金钗石斛生物碱对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探究金钗石斛生物碱(DNLA)对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,DNLA组(DNLA,20 mg/kg),APAP模型组(APAP,300 mg/kg),APAP+DNLA低、高剂量(10、20 mg/kg)组,每组6只。灌胃给药7 d后,腹腔注射APAP溶液建立急性肝损伤模型,检测血清ALT、AST及肝组织GSH、SOD活性和MDA水平,HE染色观察肝组织病理变化,Western blot检测肝组织CYP2E1、Nrf2、GCLC、HO-1、NQO1、GPX1的蛋白表达水平;免疫荧光检测AML-12细胞中Nrf2蛋白的表达。结果与空白组比较,APAP模型组小鼠血清ALT、AST活性显著升高,肝组织MDA含量显著增加(P<0.01),SOD和GSH活性明显降低(P<0.05),CYP2E1蛋白表达增加(P<0.01),核蛋白Nrf2和GCLC、HO-1、NQO1蛋白表达明显降低(P<0.05),肝组织出现大片坏死及炎症细胞浸润。与APAP模型组比较,DNLA可显著降低小鼠血清中ALT、AST活性(P<0.01),升高肝组织SOD、GSH活性(P<0.05)、降低MDA水平(P<0.01),亦可降低CYP2E1蛋白表达(P<0.05),增加GCLC、NQO1、HO-1、GPX1及核内Nrf2的蛋白表达(P<0.01),改善肝脏组织病理损伤。结论DNLA能够改善APAP引起的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与激活Nrf2信号通路,增强小鼠肝脏抗氧化能力有关。

基于细胞水平评价白及多糖对黑色素生成的抑制作用

目的研究白及多糖对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中黑色素生成的抑制作用及其机制。方法采用CCK-8法检测白及多糖对B16-F10细胞活性的影响;采用NaOH裂解法测定白及多糖对B16-F10细胞内黑色素含量的影响;采用多巴氧化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测B16-F10细胞中酪氨酸酶(TYR)活性和酪氨酸酶相关蛋白1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP-2)的表达情况,并利用分光光度仪检测白及多糖的抗氧化能力。结果白及多糖在0.1~1.0 mg/mL浓度内对B16-F10细胞活性无影响。用0.5和1.0 mg/mL白及多糖处理B16-F10细胞,可降低B16-F10细胞内黑色素含量。1.0 mg/mL白及多糖可显著抑制α-MSH诱导的B16-F10细胞中TYR活性;0.5和1.0 mg/mL白及多糖可显著抑制α-MSH诱导的B16-F10细胞中TRP-1、TRP-2的蛋白表达。白及多糖在0.1~1.0 mg/mL浓度内,DPPH平均清除率为18.85%、27.10%、47.92%、60.65%,抗超氧阴离子平均活力为20.94、22.41、30.68、38.86 U/gprot,羟基自由基平均抑制能力为7.39、8.07、18.84、34.37 U/mgprot。结论白及多糖对B16-F10细胞中黑色素的生成具有良好的抑制作用,其机制可能与降低细胞内黑色素含量、抑制TYR活性和TRP-1、TRP-2的蛋白表达以及抗氧化作用有关。