肺癌转移相关蛋白的比较蛋白质组分析与鉴定

采用比较蛋白质组技术对肺巨细胞癌高、低转移株的蛋白质表达谱进行双向电泳分离和MALDI TOF分析 ,并在蛋白质和mRNA水平进行进一步验证 ,成功鉴定了 11个肺癌转移相关蛋白 .其中 ,候选蛋白膜联蛋白1(ANX1)、细胞骨架蛋白 (CK18)、Rho GDP解离抑制剂 1(GDIR)、原肌球蛋白 3(TPMF)、蛋白谷氨酰胺γ 谷氨酰转移酶 (TGLC)和白介素 18(IL 18)在肺巨细胞癌高转移株显著高表达 ,而候选蛋白核氯离子通道蛋白 1(CLI1)、蛋白质二硫键异构酶 (ER6 0 )、肌酸激酶、硫氧还蛋白过氧化物酶 1(PDX1)和热休克蛋白 6 0(CH6 0 )在肺巨细胞癌高转移株显著低表达 .大多数的候选蛋白可通过调控肿瘤细胞的生长、迁移、粘附、凋亡和肿瘤免疫等环节来影响肿瘤细胞的侵袭和转移能力 .迄今为止 ,还未见候选蛋白CLI1和IL 18与肺癌转移相关的报道 。

肝癌细胞线粒体蛋白的MALDI-TOF质谱鉴定方法研究

目的:探索胶上蛋白原位酶切、肽质量指纹图(PMF)分析以及数据库检索方法的优化条件,建立适合于亚细胞比较蛋白质组学研究的质谱鉴定策略。方法:从考马斯亮蓝染色的2-DE胶上取下牛血清白蛋白(BSA)标准蛋白进行胶内原位酶切,与基质(CHCA)混匀后进行MALDI-TOF MS分析;对来源于人肝细胞癌细胞株QGY-7703线粒体的差异表达的候选蛋白点L9,按照通过BSA标准蛋白优化的条件进行MALDI-TOF质谱鉴定;其肽质量指纹图(PMF)经MS-Fit检索。结果:经数据库检索,BSA的肽质量指纹图(PMF)匹配肽质量数为10/11,序列覆盖率为19%,说明实验条件完全可信。候选蛋白点L9的PMF数据经数据库检索后,排名前两位的蛋白均为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor),其匹配肽段为9/13,序列覆盖率为24%;且OXCT的理论分子量(56kda),理论等电点(7.1),与胶上L9蛋白的位置相符。故候选蛋白点L9确认为OXCT(3-oxoacid CoA transferase 1 precursor)。结论:本文所确定的鉴定策略适用于线粒体比较蛋白质组学的研究。

B7转染白血病细胞K562的作用研究

目的：探讨共刺激信号分子Ｂ７转化人白血病细胞株Ｋ５６２后，转化细胞的生物学性状变化及介导的免疫作用。方法：构建重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１Ｂ７，转化人白血病细胞株Ｋ５６２，获得单个细胞克隆，观察Ｋ５６２－Ｂ７的生长周期，绘制生长曲线，检测Ｋ５６２－Ｂ７诱导Ｔ细胞分泌ＩＬ－２的情况。结果：ｐｃＤＮＡ３．１Ｂ７可在Ｋ５６２中稳定表达，Ｋ５６２－Ｂ７的生长增殖速度比野生型Ｋ５６２慢。在体外，Ｋ５６２－Ｂ７可诱导ＰＭＮＣ分泌ＩＬ－２，２４ｈ上清液中ＩＬ－２含量比Ｂ７阴性Ｋ５６２高１倍左右。结论：Ｂ７基因转入人白血病细胞株Ｋ５６２后，细胞本身增殖能力降低，且Ｋ５６２—Ｂ７可活化ＣＤ＋４Ｔ细胞分泌细胞因子ＩＬ－２，提高宿主抗肿瘤免疫能力。

白细胞介素18在肺癌细胞的表达及其在肿瘤转移中功能的初步探讨

目的 检测白细胞介素18(IL-18)在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达,探讨IL-18在肺巨细胞癌转移中介导的作用。方法 采用半定量RT-PCR或Western blot技术,检测IL-18在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达;构建IL-18 cDNA的重组质粒,测序分析其序列同源性;同时把IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株,观察IL-18对肿瘤细胞体外转移能力和转移表型的影响。结果 同肺巨细胞癌低转移株相比,IL-18 mRNA和蛋白均只能在肺巨细胞癌高转移株检测到;从肺巨细胞癌高转移株扩增出的IL-18 cDNA序列与文献报道完全一致;此外,将IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株后,稳定转染株细胞可正确表达IL-18融合蛋白,且转染细胞的体外迁移能力显著上调,为空对照组的3倍左右,而上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白表达显著下调,为空对照组的50％左右。结论 肺巨细胞癌高转移株可组成性表达IL-18,且IL-18可能通过下调E-cadherin表达促进肺巨细胞癌细胞的转移。

共刺激信号在血液系统恶性肿瘤免疫治疗中的作用研究

共刺激信号是激发有效的细胞免疫应答所必需的Ｂ７分子家族与ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４等共刺激分子相结合所产生的共刺激信号在提呈肿瘤抗原、产生特异性的抗肿瘤免疫方面发挥着重要作用。本文就共刺激信号介导的免疫学功能及其在血液系统恶性肿瘤的免疫治疗中发挥的作用作一综述。

膀胱癌实验室检测指标的研究进展

膀胱癌(Bladder Carcinoma,BC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,好发于50～70岁。据报道发病率为男1.47/10万,女0.46/10万。目前,BC的实验室检测指标很多,如:细胞学检测、流式细胞计数仪测DNA含量、癌基因分析、单克隆抗体检测BC的肿瘤相关性抗原等多种检测手段为BC的早期诊断、临床分期、病理分级及预后判断提供了重要依据,已越来越受到人们的重视。本文就BC近年来的一些实验室检测指标综述如下。

B7修饰K562细胞来源的树突状细胞抗肿瘤作用的研究

目的 探讨共刺激信号分子B7转化人白血病细胞株K562后,K562-B7在细胞因子作用下分化为树突状细胞(Dendritic cell,DC),K562-B7-DC的生物学特性以及介导的抗肿瘤免疫作用。方法 构建重组真核表达质粒pcDNA3.1D7转化人白血病细胞株K562,获得单个细胞克隆。用K562-B7细胞株在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下分化为DC细胞,观察K562-B7-DC的生物学性质及其抗肿瘤的免疫功能。结果 K562-B7-DC在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下能分化为DC细胞并能诱导出较强的同种混合淋巴细胞反应及CTL活性,且能分泌内源性IL-12、INF-γ。结论 细胞因子联合诱生的K562-B7-DC能有效的执行其抗原提呈功能,同时协同T淋巴细胞发挥其抗肿瘤免疫作用。

深化临床基础检验学教学改革的思考与对策

以教材和考试为教学改革的切入点,探索临床基础检验学教学改革的教学模式。认为教材应多样化:把反映当前有关新理论、新技术的参考书介绍给学生;补充自编教材,将与临床联系密切的实践及相关的最新理论和病历分析吸纳到自编教材;利用网络资源和电子音像教材作为辅助教材。其考试应增加考核题型、考题量和病例分析题,注重对学生记忆力、判断力、分析综合能力的检测。达到增加学生学习的积极性、主动性和创造性,培养面向二十一世纪具有综合能力和创新意识的高素质医学检验人才的目的。

甲状腺次全切除术的护理

严密观察了甲状腺次全切除术后１８例患者，２例出现切口内出血和甲状腺危象。经及时处理和加强各项护理措施，全部患者痊愈出院。结果表明熟悉甲状腺次全切除术可能出现的并发症，有利于重点观察病情和组织抢救。

IL-18促进肺癌细胞转移的功能鉴定

目的 探讨IL 18是否具有促进肺癌细胞转移的功能以及通过何种途径发挥作用。方法 以人肺巨细胞癌高、低转移株为肿瘤转移的研究模型 ,采用Westernblot和半定量RT PCR结合Northernblot法检测IL 18蛋白或mRNA在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达 ;随后采用基因转染技术将IL 18的正义或反义表达质粒分别转染肺巨细胞癌低或高转移株 ,比较IL 18稳定转染细胞转移表型的改变。采用MICS系统检测稳定转染细胞体外迁移和侵袭能力的改变 ,采用Westernblot法检测稳定转染细胞转移表型相关指标的改变 ,从而确定IL 18通过何种途径促进肺癌细胞转移。结果由于IL 18蛋白和mRNA仅在肺巨细胞癌高转移株检测到 ,因此 ,将IL 18正义表达质粒转染肺巨细胞癌低转移株后 ,可检测到IL 18融合蛋白的表达 ,且稳定转染细胞出现了细胞体外迁移能力的显著上调和上皮细胞间黏附分子E cadherin蛋白的显著下调 ;相反 ,将IL 18反义表达质粒转染肺巨细胞癌高转移株后 ,可检测到内源性IL 18蛋白和mRNA水平的下调 ,且稳定转染细胞出现了细胞体外侵袭能力的显著下调和E cadherin蛋白的显著上调。结论 IL 18可能通过抑制上皮细胞间黏附分子E cadherin蛋白的表达来促进肺癌细胞的转移。

肺巨细胞癌高低转移株转移能力差异相关分子的研究

目的 鉴定在肺巨细胞癌高、低转移株差异表达的转移相关分子 ,探讨肺巨细胞癌的转移机制。方法 以肺巨细胞癌高、低转移株 (即PLA80 1D、PLA80 1C)为转移模型 ,通过细胞体外迁移和侵袭实验 ,验证高、低转移株间细胞体外迁移和侵袭能力的差异。以明胶酶谱实验 ,分析肿瘤细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2和MMP 9)的活性 ;以Westernblot技术 ,检测肿瘤细胞分泌的MMP 2、MMP 9、组织基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMP 1和TIMP 2 )的蛋白水平 ,以及p53、细胞增殖核抗原 (PCNA)、p16、CD44(V6)异构体、细胞骨架蛋白 (CK18)、上皮细胞间黏附分子 (E cadherin)和肿瘤转移抑制蛋白(nm2 3 H1)的蛋白水平 ;以半定量RT PCR技术 ,检测细胞内MMP 2、MMP 9、TIMP 1、TIMP 2和血管内皮生长因子 (VEGF)的mRNA水平。结果 肺巨细胞癌高转移株PLA80 1D的细胞体外侵袭能力显著高于低转移株PLA80 1C ,大约为后者的 4倍。PLA80 1D细胞株分泌的MMP 2活性高于PLA80 1C细胞株 ,其原因主要是由于分泌的MMP 2蛋白以及细胞内MMP 2mRNA水平显著增高所致。在PLA80 1D细胞株内 ,p53、PCNA、CK18蛋白和VEGFmRNA为显著高表达 ,p16、E cadherin和nm2 3 H1蛋白为显著低表达 ,而MMP 9、TIMP 1、TIMP 2和CD44(V6)蛋白的表达在高。