Perilipin 2在小鼠肝脏CGI-58特异性敲除所致肝脏微泡型脂肪变性中的作用

目的探究Perilipin 2(Plin2)在肝脏CGI-58特异性敲除所致脂肪肝的作用,并比较Plin2和Plin3在脂滴生成和脂质蓄积的作用效能。方法将20只7周龄CGI-58^(Flox/Flox)小鼠(雄鼠10只,雌鼠10只)根据性别采用完全随机分组法分为对照组(NC组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及对照Micro-RNA的腺相关病毒)和实验组(Mi-KD组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及靶向Plin2的Micro-RNA的腺相关病毒),记录小鼠体质量变化,检测小鼠代谢相关表型和肝脏病理学的差异,RT-qPCR检测小鼠肝脏脂质代谢和胆固醇代谢相关基因的改变;以AML-12小鼠肝细胞作为细胞模型,构建SiRNA实现AML-12细胞Plin2/Plin3敲低,Bodipy染色和酶比色法检测对比正常培养和OA诱导下Plin2/Plin3敲低后AML-12细胞脂滴生成和脂质蓄积。结果Mi-KD小鼠肝脏中的PLIN2蛋白水平降低了99%以上;Mi-KD缓解了CGI-58特异性敲除雌鼠的肝肿大(P=0.0195)和肝细胞损伤(P=0.0004),降低了组织学NAS评分(P=0.0002)和肝脏甘油三酯含量(P=0.0166),显著改善了肝脏CGI-58特异性敲除所致的肝脏微泡型脂肪变性;敲低Plin2使AML-12细胞内甘油三酯含量呈下降趋势,敲低Plin3显著降低AML-12细胞内甘油三酯含量(P=0.0014);在OA诱导下,Plin2/Plin3敲低均显著降低OA诱导的AML-12细胞内甘油三酯的蓄积(P<0.05)。结论肝脏Plin2在CGI-58敲除所致的微泡型脂肪变性的发展过程中至关重要,Plin2和Plin3均参与肝细胞脂滴生成与脂质蓄积,且Plin3的作用强于Plin2。

京尼平苷调节胰腺β细胞GLUT2糖基化的分子机制

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种以持续高血糖和胰岛素抵抗为主要特征的常见慢性代谢性疾病。在胰腺β细胞中,糖促胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)对于维持机体血糖平衡具有非常重要的作用。前期研究发现中药栀子活性成分京尼平苷可快速调节胰腺β细胞对葡萄糖的吸收、代谢和葡萄糖诱导胰岛素分泌,但具体作用机制还有待探索。由于葡萄糖转运体(glucose transporter,GLUT)糖基化对于其感受细胞微环境改变,调节葡萄糖稳态起关键作用。该文探究了京尼平苷对胰腺β细胞中GLUT2糖基化关键分子的影响,结果证实,京尼平苷能够显著上调GlcNAcT-Ⅳa糖基化转移酶(GlcNAcT-Ⅳa glycosyltransferase,GnT-Ⅳa)和半乳凝集素9(galectin-9)mRNA和蛋白的水平,但对网格蛋白clathrin表达水平无明显影响;在低、中糖浓度条件下,京尼平苷短时间内(1 h)对GnT-Ⅳa蛋白的水平有显著调节作用,但对galectin-9蛋白水平无明显的影响。并且,京尼平苷还可以在短时间内显著影响糖基化GLUT2蛋白的水平。上述研究结果提示,京尼平苷可快速调节INS-1大鼠胰腺β细胞中糖基化关键分子GnT-Ⅳa蛋白的水平,影响GLUT2糖基化。这些研究结果提示,京尼平苷调节胰腺β细胞对葡萄糖的吸收、代谢和糖促胰岛素分泌可能与其调节GLUT2糖基化,影响其在细胞膜上的分布有关。