可吸收止血膜在颅脑肿瘤手术中的应用

目的探讨可吸收止血膜在颅脑肿瘤切除术中的止血效果及安全性。方法选择2009年1月～2011年9月我科颅脑肿瘤手术116例,将116例颅脑肿瘤交替入组依次分为2组:实验组,肿瘤创面常规加应用可吸收止血膜止血;对照组,肿瘤创面采用常规电凝、脑棉等方法止血,比较2组术中止血有效率、术后24 h出血量。结果对照组止血有效率为65.5%(38/58),显著低于实验组96.6%(56/58)(Z=-3.997,P=0.000)。实验组术后24 h内出血量(25.1±3.4)ml,显著少于对照组(120.5±6.3)ml(t=-101.488,P=0.000)。结论可吸收止血膜在颅脑肿瘤手术中有良好的止血效果。

人工周围神经种子细胞的研究进展

修复组织和器官缺损一直是研究热点。组织工程学的应用使这项研究增加了新的内容。在修复周围神经的研究过程中,人工神经是一种新兴的组织工程学技术。这项技术不仅要选择合适的框架,更关键的是要选择合适的种子细胞。这类种子细胞不仅要分泌促神经再生的因子,更要通过分泌细胞外基质及与再生轴索间的相互作用实现促进神经再生的作用。雪旺细胞,骨髓间充质干细胞和神经干细胞是研究较多的三类细胞。现就这三类细胞在周围神经再生中的应用作一综述。

骨髓间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞各阶段标志物的表达研究

目的探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类雪旺细胞各阶段的标志物表达情况。方法分别提取、分离和纯化Wistar鼠骨髓间充质干细胞做为待诱导细胞。诱导试剂为2-巯基乙醇、全反式维甲酸、heregulin-β1、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和弗司扣林。控制诱导试剂加入的种类,使细胞处于不同的诱导阶段,将其分为5组分别行免疫组化检测细胞p75、s-100和GFAP的表达情况。第1组未加入任何诱导试剂。第2组经过2-巯基乙醇诱导。第3组经过2-巯基乙醇诱导后,再加入全反式维甲酸。第4组在第3组基础上,再同时加入heregulin-β1、血小板源性生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和弗司扣林。第5组是将第4组细胞移入普通培养基培养7d后进行检测。结果第1￣3组标志物p75、s-100、GFAP表达率均为阴性,第4组p75(59.0±4.1)%、s-100(62.0±5.4)%和GFAP(56.0±3.2)%,第5组p75(34.0±5.2)%、s-100(23.0±2.5)%和GFAP(32.0±4.8)%。结论骨髓间充质干细胞在序贯加入诱导因子后可分化为类雪旺细胞,但类雪旺细胞表达雪旺细胞的标志物不具有持续性。

神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤

背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展。方法:以"neural stem cells,stem cell transplantation,ischemic brain injury"为检索词,检索Pubmed数据库1990至2012年相关文献;以"神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤"为检索词,检索CNKI数据库2005至2012年相关文献。分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究。结果与结论:①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离。②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等。③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等。正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等。④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活。神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高。缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望。

微创颅内血肿清除术治疗高血压性基底节区脑出血的临床疗效分析

目的以神经元特异性烯醇化酶和可溶性S-100蛋白作为检测脑出血后脑损伤的客观指标,评价微创颅内血肿清除术与保守治疗高血压性基底节区脑出血的临床疗效。方法收集2010年9月～2012年9月于本院住院治疗的高血压性基底节区脑出血患者146例,按照是否同意手术原则分为微创颅内血肿清除术组(微创组)92例,保守组54例,对照组为同期体检患者60例,采用ELISA法动态监测血清NSE和S-100蛋白浓度,同时比较不同时间段两组患者神经功能缺损评分(National Institutes ofHealth stroke scale,NIHSS)、巴氏指数(Barthel index,BI)、术后血肿及水肿体积和临床疗效等。结果治疗后14天内微创组患者血清NSE浓度显著高于对照组且具有统计学意义(P<0.05),于14天和28天显著低于保守组(P<0.05);保守组于28天内高于对照组(P<0.05)。微创组患者血清S-100蛋白浓度于14天内显著高于对照组(P<0.05),于14天和28天显著低于保守组(P<0.05);保守组于28天内高于对照组(P<0.05)。微创组患者于治疗后3、7、14、28天及3月的NIHSS和BI评分显著优于保守组(P<0.05)。微创组有效率82.61%显著优于保守组的40.74%(P<0.05)。结论微创颅内血肿清除术治疗高血压性基底节区脑出血具有显著减轻脑损伤、降低致残率及病死率、神经功能恢复快和安全性高等优点,值得临床推广。

经眉切口眶顶入路显微手术切除垂体瘤

目的 介绍经眉切口眶顶入路切除垂体瘤的技术和经验。 方法 9例病人采用经眉切口眶顶入路切除。 结果 全切肿瘤8例，次全切除肿瘤1例。 术后病人症状缓解，恢复正常生活工作。 结论 采用经眉切口眶顶入路可以提供足够的手术空间显露鞍区占位病变，减少术中脑压板的使用，避免了对脑组织的压迫。手术创伤小，病人恢复快。

脑损伤病人血浆、脑脊液中一氧化氮含量周期变化的研究

目的 测定脑损伤病人伤后早期血浆、脑脊液中NO的含量 ,阐述一氧化氮 (NO)对脑损伤病人继发损害的生物学作用。方法 选取伤后 2 4h内入院的病人 5 6例 ,采用改进的Griess法测定伤后 2 4、4 8、72、16 8h血浆、脑脊液中NO含量。结果 脑损伤病人伤后 2 4h内血浆、脑脊液中NO即开始明显升高 ,在 72h内达到峰值 ,到 16 8h基本降至正常。脑损伤病人轻、中、重型组各组之间NO含量均有显著差异。损伤越重 ,NO含量越高。除了脑震荡外 ,不同损伤类型间NO含量无显著差异。在损伤类型和损伤程度具有可比性的情况下 ,手术治疗组和保守治疗组NO含量无显著差异。结论 脑损伤病人体内NO含量确实发生明显的变化 ,它的变化趋势和变化程度与病人的损伤程度和预后又直接相关 ,证实NO参与了脑损伤后的继发损害且发挥着重要作用 ,提示通过测定血浆、脑脊液 (尤其脑脊液 )中NO含量可以判断脑损伤程度、治疗效果和预后。

神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤实验研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性。方法孕龄8～10d的大鼠神经干细胞在体外扩增后，用免疫组织化学方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白nestin、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。分别于缺血后不同时间窗将神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠模型的缺血半暗带和梗塞中心，移植4W后比较不同移植部位神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达nestin的神经球，其在含血清条件下可分化为表达GFAP的胶质细胞和表达NSE的神经元。神经干细胞移植4W后可见所有移植动物的细胞都存活，梗塞中心移植的细胞存活、增殖水平明显低于半暗带移植的细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠梗塞中心和半暗带均可长期存活，其增殖能力与移植部位密切相关。

神经干细胞脑室内移植治疗大鼠脑缺血的实验研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性。方法取胎龄8～10d大鼠神经干细胞体外扩增,采用免疫组织化学方法检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。以Brdu表记神经干细胞,分别于缺血后24h和4周移植至局灶性脑缺血大鼠模型的脑室内和梗死中心,比较不同移植部位和不同移植时间神经干细胞的存活、增殖和迁移情况。结果移植后可见移植细胞存活至少8周以上,移植部位不同不影响细胞存活。脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移,且以缺血后24h移植组较缺血后4周移植组迁移趋向性更强。结论大鼠胚胎神经干细胞移植至局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活并广泛迁移,其迁移趋化能力与缺血后移植时间有关。

血管内皮生长因子在脑缺血再灌注损伤中的作用研究进展

血管内皮生长因子又称（ vascular endothelial growth factor，VEGF）血管调理素因子（ vascutotropin）或血管通透因子（ vascular permeability factor），是内皮细胞产生的特异性促有丝分裂原，具有促进内皮细胞增生、迁移，增加血管通透性及加速新血管形成的作用［1］。

支架辅助弹簧圈栓塞治疗颅内微小宽颈动脉瘤

目的评价支架辅助弹簧圈栓塞治疗颅内微小宽颈动脉瘤的可行性及疗效。方法回顾性分析8例颅内微小宽颈动脉瘤的血管内治疗经验。均经DSA确诊,并行支架辅助电解脱弹簧圈栓塞治疗。结果完全栓塞2例,近全栓塞4例,部分栓塞2例。未发生血管内治疗技术相关并发症。GOS5分7例,4分1例。结论支架辅助弹簧圈栓塞治疗颅内微小宽颈动脉瘤安全可行。

姜黄素通过Hedgehog信号通路抑制胶质瘤细胞增殖

目的探讨姜黄素通过Hedgehog信号通路对胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用细胞毒性检测方法检测姜黄素对不同种胶质瘤细胞的细胞毒性作用;通过实时定量PCR、Western-blotting分析和免疫荧光检测姜黄素对Hedgehog信号通路中重要成分(Shh、Smo、GLI1)表达的影响;采用MTT实验、细胞集落形成实验观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响。结果随姜黄素浓度增加,姜黄素对胶质瘤细胞系的细胞毒性作用增强。姜黄素作用于胶质瘤细胞后,Hedgehog信号(Shh、Smo、GLI1)mRNA和蛋白表达水平下降。姜黄素抑制GLI1转移进入细胞核同时减少其受体集聚。姜黄素抑制胶质瘤细胞增殖及细胞集落形成,并显示出浓度和时间依赖性。结论姜黄素通过下调Hedgehog信号通路中的重要成分(Shh、Smo、GLI1)抑制胶质瘤细胞增殖。

大鼠局灶性脑缺血—再灌注损伤组织病理及超微结构研究

为探讨脑缺血—再灌注损伤病理机制进行实验性研究。方法 应用鼠大脑中动脉局灶脑缺血—再灌注模型 ,进行组织病理超微结构研究。结果 ①缺血 1、2小时再灌注脑损伤最轻 ,缺血 4小时再灌注脑损伤最重 ,中性粒细胞出现在缺血损伤区 ,与单纯缺血 4小时损伤程度相当。②缺血 1小时再灌注 ,凋亡细胞最多 ;缺血 2小时再灌注 ,凋亡细胞少于缺血 1小时再灌注组 ;缺血 3小时再灌注 ,凋亡细胞几乎是缺血 1小时再灌注组的 1/ 4,并与坏死细胞掺杂 ;缺血 4小时再灌注 ,凋亡细胞不存在 ,主要以坏死细胞为主。结论 缺血性损伤发生不可逆时 ,在损伤中心区有中性粒细胞出现 ,循环破坏严重。不同强度的缺血导致细胞凋亡的发生从缺血损伤中心到半暗带 ,较温和的脑缺血损伤以细胞凋亡为主 ,剧烈脑缺血损伤以细胞坏死为主 。

磁共振成像技术在原发性三叉神经痛微血管减压术前诊断中的应用

目的探讨磁共振成像技术(MR)在原发性三叉神经痛微血管减压术前诊断中的应用价值。方法由神经外科医师及2名神经放射科医师共同参与,盲法分析88例临床诊断为原发性三叉神经痛患者,经过三维时间飞跃磁共振血管成像(3D-TOF)图像,对照应用开颅微血管减压术术中探查结果及术后疗效进行分析。结果 88例原发性三叉神经痛患者中,术前行MR检查,在3D-TOF序列图像上显示血管神经压迫症状侧阳性率86.4%(76/88),非症状侧阳性率12.5%(11/88),两侧阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。手术所见周围血管压迫神经者83例(94.3%),未压迫神经者5例(5.7%),3D-TOF诊断符合率97.6%(81/83)。术后症状消失或缓解81例(92.0%)。结论 MR可清楚地显示三叉神经与邻近血管的关系,原发性三叉神经痛微血管减压术具有较高的临床应用价值。

大鼠局灶性脑缺血后神经前体细胞增殖迁移的研究

目的研究成年大鼠内源性神经前体细胞在局灶性脑缺血后不同时间窗的增殖分化情况。方法用Longa线栓法制作大鼠脑缺血模型,用免疫组化的方法检测大鼠内源性神经前体细胞最佳增殖时间及最大增殖效果。结果脑缺血半球室管膜下区、嗅球和头端迁徙渠道(rostralmigratorystream,RMS)Brdu阳性细胞数在脑缺血后1d明显增多,3～7d达高峰,14d后开始下降;Brdu阳性细胞数在脑缺血半球室管膜下区和嗅球成正相关;脑缺血侧海马齿状回未见Brdu阳性细胞数明显增多;Brdu阳性细胞在脑缺血后第3周数量最大,从第4周开始下降。结论成年大鼠局灶性脑缺血后3～7d内源性神经前体细胞增殖达高峰,在该期进行外源性细胞移植治疗可能更有效。

颅内静脉窦血栓形成合并脑出血所致脑疝的手术治疗效果

目的观察采用血肿清除及去骨瓣减压术治疗颅内静脉窦血栓形成(CVST)合并脑出血所致脑疝患者的疗效。方法回顾性分析哈尔滨医科大学第二附属医院2009年5月—2011年9月采用脑内血肿清除及去骨瓣减压术治疗的CVST合并脑出血所致脑疝患者的临床资料,共7例,术后华法林抗凝治疗6个月。观察患者的治疗效果。结果 7例中,出院时按格拉斯哥预后评分评估,恢复良好3例,轻残1例,重残1例;另2例患者术后短期瞳孔恢复,血肿清除彻底,脑移位回复,但分别于术后1d和2d又出现对侧瞳孔散大,CT显示对侧有散在的斑片状出血灶,伴有周围脑组织严重水肿和缺血的改变,其中植物状态1例,死亡1例。7例均未发生与手术直接相关的并发症。随访6～12个月,无静脉窦血栓形成复发及再发颅内出血的患者。结论对于CVST合并脑出血引起脑疝的患者,行血肿清除及去骨瓣减压术是必要和有效的治疗方法,术后发生其他部位再出血的患者预后不佳。

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的探讨姜黄素通过Fas/Fas L信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响。方法以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、Fas L m RNA和蛋白的表达水平。结果随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P<0.05),24 h的IC50为14.28μmol/L。流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G2/M期。姜黄素作用胶质瘤后Fas和Fas L在m RNA和蛋白表达水平上升(P<0.05)。姜黄素对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过上调Fas/Fas L通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。

神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血:移植部位与移植时间的比较

目的:观察大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内的迁移和分化。方法:实验于2003-05/2004-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。孕龄8～10dWistar大鼠仔鼠神经干细胞体外扩增后,用免疫组织化学的方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,健康Wistar大鼠40只大脑中动脉闭塞后随机分成梗塞后24h脑室内移植神经干细胞组、闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组、闭塞后4周脑室内移植神经干细胞组、闭塞后4周梗死中心移植神经干细胞组,各实验组均有仅移植生理盐水的空白对照。比较不同移植部位和不同移植时间神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果:实验大鼠40只均进入结果分析。从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达巢蛋白的神经球,含血清条件下可分化为表达胶质纤维酸性蛋白的胶质细胞和神经元特异性烯醇化酶的神经元,移植后可见移植细胞存活至少8周以上,①闭塞后24h脑室内移植神经干细胞组可见移植细胞大量存活,穿过室管膜向脑组织迁移,特别是向缺血周边区迁移;②闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组细胞主要聚集在梗死中心移植区域,也有大量细胞存活,充填梗死区,少量细胞可穿过胼胝体向健侧迁移;③闭塞后4周脑室内移植神经干细胞组仅见少量Brdu阳性细胞存活,但细胞增殖分裂较闭塞后24h脑室内移植神经干细胞组不明显,且存活细胞主要仍在移植部位;④闭塞后4周梗死中心移植神经干细胞组存活移植细胞也较闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组明显减少。结论:大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内可长期存活并广泛迁移,不同移植部位不影响细胞存活,脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移,缺血后24h移植较缺血后4周移植其迁移趋向性更强。

LY294002通过抑制胶质瘤的PI3K/Akt通路增强三氧化二砷毒性作用

目的探讨LY294002通过抑制胶质瘤的PI3K/Akt通路增加三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)毒性作用。方法分别用不同剂量的LY294002检测胶质瘤细胞的相对增殖率、侵袭能力、凋亡能力和PI3K、p-AKT的蛋白表达情况。选择适合的与ATO作用的LY294002浓度。结果与单独药物处理组相比,LY294002联合ATO治疗组肿瘤细胞增殖明显受到抑制。药物联合组诱导细胞凋亡,以及降低了U251细胞的侵袭性。与单独ATO治疗组相比,药物联合治疗组中,凋亡相关蛋白cleaved-caspase3及Bax显著增加。LY294002使p-Akt及Bcl-2表达显著降低。结论 LY294002通过负调节PI3K/Akt通道提高了ATO对胶质瘤细胞的毒性作用。