真菌诱导子对白术悬浮细胞生长与次生代谢的影响

为探讨不同真菌诱导子对白术悬浮细胞生长和次生代谢的影响,于无菌状态下培养白术无菌苗,诱导愈伤组织,并构建悬浮细胞培养体系,记录悬浮细胞干质量,绘制生长曲线,添加不同内生真菌诱导子溶液后共培养,用高效液相色谱法测定悬浮细胞中白术内酯Ⅰ、白术内脂Ⅲ与苍术酮含量。结果表明,MS+6-BA(6-苄氨基嘌呤)1.0 mg/L+NAA(1-萘乙酸)0.5 mg/L是白术愈伤组织诱导的最适培养基,MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L是悬浮细胞增殖的最适培养基;白术悬浮细胞生长呈现S形曲线生长特征,对数生长期培养体系pH值稳定在4.8~5.0;真菌诱导子显著影响悬浮细胞生长与次生代谢,其中AM478真菌诱导子和AM393真菌诱导子对悬浮细胞生长具有显著促进作用,AM569真菌诱导子对白术内酯Ⅲ与苍术酮积累具有显著促进作用。综上,筛选得到的AM569菌诱导子可作为白术悬浮细胞生物转化的备选诱导子,以促进白术有效成分积累。

HPLC法同时测定白术中4种倍半萜

目的建立HPLC法同时测定白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮的含有量。方法白术甲醇提取液的分析采用Eclipse Plus C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;柱温25℃;体积流量1. 0 m L/min;检测波长220 nm、276 nm。结果白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮分别在0. 005 2~0. 052 mg/m L (R^2=0. 999 6)、0. 010~0. 10 mg/m L (R^2=0. 999 9)、0. 090~2. 9μg/m L (R^2=0. 999 7)、0. 30~1. 8 mg/m L (R^2=0. 999 9)范围内线性关系良好,平均加样回收率99. 13%~100. 34%,RSD 0. 72%~4. 76%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于白术的质量控制。