利用CRISPR/Cas9系统制备斑马鱼cbsb敲除模型

目的 采用成簇的规律性间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas9系统对斑马鱼胱硫醚-β-合成酶b基因(cbsb)进行编辑,并制备稳定的斑马鱼cbsb敲除品系。方法 使用ClustalX软件分析斑马鱼cbsb编码蛋白(Cbsb)的保守结构域,利用生物信息学选取向导RNA(gRNA)靶点,体外合成并纯化gRNA和密码子优化的Cas9 mRNA,在刚受精的斑马鱼胚胎(1-cell期)中显微注射混合的gRNA和Cas9 mRNA,提取受精后3 d的斑马鱼幼鱼基因组,通过PCR扩增并测序分析靶点的切割效率,通过基因组扩增和测序筛选并获得cbsb敲除的稳定品系。结果 斑马鱼Cbsb与人、小鼠胱硫醚-β-合成酶(CBS)高度同源。在斑马鱼Cbsb保守结构域的编码序列处设计4个靶点,其中4#靶点具有高效的切割效率,利用该靶点制备并筛选获得多个cbsb敲除斑马鱼,选取-3+13 bps和-228 bps移码突变的两种品系,进一步筛选获得稳定的cbsb敲除品系。结论 利用CRISPR/Cas9系统成功制备了两种斑马鱼cbsb敲除的稳定品系,为进一步在斑马鱼活体中研究Cbsb的功能奠定了基础。

内源性γ-干扰素对斑马鱼血管发育的影响

目的探索内源性γ-干扰素(IFN-γ)对斑马鱼血管发育的影响。方法利用反义吗啉环寡聚核苷酸(MO)技术下调斑马鱼IFN-γ受体crfb17的表达,并通过激光共聚焦成像分别观察胚胎受精后3 d和5 d的脑血管发育情况与胚胎受精后28 h和31 h的躯干血管发育情况;进一步利用软件分析胚胎受精后3 d时crfb17 MO组和对照MO组中脑网络特征的差异。结果下调斑马鱼IFN-γ受体crfb17后,斑马鱼脑血管和躯干血管的发育受到明显抑制,胚胎受精后3d时crfb17 MO组的中脑血管总长度、血管节段数、血管密度都较对照MO组显著降低(P<0.001)。结论内源性IFN-γ在斑马鱼血管发育阶段具有促血管生成的作用。

生存素对淀粉样前体蛋白代谢的调节作用

目的:探索生存素(survivin)对淀粉样前体蛋白(APP)代谢的调节作用。方法:通过免疫荧光技术,利用激光共聚焦显微镜观察体外原代培养的大鼠海马神经元内survivin与APP是否存在共定位。进而通过APP质粒单转染或APP和survivin质粒共转染细胞,并利用Westernblot方法检测survivin是否影响APP的表达。将前述的转染细胞进行凋亡染色后,经流式细胞仪检测,比较suivivin是否可以抑制APP引起的细胞凋亡。结果:体外原代培养的大鼠海马神经元内survivin与APP可以共存,survivin可以抑制APP在PC12细胞内的表达,APP过量表达可以诱发细胞凋亡,survivin可以抑制APP所引起的细胞凋亡。结论:Survivin可以抑制APP在细胞内的表达,进而抑制APP过表达引起的细胞凋亡。

特异性蛋白-4与神经系统关系的研究进展

特异性蛋白（specificity protein,Sp）4是Sp样转录因子家族（Sp1-Sp9）中一员,主要分布于心脏、骨骼肌及神经系统,且在神经系统中的表达最多。在神经系统中,Sp4调控发育期小脑树突形态、出生后海马齿状回颗粒细胞的发育、出生后海马细胞的增生、海马长时程增强以及与神经精神疾病有关的一些动物行为,包括背景和空间记忆、感觉门控以及前脉冲抑制,对精神分裂症、双相情感障碍和阿尔茨海默病等神经精神疾病有着重要影响。

月经相关性偏头痛患者的维生素D水平研究

目的·比较月经相关性偏头痛患者与非月经性偏头痛患者维生素D水平的差异。方法·纳入2017年6月—2018年6月于上海交通大学附属仁济医院就诊的符合月经相关性偏头痛患者100例为病例组,匹配100例非月经性偏头痛患者为对照组。采集患者临床信息及检测血清维生素D水平。采用单因素分析比较组间临床资料的差异,采用Logistic回归模型分析月经相关性偏头痛与维生素D水平的关系。结果·与对照组相比,病例组维生素D水平较低[(13.48±5.02)ng/mL vs (14.93±4.94)ng/mL],组间差异有统计学意义(P=0.042)。其余临床资料的组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,维生素D低于10 ng/mL的患者是高于20 ng/mL的患者发生月经相关性偏头痛的3.656倍(OR=3.656,95%CI 1.382～9.672,P=0.009)。另外,偏头痛发生于月经前与月经中的患者在临床特点及维生素D水平等方面的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论·低维生素D水平可能与月经相关性偏头痛发生相关,但与偏头痛发生于月经前或月经中无关。

原发性头痛患者血清维生素D水平变化及相关性分析

目的观察原发性头痛中偏头痛及紧张型头痛患者维生素D水平,并分析其与临床特点的相关性。方法选择2017年6月-2018年6月上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科就诊的紧张型头痛患者150例、偏头痛患者277例作为研究对象,另选择同时期于体检中心健康体检者250例作为健康对照组。详细记录3组临床资料并测量血清25-(OH)D水平。比较3组受试者维生素D水平的差异,同时根据维生素D是否正常分亚组,分析其与紧张型头痛及偏头痛患者临床特点的相关性。结果紧张型头痛及偏头痛患者的维生素D水平均低于健康对照者(F=57.698,P<0.001),调整性别、年龄及季节后这种差异仍存在(P<0.05)。在紧张型头痛中,维生素D缺乏亚组较正常亚组头痛程度重(t=3.034,P=0.004),调整性别、年龄及季节后这种差异仍存在(P<0.05);在偏头痛中未发现头痛特点与维生素D缺乏有关(P>0.05),但正常亚组年龄较缺乏亚组高(t=3.827,P<0.001),接受维生素D检测的季节差异有统计学意义(χ^2=17.217,P<0.001)。经二元Logistic回归分析,在紧张型头痛中发现,校正性别及年龄后,头痛程度与维生素D的缺乏显著相关(OR=1.487,95%CI 1.153~1.918,P=0.002),接受检测的季节也与维生素D缺乏相关(OR=0.384,95%CI 0.168~0.876,P=0.023)。在偏头痛中发现,校正性别和年龄后,接受检测的季节与维生素D缺乏相关(OR=0.186,95%CI 0.082~0.424,P<0.001)。结论维生素D缺乏可能与原发性头痛相关,尤其紧张型头痛,维生素D缺乏可能与其疼痛程度有关。