肠道菌群对半枝莲中活性成分的代谢及其抑制CYP1A1酶的影响

目的研究半枝莲提取物经肠道菌转化前后主要化学成分含量的变化及其对CYP1A1酶抑制能力的影响。方法采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UPLC-Q-TRAP-MS)技术检测半枝莲提取液在肠道菌中温孵0、0.5、1、2、4、6、12、24 h后主要活性成分的经时变化过程;通过CYP1A1酶活性分析实验研究半枝莲提取液经肠道菌转化不同时间点后对CYP1A1酶抑制作用的变化,并进一步研究半枝莲中主要黄酮类成分,野黄芩素、木犀草素、汉黄芩素及其苷对CYP1A1酶的抑制作用;利用分子对接验证野黄芩素、木犀草素、汉黄芩素与CYP1A1之间的结合情况。结果半枝莲提取液经过肠道菌转化后,野黄芩素含量先增加后减少,木犀草素、汉黄芩素含量增加,黄酮苷类成分野黄芩苷、木犀草苷、汉黄芩苷含量随时间延长显著减少,而二萜类成分半枝莲碱A、半枝莲碱B、半枝莲碱X含量无明显变化;半枝莲提取液经肠道菌温孵2、4、6 h后对CYP1A1酶活性的抑制作用增强,而12 h后这种增强作用逐渐减弱;野黄芩素、木犀草素、汉黄芩素与CYP1A1蛋白对接后的结合自由能分别为-6.33、-6.61、-7.09 kcal/mol,配体与CYP1A1中Phe224形成的π-π堆积作用为主要相互作用。结论半枝莲中的黄酮类化合物是其发挥抑制CYP1A1酶活作用的主要活性物质,可能与半枝莲的清热解毒功效有关。

消癌解毒方黄酮类成分及其给药后在大鼠体内分布

目的:建立超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)检测消癌解毒方水提液中黄酮类成分的方法,同时研究大鼠灌胃给予消癌解毒方水提液后黄酮类成分在体内的分布情况。方法:采用Agilent C 18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)反相色谱柱对各待测物进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,应用电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式下采集数据。结果:从消癌解毒方水提液中共鉴定出23个黄酮类化学成分;大鼠经灌胃给予消癌解毒方水提液后,6-甲氧基柚皮素(13)、柚皮素(14)、4′-羟基汉黄芩素(15)、芹菜素(16)、汉黄芩素(19)在多个生物样品中被检测发现,其中在肠、脑、胃、粪便样品中分别检测出6、6、12、10个黄酮类成分。结论:建立的方法可快速分析鉴定出消癌解毒方水提液中及给药后大鼠有关部位中黄酮类成分,为进一步阐释复方中特征化学成分及其在体内的变化分布规律提供参考。

比色法测定韭菜子不同极性部位中总甾体含量

目的:建立韭菜子提取物中总甾体的含量测定方法,考查总甾体类成分在韭菜子不同极性部位的分布情况。方法:以β-谷甾醇为标准品,香草醛-高氯酸显色,在545nm波长处测定总甾体的含量。结果:总甾体类成分的含量在石油醚部位最高,二氯甲烷部位其次,乙酸乙酯和正丁醇部位相对较低。结论:该方法准确简便,重现性好,可用于测定韭菜子的总甾体含量和比较韭菜子不同极性部位总甾体类成分的分布情况.

UHPLC-QTRAP-MS结合化学计量学分析半枝莲中多指标成分

该文拟建立超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS)方法同时测定半枝莲多指标成分的含量,为寻找半枝莲差异性质量控制成分提供参考。采用Thermo Acclaim^(TM) RSLC 120 C_(18)色谱柱(3.0 mm×100 mm,2.2μm),柱温40℃,进样量2μL,流动相A为0.1%甲酸水,流动相B为乙腈,流速0.4 mL·min^(-1),梯度洗脱,以多反应监测(MRM)方法进行质谱检测,利用聚类分析(HCA)及偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对数据进行处理。16个待测化合物在各自线性范围内均具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))均大于0.9932,精密度、稳定性、重复性试验RSD≤3.7%,平均加样回收率在95.67%~104.8%,RSD≤3.2%,经HCA及PLS-DA,样品被聚集为4类,并通过变量权重重要性排序(VIP)发现野黄芩素、野黄芩苷、毛蕊花糖苷、半枝莲碱X为4类样品间的主要差异成分。结果表明所建立的方法可用于半枝莲中主要活性成分的同时测定及质量控制研究。