人参皂苷Rg3调控ERK通路抑制Lewis小鼠肺癌生长的研究

目的:通过人参皂苷Rg3对Lewis肺癌小鼠模型及其细胞模型的抑制研究,探讨ERK信号通路及相关基因在抗肿瘤中的作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠荷瘤动物模型,通过口饲法给予定量人参皂苷,连续3周,处死动物后,比较各组荷瘤小鼠肿瘤体积。含药动物血清作用于Lewis肺癌细胞,MTT法检测各组细胞抑制效率。Realtime-PCR法检测荷瘤鼠Dusp6、Bax、Bcl-2基因表达变化,Western blot法检测荷瘤鼠ERK、p-ERK蛋白表达变化。结果:人参皂苷Rg3对Lewis肺癌细胞及荷瘤小鼠的肿瘤生长均有明显抑制作用(P<0.01)。Western blot显示ERK在Rg3处理组中的表达明显比对照组低,Realtime-PCR结果显示,在动物肿瘤标本中,Dusp6、Bax基因药物处理组比对照组高表达(P<0.01),Bcl-2基因药物处理组比对照组低表达(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3在Lewis肺癌体内外模型中具有一定的肿瘤抑制效果,ERK信号通路及Dusp6基因与Rg3的抑制作用有关,Rg3诱导的细胞凋亡也参与了抗肿瘤的作用。

基于慢病毒载体系统构建重组JSRV-NM假病毒

目的采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代VSV-G病毒的包膜质粒pMD.G,转染293T细胞,复制、包装并产出重组的JSRV-NM假病毒。用real-time PCR检测WPRE表达来测定假病毒的滴度,用接种24孔板的293T细胞检测假病毒感染力。结果成功重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV-NM假病毒,可超速离心浓缩成高滴度(1×108TU/mL)的病毒,Lv-JSRV-NM包膜与Lv-VSV-G包膜按感染复数(MOI)=3的比例感染Hela细胞具有相同的感染能力。结论基于慢病毒质粒构建的JSRV-NM假病毒,能够在293T细胞中复制和扩增,产出的假病毒具有稳定性、感染力和安全性,符合二级生物实验室安全的要求。

慢病毒载体介导的RNAi双敲除ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞模型

目的:构建以Caco-2细胞为研究对象,由慢病毒载体介导ABCG2和UGT1A1基因RNAi干扰的肠道药物吸收和代谢模型。方法:应用慢病毒载体介导的RNAi技术敲除Caco-2细胞的ABCG2和UGT1A1基因,构建双RNAi干扰ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞系。应用RT-PCR,Real-time PCR,Western blotting等方法检测ABCG2和UGT1A1在mRNA及蛋白水平的表达。然后选择干扰高表达细胞株,连续传代监测干扰相应干扰基因的表达变化。结果:成功构建了慢病毒载体介导的RNAi双干扰Caco-2细胞模型,慢病毒ABCG2和UGT1A1单基因干扰效率分别为75%和88%;分组先RNAi ABCG2后RNAiUGT1A1的双基因RNAi干扰效率分别为72.3%和85.7%;分组先RNAi UGT1A1后RNAi ABCG2的双基因干扰效率分别为69.7%和88.7%;ABCG2与UGT1A1基因的RNAi干扰先后顺序与最终双干扰效果无显著性差异(P>0.05)。Western blotting方法验证ABCG2与UGT1A1的蛋白水平表达也分别相应地明显减少。结论:第一次应用慢病毒载体在Caco-2细胞上同时干扰ABCG2和UGT1A1基因表达。为研究肠道中ABCG2和UGT1A1对口服药物或外源化合物吸收和代谢的联合作用提供可靠细胞模型。

三种新型冠状病毒抗体检测系统一致性评价

目的评价三种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性IgG、IgM抗体化学发光检测系统的一致性。方法收集46份血清标本,其中SARS-CoV-2阳性23例、阴性23例。使用A、B、C三种系统及配套试剂对46份血清标本进行SARS-CoV-2抗体检测。参考CLSI EP15-A3及EP9-A3方案进行精密度评价和方法学比对,对定量结果采用passing-bablok进行比对分析;采用χ^(2)检验将定性结果之间进行差异性分析,并分别与核酸最终检测结果进行差异性分析。结果A、B、C三种系统IgG抗体检测精密度分别为4.59%~5.08%、4.40%~4.91%、4.25%~8.09%,IgM抗体检测精密度分别为4.92%~5.39%、3.97%~4.19%、4.18%~8.44%。三种检测系统IgG抗体定量结果间回归方程的相关系数为0.835~0.871,截距为0.017~0.025,斜率为0.034~0.173,IgM抗体定量检测结果间回归方程的相关系数为0.671~0.885,截距为-0.090~0.025,斜率为0.098~0.437;IgG抗体定性结果与最终临床诊断结果符合率为91.4%~95.6%,IgM抗体定性结果与最终临床诊断结果符合率为65.2%~86.9%。结论三种系统IgG抗体检测结果一致性较好,IgM抗体的检测结果之间存在差异;血清抗体检测可作为SARS-CoV-2感染诊断和流行病学调查的有效指标。

幽门螺杆菌的感染诊断及环介导等温扩增技术在该领域的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与很多胃肠道疾病甚至是胃肠外疾病密切相关。目前幽门螺杆菌的常规检测技术包括快速尿素酶试验、病理组织学检查、血清抗体检测、粪便抗原检测、尿素呼气试验等,随着在临床应用中发现这些技术均存在不同程度的缺陷,因此需要探索新技术来弥补。恒温核酸扩增技术中的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术近年发展迅速,具有快速、特异、敏感、简便等特点,使该技术在核酸检测领域得到了广泛的应用。文章就Hp感染诊断及LAMP技术在诊断、毒力分型领域内的研究进展进行综述,期望为后续研究者们提供更多信息。

IgG4升高的疾病分布及其诊断效能与致病相关因素的分析

目的调查免疫球蛋白G4(immunoglobulin,IgG4)升高患者的疾病分布及血清IgG4水平,筛选适用于本地区人群的临界值(cut off,Cut-off);分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)、结核(Tuberculosis,TB)感染与血清IgG4水平升高的相关性。方法选取天津医科大学总医院2018年1月至2020年12月进行血清IgG4检测的标本,C^(13)呼气试验检测Hp,结核斑点实验(Tuberculosis spot,T-spot)实验检测TB。血清IgG4水平采用独立样本t检验,双侧检验P<0.05认为有统计学意义。结果在2139份血清IgG4升高的标本中有33.29%(712/2139)来自IgG4相关性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)患者,18.51%(396/2139)来自自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)患者,其余48.20%(1031/2139)为其它疾病,各组间血清IgG4水平没有统计学差异(P>0.05)。IgG4-RD组单器官累及最多的是胆囊,AID中最常见的是自身免疫性胰腺炎,其它疾病中最常见的是消化系统疾病。采用国际标准IgG4>1.35 g/L诊断时的灵敏度和特异度分别是81.00%和82.48%,本研究的最佳诊断cut-off值是1.23 g/L,此时灵敏度和特异度分别为84.19%和80.62%。Hp或TB感染患者的血清IgG4水平与未感染者的并无显著性差异。结论IgG4升高的病例中,IgG4-RD是最为常见,但各种AID和消化系统疾病等也会导致IgG4升高。本地区IgG4诊断最佳cut-off值是1.23 g/L,与国际推荐的1.35 g/L存在差别,采用国际标准可能造成在灰区漏诊。本研究不支持Hp和TB会导致血清IgG4水平升高的观点。