血液恶性肿瘤患者血流感染病原菌分布及耐药性

目的:通过分析血液恶性肿瘤患者血流感染病原菌分布及耐药情况,为临床治疗和感染控制提供参考。方法:回顾性分析2016年1月-2021年12月空军军医大学第二附属医院血液科送检血培养患者临床信息,根据是否进行造血干细胞移植将患者分为移植组和非移植组,分析病原菌种类及其耐药情况。结果:检出血培养阳性菌株299株。移植组G-菌占68.5%(50/73),G^(+)菌占6.8%(5/73),真菌占24.7%(18/73);大肠埃希菌对三代头孢菌素耐药率为77.8%,对碳青霉烯类耐药率为11.5%;肺炎克雷伯菌对三代头孢菌素耐药率为50.0%,对碳青霉烯类耐药率为56.2%。非移植组G-菌占64.1%(145/226),G^(+)占菌占31.0%(70/226),真菌占4.9%(11/226);G^(+)菌主要以屎肠球菌(6.6%,15/226)和凝固酶阴性葡萄球菌(6.2%,14/226)为主;真菌均为热带念珠菌;大肠埃希菌对三代头孢菌素耐药率为63.8%,对碳青霉烯类耐药率为10.3%;肺炎克雷伯菌对三代头孢耐药率为46.3%,对碳青霉烯类耐药率为26.8%。结论:血液恶性肿瘤患者血流感染病原菌种类多样,G-菌为主要的致病菌,病原菌对抗生素的耐药情况严峻,需根据病原菌检出和耐药情况科学合理地使用抗菌药物。

核仁型抗核抗体在自身免疫性疾病中的临床意义

目的 探讨核仁型抗核抗体(ANA)在相关疾病中的临床意义。方法 该研究为回顾性研究,收集2017年1月至2022年5月该院就诊患者临床样本71 780例,采用间接免疫荧光法检测临床标本的ANA,统计核仁型ANA在临床就诊患者中的阳性率,以及核仁型ANA阳性自身免疫性疾病(AID)患者的相关临床信息和实验室特征。结果 在71 780例患者ANA常规检测中,ANA阳性的有16778例,阳性率为23.37%。其中核仁型有1708例,占所有ANA常规检测的2.38%,在ANA阳性者中的比例为10.18%。>20~<50岁组和≥50岁组中不同性别患者核仁型ANA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),而≤20岁组中不同性别患者核仁型ANA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄组女性的核仁型ANA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中以>20~<50岁组女性核仁型ANA阳性率为最高。不同年龄组男性核仁型ANA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ANA阳性率以风湿免疫科患者为最高(70.35%),但核仁型ANA阳性主要见于生殖医学中心(12.90%)、呼吸内科(12.40%)及神经内科(11.29%)等科室,且科室间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。1708例核仁型ANA阳性者中,420例做了ANA滴度,包括34例AID患者,386例非AID患者。核仁阳性滴度在非AID患者与AID患者之间的差别无统计学意义(P>0.05)。结论 核仁型是ANA阳性者中的常见荧光模式,在ANA阳性者中存在性别和年龄差异;核仁型ANA阳性率和滴度在不同AID疾病中均存在差异。联合其他免疫功能指标检测,有助于早期鉴别诊断AID。

三种梅毒血清学检测方法的实验室评价

目的比较RPR,ELISA,TPHA三种血清学实验诊断方法在临床诊断梅毒中的应用。方法将42例一期梅毒、61例二期梅毒、24例潜伏期梅毒患者及健康人的血清分别用RPR,ELISA,TPHA三种方法进行检测,结果进行统计学处理。结果RPR,ELISA,TPHA三种方法针对梅毒患者血清的敏感度分别为85.8%,94.5%,96.9%;特异性分别为87.3%,98.0%,100.0%。其中一期梅毒RPR,ELISA,TPHA三种检测方法的检出率分别为73.8%,92.9%,95.2%;二期梅毒的检出率分别为96.7%,100.0%,100.0%;潜伏期梅毒的检出率分别为79.1%,83.3%,91.7%。应用统计学处理后发现,RPR与TPHA,ELISA的检出率比较均有显著差异,而ELISA,TPHA两种方法之间的检出率无显著差异。结论ELISA,TPHA 2种检测方法与RPR比较,具有较高的灵敏度和特异性,考虑到ELISA较TPHA方法的试剂成本便宜,且操作简便,为目前梅毒血清学检测的首选方法。

不同选择剪接形式的小鼠Era在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础。方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Westernblot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性。结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Westernblot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测。结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础。

人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达

目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶AhCPA。以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变并在大肠杆菌中表达。结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251bp,编码417个氨基酸。hCPA突变体mhCPA基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸。将mhC-PA基因在E.coli中诱导表达3h后表达量高达30%左右。结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶前药疗法”ADEPT中的应用奠定了基础。

不同剪切形式的小鼠Era对L-929细胞的影响

目的: 构建两种完全可调控诱导不同剪接形式小鼠era的真核表达载体,检测不同剪接形式的鼠Era蛋白对细胞生长状态的影响.方法: 构建两种不同剪接形式鼠era的完全可调控诱导表达载体,分别与受体表达载体pERV3稳定共转染鼠成纤维细胞系L 929.用PonA进行诱导表达后,以West ernBlotting检测Era蛋白表达水平,以MTT法测定细胞生长曲线,以流式细胞仪检测细胞周期.结果: 成功获得稳定的可完全诱导表达两种不同剪接形式鼠Era蛋白的细胞系;经过PonA诱导后,过表达两种剪接形式Era蛋白的L 929细胞,生长速度加快,G2 /M期细胞数量明显减少.结论: 两种剪接形式鼠Era蛋白在真核细胞周期中发挥重要作用.

γ-sem inoprotein单链抗体/突变型人羧肽酶A融合基因的构建

目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶 A基因后进行了定点突变 ,并将突变型人羧肽酶 A基因与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合 .方法 应用重叠延伸法将突变型人羧肽酶 A与抗精浆蛋白单链抗体基因进行融合 ,并在大肠杆菌中进行表达 .结果 序列分析表明 :我们得到大约为 1 980 bp的基因 ,其 5 端为抗精浆蛋白单链抗体基因 ,3 端为人羧肽酶 A突变体基因 ,抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶 A基因成功地融合为一条基因 ,应用 p GEX- 4 T- 1表达载体原核表达得到一 Mr约为 970 0 0的特异蛋白 .结论 抗精浆蛋白单链抗体和突变型人羧肽酶

利用基因芯片分析人era基因表达降低后细胞周期蛋白表达的变化

为了探讨利用RNAi封闭肿瘤细胞系的era基因表达后细胞周期相关蛋白的变化,实验利用Trizol法提取总RNA,用人细胞周期相关基因cDNA芯片检测细胞周期相关蛋白的表达。生物信息学分析结果显示:封闭肿瘤细胞系的era基因表达后,有10条细胞周期相关基因表达上调,7条基因表达下调,为研究人era基因的功能提供了线索。

肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定

目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,最后以Westem Blot及电镜进行鉴定。结果免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整。结论成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础。

过表达小鼠ERA蛋白对细胞系的影响

为了研究鼠ERA蛋白对细胞生长状态的影响,构建了可调控诱导表达载体pEGSH-mera,并与受体表达载体pERV3稳定共转染鼠成纤维细胞L-929。应用PonA进行诱导表达后,Western Blot检测其表达水平发现,细胞中鼠ERA蛋白明显增多;用MTT法测定其生长曲线发现,细胞生长加快;应用流式细胞仪检测其细胞周期发现,G2/M期细胞数量明显减少。所以,鼠ERA蛋白在细胞周期中发挥重要作用。

临床检验专业本科生实习带教的几点体会

临床医学检验学是临床医学的一个重要分支。临床检验专业相对于其他临床专业来说是一个新兴专业，其高等教育在20世纪末才得到了充分的重视和发展。我军某医科大学自1986年开始就为部队培养医学检验高等技术人才。1991年以来，我科相继承担了86名临床检验本科生的实习带教工作，取得了很好的成绩。临床检验专业是—个对动手能力要求非常高的专业。

不同剪接形式鼠era在细胞内的定位

为分析两种剪接形式鼠era在细胞内的定位,构建了era-EGFP融合表达载体pSMEGFP-meraW和pSMEGFP-meraS,然后用其转染鼠细胞系NIH3T3。荧光显微镜观察发现,两种剪接形式鼠era-EGFP融合蛋白均定位于细胞浆中的核周围。同时,应用免疫荧光细胞化学法分析了自然情况下,鼠细胞系野生型era蛋白在细胞内的分布,结果显示细胞核与细胞浆中均有分布。推测鼠era蛋白在细胞浆中合成修饰后,才转移至细胞核发挥作用。由于era-EGFP融合蛋白难以进入核内或需要较长时间,所以导致era-EGFP与野生型鼠era在细胞内定位不尽相同。

医学实验诊断学教学改进

随着现代临床检验技术的发展,实验诊断教学成为医学院本科教育重要组成部分,利用传统教学方法已无法适应现代教育的要求。文中通过以＂教育国际化＂的现代理念为指导,探索教学改革,在巩固学生基础知识教育的同时,着力贴近临床实际教学,以加强学生分析、判断问题能力 通过增加现代先进技术介绍,促进学生综合素质提高,推动本科教育迈向世界的平台。

结核性胸膜炎诊断方法在临床应用中的对比研究

目的探讨结核性胸膜炎的病理学检查、影像学(CT)特征及试验检测指标特点,以达到早诊断、早治疗的目的。方法选取该院2014年7月至2015年12月收治的86例结核性胸膜炎患者作为试验组,80例非结核性胸膜炎患者作为对照组,均行胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)、乳酸脱氢酶(LDH)、结核杆菌DNA(TB-DNA)、抗酸染色,同时联合结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)和影像学检查,并与病理学检查进行对比分析,比较各种检查方法的应用价值。结果 86例结核性胸膜炎患者中,ADA、TB-DNA、抗酸染色、T-SPOT.TB和影像学检查的灵敏度分别为53.48%(46/86)、6.98%(6/86)、11.62%(10/86)、84.88%(73/86)、37.21%(32/86),特异度分别为95.00%(76/80)、100.00%(80/80)、100.00%(80/80)、61.25%(49/80)、98.75%(79/80)。ADA、TB-DNA、T-SPOT.TB和影像学检查与病理检查的符合度分别为83.02%(44/53)、11.32%(6/53)、88.68%(47/53)、60.38%(32/53)。结论影像学和试验检测指标上的差异,对于结核性胸膜炎的的临床诊断具有一定的指导意义,临床上除常规检查外,应尽可能完善其他检查,进行综合分析以提高诊断准确性。

预处理技术对真空油炸脆蚕豆品质的影响

以慈溪所产大白蚕豆为原料,研究了不同预处理技术,包括浸渍、冷冻以及热风干燥,对真空油炸脆蚕豆品质的影响。结果表明:预处理显著地影响脆蚕豆的水分含量和含油率,且蚕豆初始水分含量与其含油率之间存在显著的相关性。浸渍和热风干燥预处理技术既可以显著地降低产品的含油率,同时,又不影响其脆度和主要色泽值。

丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性.方法 用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切含有HCV C区、E2区模拟表位和NS3～NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1（-）,脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达.以100 μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果.结果 所构建的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达.该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组.结论 已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答.

多发性骨髓瘤常用实验诊断方法评价

目的:比较血清蛋白电泳(琼脂糖凝胶法)、尿本周氏蛋白、骨髓细胞学等实验室指标对多发性骨髓瘤的诊断价值,找出经济、简便、快速的敏感指标。方法:分析多发性骨髓瘤的诊断过程,计算血清蛋白电泳、尿本周氏蛋白、骨髓细胞学诊断的敏感度和特异度。结果:琼脂糖凝胶血清蛋白电泳的敏感度是96.6%,特异度96.4%;尿本周氏蛋白的敏感度是10.5%,特异度98.2%;骨髓细胞学的敏感度是51.7%,特异度100%。.结论:琼脂糖凝胶血清蛋白电泳的敏感度最高,且简便、快速、经济实用。

蚕豆真空油炸试验研究

以慈溪所产大白蚕豆为原料,研究了浸渍、冷冻以及热风干燥对真空油炸脆蚕豆品质的影响。结果表明:浸渍、冷冻以及熬风干燥显著影响脆蚕豆的水分含量和含油率,且蚕豆初始水分含量与其含油率之间存在显著的相关性。浸渍和热风千燥预处理技术可以显著降低产品的含油率,而且不影响其脆度和主要色泽值。