Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响

目的研究Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响。方法21dSD雌性大鼠,注射PMSG 20IU,48h后对卵巢颗粒细胞进行原代培养,用TGFβRⅡ抗体及不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,通过免疫细胞化学方法观察TGFβ信号通路中Smad2/Smad3和P-Smad2/P-Smad3(磷酸化Smad2/3)表达的变化。结果1.Smad2/Smad3主要定位于卵巢颗粒细胞胞质,其活化形式P-Smad2/P-Smad3有少量表达;2.经FSH处理后,Smad2/Smad3向核内转移增多,P-Smad2/P-Smad3的表达增强,并与FSH的作用时间及剂量呈正相关性;3.TGFβRⅡ被抗体完全中和后再用FSH处理,Smad2/Smad3的核阳性率无显著增多,P-Smad2/P-Smad3的表达未见明显增强。结论1.FSH促进Smad2/Smad3的磷酸化;2.FSH对Smad2/Smad3的激活作用与TGFβ受体密切相关。

Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬

目的探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养。培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lipo 2000。免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率。Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化。结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加。结论Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关。

Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞增殖功能的影响。方法 21d SD雌性大鼠,腹腔注射孕马血清20IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养,用Smad3基因特异的siRNA基因沉默后,采用免疫细胞化学法检测颗粒细胞中Smad3蛋白表达的变化,以判定基因沉默效率,Smad3基因沉默后用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Cyclin D2蛋白表达的变化。结果 Smad3基因沉默后,卵巢颗粒细胞中PCNA阳性细胞百分比为(25.80±1.70)%,显著低于空白对照组(40.80±2.50)%,Smad3基因沉默后Cyclin D2阳性细胞百分比为(25.00±2.90)%,与空白对照组(55.50±2.50)%相比明显减少。结论 Smad3基因可促进大鼠卵巢颗粒细胞的增殖。

Smad2/3蛋白及其活化形式在人肾脏中的表达和定位

目的研究Smad2和Smad3蛋白及其活化形式P-Smad2、P-Smad3在人正常肾脏组织中的表达、定位及其意义。方法采用免疫组织化学技术(SP法)检测20例人肾脏中Smad2、Smad3蛋白及P-Smad2、P-Smad3的表达和定位。结果Smad2、Smad3在肾小管、肾小球和集合小管中广泛表达,主要定位于细胞质,其中远端小管曲部呈强阳性;P-Smad2、p-Smad3也在肾脏皮、髓质中广泛分布,主要定位于细胞核,远端小管更多见。结论Smad2、Smad3在正常肾脏中有着活跃的功能。

人卵巢颗粒细胞的体外培养方法探讨

目的建立人卵巢颗粒细胞分离纯化、体外培养的有效方法。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)穿卵时的卵泡液,用胰蛋白酶消化法及密度梯度离心法分离纯化颗粒细胞并用不同培养基进行培养。结果用体积分数为50%的Percoll细胞分离液分离,DMEM/F12或McCoy’5a液体培养基进行培养,细胞纯度高,存活率高,后续生长良好。结论建立了人卵巢颗粒细胞体外培养的稳定模型,为颗粒细胞的体外研究奠定良好的基础。

量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的定位及对其超微结构的影响

目的观察体外实验量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布和对其超微结构的影响。方法利用量子点与小鼠腹腔巨噬细胞体外共孵育和电子显微镜技术,观察量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布及对其超微结构的影响。结果透射电镜下,量子点被小鼠腹腔巨噬细胞内吞入细胞质内,形成单位膜包被的空泡样结构。扫描电镜下,可见与量子点体外共孵育的小鼠腹腔巨噬细胞的表面有较多的片状细胞突起。结论量子点可使巨噬细胞活化,并使其表面突起增多;量子点被巨噬细胞内吞后,分布在细胞质内,并形成单位膜包被的空泡样结构。

同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因抗体及叶酸对人胚心肌细胞同型半胱氨酸诱导基因的表达及细胞增殖的影响

目的 :研究同型半胱氨酸 (HCY)、同型半胱氨酸诱导基因抗体 (HCY -2Ab)及叶酸对人胚心肌细胞HCY 2表达及对心肌细胞增殖的影响。方法 :采用免疫细胞化学、RT PCR法体外测定人胚心肌细胞内HCY 2表达 ;用细胞计数法和MTT法对心肌细胞增殖的变化定量分析。结果 :当HCY的浓度小于 1 .2 5mmol/L时 ,HCY 2的表达随着HCY浓度的增高而逐渐增强 ,HCY促进细胞的增殖 ;当HCY浓度超过 1 .2 5mmol/L时 ,则HCY 2的表达逐渐降低 ,HCY抑制细胞的增殖 ;加入HCY 2Ab或叶酸 ,HCY 2的表达减弱 ,同时抑制细胞的增殖。结论 :HCY 2高表达时HCY对心肌细胞的增殖起促进作用 ;HCY 2低表达时则HCY、HCY 2Ab或叶酸抑制心肌细胞的增殖。

卵泡刺激素调节大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的表达及磷酸化

目的:研究卵泡刺激素(FSH)对大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的调节。方法:21dSD雌鼠,腹腔注射孕马血清20IU,对颗粒细胞进行原代培养,用转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)抗体中和卵巢颗粒细胞表面TβRⅡ,以阻断TGFβ/Smads信号通路,再以不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,免疫印迹法检测TGFβ信号通路中TβRⅡ、Smad2/Smad3及P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达。结果:TβRⅡ、Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量与FSH的作用呈时间依赖性显著增强;TGFβ/Smads信号通路被阻断后再用FSH处理,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量没有明显变化;细胞表面TβRⅡ恢复后,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量有少量增加。结论:FSH刺激大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3的表达和磷酸化;FSH对Smad2/Smad3的激活作用在相当程度上依赖于TβRⅡ。

大鼠实验性胃溃疡自愈期间胰岛PP细胞的免疫组织化学研究

目的探讨胰多肽在大鼠胃溃疡自愈期间的可能作用及意义。方法应用免疫组织化学PAP法、形态计量和图像分析法,研究大鼠胃溃疡自愈期间胰岛PP细胞的形态学、细胞的面数密度(NA)及平均灰度变化。结果与正常组和盐水组比较,胃溃疡组大鼠胰岛PP细胞NA于溃疡第6d明显下降,平均灰度值升高(P<0.05);溃疡第10-28d,PP细胞NA升高、平均灰度值下降(P<0.05);尤以第10d最明显。胰岛PP细胞免疫组织化学的形态观察结果与同期图像分析结果基本一致。结论胰岛PP细胞在实验性胃溃疡自愈期间,其细胞NA和平均灰度均发生改变。提示PP细胞参与了胃溃疡自愈的调节过程。

人树突状细胞摄取量子点后的表面标志与超微结构

目的：观察人树突状细胞体外摄取量子点后,其形态、表面标志、超微结构的变化.方法：两种量子点与人未成熟树突状细胞体外共孵育,荧光显微镜下观察量子点在树突状细胞内的分布;免疫细胞化学方法检测树突状细胞表面标志;扫描电镜及透射电镜观察树突状细胞超微结构的改变.结果：与量子点共培养的树突状细胞的细胞质内充满了较强荧光颗粒,共培养前后的树突状细胞表面标志均呈阳性反应.扫描电镜下可见树突状细胞表面有丰富的典型树枝样的突起.透射电镜下可见树突状细胞以胞饮的方式摄入量子点,形成有膜包被的囊泡分布在细胞质内.结论：树突状细胞是通过胞饮作用摄取量子点,且量子点对树突状细胞的形态、表面标志及超微结构没有影响,生物相容性好.

Survivin在正常睾丸中的表达和定位

Survivin是1997年由耶鲁大学的Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体-1（effectorcellproteasereceptor-1，EPR-1）的cDNA在人类基因组库中筛选克隆的一种凋亡抑制基因。Survivin蛋白属于凋亡抑制蛋白（1AP）家族成员，在大多数肿瘤中高表达，在成体已分化的正常组织细胞中几乎检测不到。然而，Survivin不仅仅是一个肿瘤特异性蛋白，有实验证明在鼠胚胎处于分化状态的组织中可以检测到Survivin的表达，而且在成体造血系统中也可表达Survivin。本研究采用免疫组织化学显色方法检测了不同年龄段人的正常睾丸组织中Survivin蛋白的表达定位，以探讨其在正常生精过程中的作用。

HCY、HCY-2及叶酸对人胚心肌细胞超微结构影响

人胚心肌细胞增殖、分化与发育的异常是多种先天性心脏畸形发生的主要原因。目前认为，妊娠过程中，HHM与先天性畸形的发生密切相关。为探讨HCY、HCY-2的表达蛋白和叶酸在人胚心脏发育中的作用，我们取体外培养的第三代人胚心肌细胞，分为空白对照组、0．5、1．0、1．5μmol／mlHCY、HCY-2Ab(1μl／ml原液)、

Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化

目的：观察Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化，探讨Smad3基因敲除小鼠肾是否有Smad2和p-Smad2代偿性增加。方法：4只Smad3基因敲除小鼠，10只野生型小鼠，应用免疫组织化学显色技术，检测Smad2和矿Smad2蛋白的定位和表达情况，并用Modc病理图像分析系统对图像进行半定量分析。结果：野生型小鼠肾Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质中有广泛弱表达，p-Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质、胞核中也有弱表达，而Smad3基因敲除小鼠的Smad2和p-Smad2的表达比野生型小鼠有显著升高。结论：Smad3基因敲除能引起小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的代偿性增加。

胸腺发育中AcP及ATPase活性的电镜细胞化学研究

胸腺发育中ＡｃＰ及ＡＴＰａｓｅ活性的电镜细胞化学研究殷彦君孙品伟董静霞毕振武（北京医科大学组织学与胚胎学系）为探讨胸腺基质细胞与胸腺细胞的相互作用，以铈为捕获剂，对１５ｄ，１７ｄ，１９ｄ胎鼠胸腺作酸性磷酸酶（ＡｃＰ）和腺苷三磷酸酶（ＡＴＰａｓｅ）的电...

盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠Tusc2、Lats2基因表达的影响

目的探讨盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠肿瘤抑制因子候选基因2(Tusc2)、大型肿瘤抑制因子2(Lats2)基因mRNA及蛋白水平表达的影响。方法首先建立小鼠乳腺癌模型,盐酸吉西他滨药物处理前(0d)、处理后第5天(5d)、处理后第10天(10d)分别取材,采用RT-PCR和Western blotting方法检测Tusc2、Lats2基因表达量的变化。结果盐酸吉西他滨作用乳腺癌小鼠第10天(10d)后,RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,实验组Tusc2与Lats2 mRNA相对表达量分别增加约4.5倍与8倍(P<0.05),其余各组与相应空白对照组相比,相对表达量无统计学差异(P>0.05);同时Western blotting结果显示,实验组与空白对照组相比,TUSC2与LATS2蛋白相对表达量分别上调约10倍与5倍(P<0.05)。其他各组之间相比统计学无显著差异(P>0.05)。结论盐酸吉西他滨能有效上调乳腺癌小鼠体内Tusc2、Lats2基因的表达。

开拓创新 节能降耗——万元增加值综合能耗指标的运用与节能降耗的设想

能源作为市场竞争必不可少的物质基础，与企业的发展息息相关。无论从企业的产、供、销，还是人、财、物管理，无一不蕴涵着能源。“十一五”规划首次将单位国内生产总值能耗降低20％作为约束指标与国民经济增长指标共同提出，显示出党和政府对资源问题的重视程度达到了前所未有的高度。“建立资源节约型社会”、“保护环境”也成为关注和谈论的焦点话题。

同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体和叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响

目的研究同型半胱氨酸(HCY)、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体(HCY-2Ab)及叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响。方法取培养的人胚心肌细胞,进行HE染色,常规电镜包埋,透射电镜观察。结果当HCY的浓度小于1·0mmol/L时,随着HCY浓度的升高,心肌细胞核内常染色质增多、细胞质内线粒体和粗面内质网均多于空白对照组,而糖原颗粒减少;当浓度超过1·0mmol/L时,心肌细胞逐渐退化,细胞核内常染色质减少,异染色质增多,核膜包裹染色质形成凋亡小体,细胞质内线粒体肿胀、数目减少,粗面内质网减少;加入外源性的HCY-2Ab或叶酸,心肌细胞形态较相同HCY浓度下的好转。结论HCY对培养的人胚心肌细胞超微结构的维持具有正调节和负调节双相作用;外源性的HCY-2Ab和叶酸在一定程度上可以逆转HCY的作用。