23-羟基桦木酸体外抑制血管生成的实验研究

目的探讨23-羟基桦木酸(23-HBA)对体外血管生成的抑制作用。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)法测定23-HBA对人毛细血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和小管形成的影响;用免疫组化染色法检测HMEC中CD31表达的变化。结果23-HBA体外可明显抑制HMEC增殖(IC50为40.44mg/L)、迁移和小管的形成,且呈明显的剂量依赖性。23-HBA的浓度为10mg/L时,HMEC中CD31的表达明显降低。结论23-HBA体外具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。

血清胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ与胃泌素联合检测对胃癌诊断的临床意义

探索血清PGⅠ、PGⅡ及GAS的联合检测对胃癌诊断的意义。采用RIA方法测定了 190名正常人和 12 9例胃病患者的血清PGⅠ、PGⅡ和GAS水平 ,其中 6 8例为胃癌患者。结果表明 ,胃癌患者血清PGⅠ水平和PGⅠ /PGⅡ比值明显低于对照组 ,但GAS水平却明显升高。PGⅠ、PGⅡ和GAS联合检测 ,对胃癌诊断的灵敏度可达 94 .2 % ,特异性达到 73.4 %。提示血清PGⅠ、PGⅡ和GAS的检测可作为胃癌的初步筛查手段 ,提高了胃癌的检出率。

胃癌患者血清胃蛋白酶原含量的检测及其临床意义

目的 探讨血清ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ含量变化与胃癌发生的关系，为胃癌的早期诊断提供线索。方法 采用放射免疫分析方法测定了１９０ 例正常人，１０３ 例胃癌，１９ 例胃溃疡，６４ 例十二指肠溃疡，３０ 例慢性萎缩性胃炎，８ 例胃出血，１８ 例胃癌全胃切除，６例全胃切除术后无复发和１７ 例全胃切除术后复发患者的血清样品ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ含量，并进行统计学分析。结果 与对照组相比，胃溃疡患者ＰＧ Ⅰ略有升高而ＰＧ Ⅱ明显升高（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，十二指肠溃疡患者ＰＧ Ⅰ明显升高（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，慢性萎缩性胃炎患者ＰＧ Ⅰ水平有所下降（ Ｐ＜ ０ ．０５） ，胃出血患者ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ水平变化不规则，胃癌患者ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅰ／ＰＧ Ⅱ明显下降（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，胃癌术后及术后无复发患者ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ水平也都明显下降（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，而术后复发患者与胃癌术后患者相比较ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ水平都明显升高（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。以ＰＧ Ⅰ＜ ３５ μｇ／Ｌ 或ＰＧ Ⅰ／ＰＧ Ⅱ＜ １ ．５ 为临界值，联合诊断胃癌，其灵敏度为７１ ．６ ％ ，特异性为８３ ．０ ％ 。结论 血清ＰＧ Ⅰ、ＰＧ Ⅱ含量的变化对胃癌的早期诊断及胃癌术后的随访具有重要的临床意义。

胃蛋白酶原I,Ⅱ的分离纯化及初步临床应用

用ＤＥＡＥ－５２阴离子交换层析，凝胶过滤高压液相层析（ＨＰＬＣ），Ｑ－２阴离子交换中压层析从人胃粘膜中提取了胃蛋白酶原Ｉ，Ⅱ，比活分别为１２．５Ｕ／ｍｇ和１９．１Ｕ／ｍｇ得率分别为３１．３５和１０．０％，提取的胃蛋白酶原Ｉ，Ⅱ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分别呈单一区带，分子量分别为２４ｋＤ和３７ｋＤ。潜在的蛋白水解活性的最适ｐＨ都为１．８ＰＧＩ经碱性缓冲液处理后，其水解活性明显变化。

23-羟基白桦酸抑制血管内皮细胞增殖和诱导凋亡的实验

目的研究23-羟基白桦酸(23-hydroxy betulinic acid,23-HBA)对人血管内皮细胞(human microcapillary endothelial cells,HMEC)增殖及凋亡的影响。方法采用SRB法测定23-HBA对HMEC增殖的抑制率,并用流式细胞术测定23-HBA对HMEC周期及凋亡的影响。结果23-HBA可明显抑制HMEC的体外增殖,IC50为40.44μg/ml。流式细胞术测定,HMEC出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高,与对照组相比,差别有统计学意义。HMEC的S期细胞含量明显上升,而G2/M期细胞含量下降。结论23-HBA具有明显抑制血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。

胃癌患者全胃切除后血清PGⅠ、PGⅡ含量变化与胃癌复发的关系

目的：研究胃癌患者全胃切除手术后血清胃蛋白酶原 Ⅰ（Ｐｅｐｓｉｎｏｇｅｎ ＰＧＩ）、胃蛋白酶原 Ｒ（ＰＧ Ⅱ）含量的变化与胃癌复发的关系，探讨血清 ＰＧＩ、ＰＧ Ⅱ作为胃癌复发标志物的可能性。方法：运用放射免疫分析方法测定了１９０例正常人，１０３例胃癌手术前病人，３３例胃部分切除病人，１８例全胃切除病人，２３例全胃切除后随访病人的血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ的含量，并进行统计学分析。结果：与正常对照组相比，胃癌患者手术前血清 ＰＧＩ水平较低，胃癌手术后血清 ＰＧＩ、ＰＧ Ⅱ含量均明显下降，下降程度与手术方式有关，胃部分切除病人血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ仍保持一定水平，而全胃切除病人血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ含量则降至很低水平。全胃切除手术后胃癌复发患者血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ水平明显高于未复发患者。以ＰＧⅠ＞２２ μｇ／Ｌ，ＰＧ Ⅱ＞９ μｇ／以（ｘ+2ｓ）为临界值，１７名复发病人中有１３例结果为阳性（阳性率 ７６． ５％）。结论：胃癌患者全胃切除后血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ含量作为随访指标，可为胃癌复发提供重要线索。

去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的 评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标。方法 采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型 ,分别灌喂阿仑膦酸钠和埃本膦酸钠 ,持续处理 6个月。以骨密度、骨生化标志物、骨矿含量、骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标 ,评价它们的价值。结果 两组大鼠模型用药后 ,各部位的骨密度明显升高。评价药物疗效时 ,敏感度、特异度、准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积。用药大鼠的股骨最大弯曲载荷、骨挠度、股骨干重、灰重、骨钙含量虽有不同程度的增高 ,血清骨钙素有一定程度的下降 ,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论 全身骨密度是评价防治骨质疏松症药物疗效的最佳指标 ,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。

67ku胃蛋白酶原的分离纯化及性质研究

用ＤＥＡｎ－５２阴离子交换层析，高压液相凝胶过滤层析两步法，从人胃粘膜中分离纯化到分子质量为６７ｋｕ的胃蛋白酶原．此蛋白具有较强的抗碱性，水解活性在ｐＨ１０．８处理后仍无明显变化，其水解活性的最适ｐＨ为１．８，比活性为５．

干扰素α-2b对HepG 2.2.15细胞增殖、凋亡及HBsAg与HBeAg表达的影响

目的:探讨干扰素α-2b(IFN α-2b)对HepG 2.2.15细胞增殖、凋亡及HBsAg与HBeAg表达的影响。方法:应用SRB法检测IFNα-2b作用3、6d后对HepG 2.2.15细胞增殖的影响,ELISA法检测IFN α-2b对HBsAg与HBeAg表达的影响。Hochest 33342、PI双染观察细胞凋亡情况。结果:IFN α-2b作用3、6d后细胞增殖均有所抑制,3d后上清中HBsAg、HBeAg表达就受到抑制,并呈剂量依赖性,6d后HBsAg表达明显受抑,而HBeAg表达与3d后的结果相似。Hochest33342、PI双染显示IFNα-2b可引起细胞凋亡,随药物浓度增加,凋亡细胞也逐渐增加,并且有少量细胞开始死亡。结论:IFNα-2b体外可抑制HBsAg、HBeAg表达,且对细胞增殖也有所抑制,并可引起细胞的凋亡和死亡。

白桦酸体外对人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及组织血管生成的影响

目的观察白桦酸(BA)对肿瘤细胞增殖及组织血管生成的影响。方法培养人肝癌细胞株Bel-7402、人鼻咽癌细胞株CNE、人血管内皮细胞株HMEC,分别以不同浓度的BA干预,比较Bel-7402细胞和CNE细胞增殖抑制率、凋亡率,并比较HMEC细胞增殖抑制率、迁移能力、血管形成能力。结果 BA可抑制Bel-7402细胞、CNE细胞增殖,促进其凋亡,且呈剂量依赖性(P均<0.05);BA可抑制HMEC细胞增殖,减弱迁移能力及血管形成能力,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论 BA可抑制人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及肿瘤组织血管生成。

^99Tc^m-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b的制备和生物分布

用氯化亚锡(SnCl2)还原法制备99Tcm-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b(GHSA-IFNα2b),研究了SnCl2和GHSA-IFNα2b的用量以及溶液pH对99Tcm-GHSA-IFNα2b标记率的影响;ICR小鼠尾静脉注射99Tcm-GHSA-IFNα2b(0.286MBq/只,n=6),于5、10、15、30、60、120min取脏器和血,称重、计数,计算%ID(organ)-1和%ID·g-1;并对99Tcm-GHSA-IFNα2b的SD大鼠显像进行了研究。结果表明,在pH=3.0~4.5、GHSA-IFNα2b的用量≥0.3mg、SnCl2的用量为3~60μg时,37℃反应30min,可得标记率>90%的99Tcm-GHSA-IFNα2b,并在6h内保持基本稳定;肝脏组织中的99Tcm-GHSA-IFNα2b在注射后10min高达52.51%ID(organ)-1,能够被肝脏特异性摄取,主要通过胆道、肠道排泄;大鼠静脉注射15~30min时,即可获得清晰的肝显像。

^125I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内分布研究

采用氯胺-T法对白蛋白融合干扰素α2b进行125I标记,PD-10柱纯化,三氯醋酸沉淀法测定放化纯;体外以WISH/VSV系统比较白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b的抗病毒活性;SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b,分别于给药后0.5、2、6、24、48、90、180、300h放血处死,取血和相关脏器,称重并测定放射性,计算每克脏器放射性占注入量的百分率(%ID?g-1)。结果显示,氯胺-T法制备的125I-白蛋白融合干扰素α2b标记率为82.72%,放化纯95.53%,放射性比活度为0.26MBq/μg;抗病毒活性比较结果表明标记前后的生物学活性几乎无变化;皮下注射大鼠体内分布研究表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b在血中于6h达高峰,消除缓慢,未见特异性组织或器官的浓聚。

23-羟基白桦酸对血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨23-羟基白桦酸(23-HBA)对血管内皮细胞(ECV-304)形态变化,增殖和迁移的影响。方法:SRB方法测定23-HBA对ECV-304细胞的增殖抑制率,体外琼脂法检测内皮细胞的迁移能力,并用光镜观察内皮细胞形态变化。结果:23-HBA对ECV-304细胞的IC50为39.74μg/ml。当23-HBA浓度提高到20μg/ml以上,ECV-304细胞的凋亡现象非常明显。23-HBA浓度在1μg/ml时即能抑制细胞的迁移。结论:23-HBA对ECV-304增殖和迁移均有显著抑制作用。

^(125)I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄研究

为研究125I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄行为,利用氯胺-T法制备了125I-白蛋白融合干扰素α2b,其标记率为82.72%,放化纯度为95.53%,放射性比活度为0.26MBq/μg。体外WISH/VSV系统抗病毒活性比较分析表明,白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b具有相近的抗病毒活性。SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b后,0～6、6～12、12～24、24～48、48～96、96～192和192～300h7个不同时段的尿、粪的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b主要通过肾脏排泄,部分可通过粪便排泄,300h时尿、粪中平均累积排泄率分别为80.10%和16.00%;0～1、1～2、2～4、4～6、6～12、12～24和24～30h7个不同时段的胆汁的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b也可通过肝脏代谢后经胆汁排泄,但这不是它的主要排泄途径,30h时,胆汁中的平均累积排泄率仅为1.61%。

同位素法体内示踪HSA-IFN-α2b的方法学研究

采用氯胺-T法制备了^(125)I-HSA-IFN-α2b,标记率为82.7%,放化纯度>95%,放射性比活度为O.26 TBq/g。体外WISH/VSV系统抗病毒活性分析表明,^(125)I标记对HSA-IFN-β2b的生物学活性几乎无影响。^(125)I-HSA-IFN-α2b的血清和各组织的回收率分别为102.0%、104.0%(心脏)、100.4%(肺)、100.9% (肝)、104.1%(脾)、101.4%(肾)和103.0%(小肠),均符合方法学考核中回收率达90%～110%的要求。^(125)I-HSA-IFN-α2b的溶液干扰、血清样品干扰和组织样品干扰实验的结果表明,溶液、血清和组织样品对测定均无干扰,可以直接进行测定。根据实验结果可以初步推断,采用^(125)I-HSA-IFN-α2b同位素示踪法进行HSA-IFN-α2b的体内分布排泄研究是可行的。

药物干预去势雌性大鼠骨质疏松症发生效果的评价

目的 评价阿仑膦酸钠、埃本膦酸钠、酪蛋白磷酸肽对去势雌性大鼠骨质疏松症的预防作用。方法 5 9周龄去势SD雌性大鼠随机分为 4组 ,即阿仑膦酸钠组、埃本磷酸钠组、酪蛋白磷酸肽组和对照组。分别给予相应干预药物持续处理 6个月后测定骨密度及灰重 ,并进行骨组织形态计量学及骨生物力学研究。结果 连续给药 6个月后 ,全身、腰椎和股骨头骨密度分析显示埃本膦酸钠组显著高于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;胸椎、胫骨骨小梁面积测量也以埃本膦酸钠组为优 (P <0 0 1,P <0 0 1) ;股骨灰重检测表明埃本膦酸钠组也明显高于对照组 (P <0 0 5 )。阿仑磷酸钠组的骨小梁面积显著高于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,但消化道毒性反应较重。酪蛋白磷酸肽组除全身骨密度外 (P <0 0 5 ) ,其它所测参数与对照组比较无明显差异。结论 埃本磷酸钠是一种较好的预防绝经后骨质疏松症的药物。对于阿仑膦酸钠的使用 ,建议可通过改变药物剂型和给药途径来完善。酪蛋白磷酸肽作为骨质疏松症的单一预防用药尚有局限性 。

液相色谱法分离胃蛋白酶原

首次应用高压凝胶过滤色谱和中压阴离子交换色谱提纯胃蛋白酶原，得到抗原ＰＧⅠ和ＰＧⅡ，一次提纯仅需５０ｍｉｎ。与以往文献报道的胃蛋白酶原纯化方法相比，具有简易、快速、高效的特点。

人前列腺特异抗原分离纯化

本文报道了一种从人精液中提纯前列腺特异抗原的方法,本方法仅需Affigel-Blue gel柱和凝胶HPLC二步层析,即可得到均一的PSA纯品。这是一个快速、有效的提纯方法。PSA是前列腺癌的特异肿瘤标志物。

HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)

为研制新型三、四天线半乳糖肝受体功能显像剂,须将三、四天线半乳糖与人血清白蛋白(HSA)偶联,故必须制备较纯净人血清白蛋白(HSA)。在FPLC上用HiTrapQ柱快速纯化人血清白蛋白(HSA)。经PAGE和SDS-PAGE鉴定只有一条带。在FPLC上用HiTrapQ柱纯化HSA有速度快、纯化量大且方法较为简便等特点。

可溶性白细胞介素15受体α亚单位的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:对鼠白细胞介素15受体α亚单位(IL-15Rα)的胞外区段,即可溶性IL-15Rα(sIL-15Rα)进行原核表达及纯化,并测定其配体结合能力及相应生物学功能。方法:采用RT-PCR方法,以鼠脾脏细胞总RNA为模板扩增编码sIL-15Rα的基因片段,经测序确证后与原核表达载体pQE-30连接,所得重组表达质粒pQE-30/sIL-15Rα转化E.coli M15构建表达重组子。通过降低诱导温度和IPTG浓度的方式实现重组蛋白的可溶性表达,金属镍螯合的Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,并经SDS-PAGE和Western blot验证。采用固相受体结合分析法测定重组蛋白与IL-15间的亲和力,并以CTLL-2细胞为靶细胞测定重组蛋白的生物学活性。结果:成功构建了重组表达质粒pQE-30/sIL-15Rα,并在25℃、0.5mmol/LIPTG条件下实现了重组蛋白的可溶性表达。所得重组蛋白的相对分子量约为29 kD,纯度大于95%,与IL-15之间的亲和力为4.9×10-11mol/L,具有显著的协同IL-15促CTLL-2细胞增殖效应。结论:获得了功能性的重组蛋白sIL-15Rα,为深入系统地研究IL-15Rα的独特生物学性状,以及开展IL-15靶向性的研究工作奠定了基础。