黄芪提取物对常见致病菌的体内外抑菌活性测定

为了研究黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌的抑菌活性,采用试管二倍稀释法,测定黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌活性;采用相同浓度致病菌灌胃小鼠后,分别用黄芪提取物灌胃治疗,测定小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠中肠道菌群数量,以确定黄芪提取物的体内抑菌活性。结果表明,无论是在体外还是在体内,黄芪提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用,对大肠杆菌的抑制作用最强,对沙门氏菌的抑制作用最弱;且通过灌注黄芪提取物,显著降低了各种致病菌致病后小鼠的死亡率。通过研究可以得出,黄芪提取物对常见的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌具有较明显的体内外抑菌作用。

牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体的制备

为了评价牛坏死杆菌外膜蛋白43K OMP 的免疫原性,试验利用大肠杆菌原核表达系统对牛坏死杆菌43K OMP基因进行表达,纯化目的蛋白免疫兔,制备牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体,并对其进行鉴定。对基因序列进行预测分析后,针对大肠杆菌稀有密码子优化合成该基因序列,克隆至pET-32a 原核表达载体上,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达及镍柱进行纯化,获得重组蛋白大小约为59 ku。重组蛋白经Western blotting 鉴定后免疫兔,制备多克隆抗体。Western blot 检测牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体与43K OMP重组蛋白具有很好的免疫原性。研究成功制备了牛坏死杆菌43K OMP 多克隆抗体,为以43K OMP蛋白为基础的疫苗研究奠定基础。

坏死杆菌白细胞毒素的研究进展

坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)是一种革兰氏阴性严格厌氧菌,是与坏死性感染有关的机会性病原体,可引起牛、羊和人等非常严重甚至致命的疾病。坏死杆菌能够独立引起感染,也能与其它病原体(尤其是化脓曲霉菌和利氏卟啉单胞菌)协同感染[1-2]。坏死杆菌会直接或间接引起反刍动物的肝脓肿、腐蹄病、乳腺炎及子宫内膜炎,这些疾病在临床上极大增加了反刍动物的淘汰率,导致经济损失惨重。

不同时长冷暴露对仔猪六种组织结构的影响

研究不同时长冷暴露对仔猪前肢骨骼肌、肺脏、心脏、肾脏、胃和十二指肠组织结构的影响。建立急性冷暴露模型,并在冷暴露周期结束后麻醉处死并采集仔猪前肢骨骼肌、肺脏、心脏、肾脏、胃和十二指肠的组织样品进行固定,采用H.E染色法制作组织切片,镜下观察。观察发现冷暴露对各组织造成的损伤程度不同,不同组织间比较,肺脏损伤较为严重;在仔猪前肢骨骼肌、肺脏、肾脏、胃和十二指肠组织中,同组织间相比冷暴露12 h造成的损伤最为严重。冷暴露后仔猪肺脏组织主要出现肺泡间质增宽等变化;仔猪前肢骨骼肌组织主要出现肌纤维间质增宽,细胞颗粒变性,明显水肿等变化;仔猪肾脏组织主要出现细胞水肿,肾小管上皮细胞坏死变性等变化;仔猪胃组织主要出现细胞坏死,胃底绒毛脱落,出血及腺体的数量和体积变少等变化;仔猪十二指肠组织主要出现绒毛坏死脱落,严重充血,炎性细胞浸润等变化。仔猪心脏组织主要出现心肌纤维断裂,水肿和充出血现象等变化,其中心脏在冷暴露2 h和6 h后组织损伤相比于对照组较为严重,而冷暴露12 h后损伤较轻。急性冷暴露造成仔猪骨骼肌、肺脏、心脏、肾脏、胃和十二指肠的组织结构形态发生改变,进而在器官水平上影响仔猪的生理功能。

牛坏死杆菌43K OMP的生物信息学分析及B细胞表位预测

为了对牛坏死杆菌43K OMP进行生物信息学分析,并预测其B细胞表位,研究利用Prot Param在线软件、TMHMM在线软件、Net Phos软件、DNA star软件和I-TASSER在线软件,分别对43K OMP的理化性质、跨膜区、磷酸化位点、二级结构和三级结构进行分析,用Bepipred在线软件和Ellipro在线软件对其B细胞表位进行预测,并对预测的表位肽进行验证。结果表明43K OMP共编码377个氨基酸,相对分子质量为42.927×10^(3),理论等电点为8.74,该蛋白在1-20aa处存在信号肽区域,无跨膜区,包括34个磷酸化位点,具有10个构象B细胞表位,多个线性B细胞表位,合成的4表位肽经ELISA验证显示反应性良好。通过生物信息学技术分析出43K OMP的性质及结构,预测出其具有多个B细胞表位,为该蛋白的功能研究及基因工程疫苗的研制提供依据。

一例猫传染性腹膜炎的诊断

为了确诊黑龙江八一农垦大学动物医院接诊的一例11月龄布偶猫所患疾病,通过剖检观察并采集病变组织进行苏木精-伊红染色（H.E.染色）,观察其病理变化;应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术进行核酸复检。结果表明：胃、直肠、结肠等组织中均能扩增出猫传染性腹膜炎病毒（FIPV）N基因片段,并且剖检及病理切片观察可见典型病理变化,说明该猫患有猫传染性腹膜炎。

牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法经IPTG诱导表达重组43K OMP,纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗43K OMP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗43K OMP单克隆抗体进行效价、亚类、免疫原性及特异性鉴定。结果获得3株稳定表达抗43K OMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,取其中效价最高的1株命名为O43,其重链为IgG1,轻链为κ链,上清和腹水效价分别为1∶25 600和1∶105;该单克隆抗体可与重组43K OMP发生特异性反应,且与转染后瞬时表达43K OMP的BHK-21细胞特异性结合,发生荧光反应。结论成功表达并纯化了43K OMP,制备了牛坏死杆菌43K OMP单克隆抗体,为研究坏死杆菌的感染机制及发病机理奠定了基础。

河北省某牛场坏死杆菌的分离及鉴定

目的对河北省张家口市某牛场奶牛腐烂蹄肢部组织坏死杆菌进行分离及鉴定。方法采集17份奶牛腐烂蹄肢部组织,在苛养厌氧培养基中进行培养,培养液涂片进行革兰染色,提取细菌基因组DNA,PCR法鉴定病料组织培养物基因组DNA,并进行测序。纯化后细菌进行生化鉴定及药敏试验。结果病牛蹄组织革兰染色阴性,部分菌体呈杆状或长丝状;17份病牛蹄组织中共检测出7份坏死杆菌阳性样品;纯化后阳性菌液的生理生化特性与坏死梭杆菌基本一致;对亚胺培南(泰能)高度敏感,对氨苄西林/舒巴坦、红霉素、妥布霉素中度敏感,对克林霉素、青霉素G、氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西啉耐药。结论该牛场确认发生腐蹄病疫情,且主要由坏死杆菌引起。

牛坏死杆菌43kDa外膜蛋白真核质粒在BHK细胞中的瞬时表达

目的构建含有牛坏死杆菌43 kDa外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因的真核表达重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,并检测其在BHK细胞中的瞬时表达。方法将43 kDa OMP核苷酸全基因序列与pCAGGS-HA载体连接,构建重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP,转化至大肠埃希菌,将鉴定正确的阳性菌转染BHK细胞,采用间接免疫荧光和Western blot法检测重组蛋白的表达。结果经双酶切及PCR鉴定,重组质粒pCAGGS-43 kDa OMP构建正确;转染pCAGGS-43 kDa OMP的BHK细胞镜下观察可见绿色荧光,Western blot检测可见相对分子质量为43 000的目的蛋白。结论成功构建了pCAGGS-43 kDa OMP真核表达质粒,可在BHK细胞中瞬时表达,为进一步研究牛坏死杆菌感染机制奠定了基础。

牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum)白细胞毒素(leukotoxin)PL2蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法原核表达并纯化坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白,腹腔注射免疫BALB/c雌性小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并用GST标签蛋白对阳性孔进行二次反向筛选,针对亚克隆后稳定分泌PL2蛋白单克隆抗体的细胞株制备腹水,对单克隆抗体进行抗体效价检测、抗体亚类和Western blot鉴定及杂交瘤染色体分析。结果成功筛选出1株稳定分泌坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2D5;杂交瘤细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6400和1∶105;单克隆抗体重链为IgG3,轻链为κ链;杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体分别可与坏死杆菌培养液浓缩上清和重组PL2蛋白发生特异性反应,且与GST标签蛋白无反应;杂交瘤细胞染色体数目为102条,与预期一致。结论成功制备了牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体,为坏死杆菌白细胞毒素致病机制的研究提供了工具。