定的实验条件及昂贵的试剂，不利于推广。而特殊染色无需复杂的试验条件及昂贵的试剂，操作简单，又能解决很多HE染色不能解决的难题。现介绍几种常见特殊染色方法在法医病理学上的应用？

肺肥大细胞的形态变化观察

肺组织中的肥大细胞(Mast cell，MC)，其胞浆内充满含多种生物活性物质的特征性颗粒，直接或间接参与病理生理过程。国内外学者对人体皮肤损伤时MC的研究已有报道，但肺性死亡时人体肺MC的形态变化研究未见报道。

坐股韧带的解剖与全髋置换术

目的研究坐股韧带的形态学特征,探讨全髋置换后路软组织的修补策略。方法采用10例福尔马林固定的成人尸体右髋标本,逐层解剖,将髋后关节囊分为3个扇区(Ⅰ～Ⅲ),寻找和观察坐股韧带。结果髋后方关节囊Ⅰ、Ⅱ区较厚,Ⅲ区较薄。坐股韧带走行于Ⅰ、Ⅱ区,在囊内面透照下呈增厚的弱透光带。结论坐股韧带是髋后方关节囊上的优势纤维。在后路全髋置换软组织修补中,应保护坐股韧带以发挥其固有的生物力学功能,这样以坐股韧带为主架的髋后方囊瓣才能发挥最大的抵挡作用。