“三结合”课程思政模式在《人体解剖学》教学中的思考与实践

长久以来,我国各高校课程思政开设存在诸多问题,课程思政效果并不显著.本研究将"三结合"思政模式应用于《人体解剖学》课程,将显性教育与隐性教育相结合,课内教育和课外实践相结合,课程思政考核与解剖学专业知识考核相结合,使该课程思政从课前到课中,再到课后,从课内到课外,实现全方位覆盖,促进学生全面发展,从而有助于培养有责任、有担当、有高尚医德的医疗人才.

大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体的构建及其对大鼠RPE细胞中Slit2基因的下调作用

背景年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人致盲的首要原因。目前，AMD的治疗方式在取得显著疗效的同时亦有一定的不足，寻找新的有效治疗靶点是当前的研究热点。目的构建大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体，筛选有效干扰序列以用于大鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞中Slit2基因沉默，为大鼠相关体内实验奠定基础。方法设计2条大鼠Slit2基因siRNA序列，退火形成DNA，连接形成慢病毒干扰载体并进行测序鉴定。采用三质粒共转染293T细胞法收获慢病毒（Lv-rSlit2-siRNA），用药物筛选法测定病毒悬液滴度。将大鼠RPE细胞分为空白对照组、空病毒组、Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组，根据分组分别用仅有病毒的载体和不同序列的Lv—rSlit2-siRNA载体转染细胞，分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法测定各组细胞中Slit2mRNA及蛋白的表达以确定Slit2基因的敲减率，筛选有效干扰序列。采用0、100、200和400μmol／LCoCl，孵育大鼠RPE细胞以制备缺氧细胞模型并转染筛选Lv—rSlit2-siRNA2干扰序列，采用实时荧光定量PCR法和ELISA法测定大鼠RPE细胞中血管内皮生长因子A（VEGFA）表达变化及细胞上清液中VEGFA质量浓度。结果成功构建2条大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体，病毒滴度分别为5×10^8TU／ml和3×10^8TU／ml，转染病毒后72h于荧光显微镜下观察RPE细胞慢病毒转染率均在70％以上。Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中Slit2mRNA相对表达量分别为0．67±0．09和0．23±0．11，明显低于空白对照组的1．03±0．31和空病毒组的0．92±0．07；Lv—rSlit2-siRNAl组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中Slit2蛋白相对表达量分别为0．62±0．07和0．49±0．02，明显低于空白对照组的1．00±0．10和空病毒组的0．95±0．11，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。0、100、200和400μmol／LCoCl，作用后，空白对照组和Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中VEGFAmRNA的相对表达量明显不同，差异均有统计学意义（F浓度=127．998，P〈0．01；Fn自=69．663，P〈0．01），不同浓度CoCl2作用后各组大鼠RPE细胞中VEGFA蛋白相对表达量均明显不同，差异均有统计学意义（F浓度=17．059，P〈0．01；F分组=91．791，P〈0．01）。100、200和400μmol／LCoCl2作用后Lv—rSlit2-siRNA2组大鼠RPE细胞中VEGFAmRNA表达量及蛋白质量浓度均明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论大鼠Slit2基因慢病毒干扰载体构建成功并筛选出有效干扰重组序列，其能有效下调大鼠RPE细胞中Slit2基因的表达，并抑制缺氧环境下VEGFA在大鼠RPE细胞中的表达。

重组人Slit2蛋白预处理可减轻内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎

目的探讨重组人Slit2蛋白(recombinant human slit2,rhSlit2)对内毒素诱导的SpragueDawley(SD)大鼠葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis,EIU)的作用。方法给予SD大鼠玻璃体腔内分别注射rhSlit2(10、30、100 ng/眼)。24 h后,将2 g/L的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)注射到大鼠双侧后足底肉垫内(200μg/鼠)。LPS注射24 h后观察大鼠前房炎症并进行临床评分;取大鼠房水进行房水蛋白浓度测定和房水细胞计数;LPS注射24 h后摘除大鼠眼球,制作石蜡切片HE染色后观察大鼠眼部形态学变化;采用Real-time PCR检测大鼠眼部炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA水平的表达;Western blot检测大鼠眼部IL-6、TNF-α和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。结果在LPS注射24 h后,rhSlit2对前房炎症有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性。LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组临床评分明显低于LPS+PBS组[(1.40±0.84)vs(5.60±0.97)分,P<0.01];HE染色可见各组大鼠眼内结构层次完好。与LPS+PBS组比较,LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组眼内炎症细胞渗出数量明显减少[(65.21±18.38)×106/m L vs(319.60±28.88)×106/m L,P<0.01];房水蛋白浓度明显降低[(12.59±3.04)vs(31.50±3.09)mg/m L,P<0.01];眼内炎症因子IL-6(19.69±5.28 vs 77.09±12.61)、TNF-α(1.78±0.33 vs 4.06±0.58)的mRNA表达降低(P<0.01);大鼠眼内IL-6(1.92±0.60 vs 4.42±0.11)、TNF-α(1.33±0.11 vs 1.69±0.21)和P-Akt(0.18±0.37 vs 0.55±0.34)蛋白水平也降低(P<0.01)。结论大鼠玻璃体腔Rh Slit2预注射对内毒素诱导的SD大鼠葡萄膜炎具有抑制作用。Rh Slit2可通过抑制PI3K/Akt信号通路的活化以抑制LPS诱导炎症反应。

Slit2-Robo信号在眼底及全身血管生成的研究进展

Slit是在果蝇中枢神经系统中发现的一类分泌型糖蛋白，Robo（Roundabout）蛋白为其受体。Slit-Robo信号在神经轴突导向、炎症反应、肿瘤转移以及血管生成等方面有着重要作用。Slit2是Slit蛋白家族的一个亚型，其在血管生成方面的作用受到广泛关注，且其对血管生成方面是促进还是抑制作用仍具争议。了解Slit2-Robo信号在眼底及其他血管生成的研究进展，可为探究其机制以及寻找治疗眼底新生血管的新靶点提供线索。

关于重症哮喘呼吸内科临床治疗的分析

探讨重症哮喘和呼吸衰竭患者在临床诊治过程中的临床诊断和紧急治疗结果。方法:选择2019年5月至2020年3月在我院诊断并治疗为严重哮喘和呼吸衰竭的64例患者,使用随机数对参考组和观察组进行分类,两组均作为基础治疗和观察组,根据参考组进行紧急治疗。记录并比较两组之间的临床诊断和治疗结果以及相关的血气分析指标。与结果参考组相比,观察组的临床诊断和治疗效果超过16.33%(P<0.05),观察组在与血气分析相关的指标方面表现更好(P<0.05)。结论:在重症哮喘和呼吸衰竭患者的临床诊断和治疗中使用紧急治疗可取得令人满意的临床诊断和治疗结果,这对于改善人体血气分析的相关指标非常重要。