HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨

目的 探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法 应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果 HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论 全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。

重建SCID小鼠免疫功能对肝癌抗原的体液免疫应答

为在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人免疫Ｂ淋巴细胞，将１２～１４周龄的胎儿肝细胞（１～２）×１０１０／Ｌ腹腔注射于ＳＣＩＤ小鼠，然后再分次接种肝癌细胞。用ＥＬＩＳＡ法于第４，５，６周连续检测ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠血清人ＩｇＧ；用免疫组化ＡＢＣ法检测各种组织中的人淋巴细胞。各实验小鼠均检测到人ＩｇＧ的存在，最高为３９１μｇ／Ｌ，且随时间的延长呈上升趋势。在ＳＣＩＤ－ｈｕ小鼠肝、脾及腹腔接种瘤组织的周边，可见人ＣＤ３＋和ＣＤ２０＋的淋巴细胞。上述结果表明，用人胎肝细胞移植可在ＳＣＩＤ小鼠体内获得人淋巴细胞，并对人肝癌细胞抗原产生免疫应答，分泌一定水平的抗人肝癌的抗体。提示：用人胎肝细胞在ＳＣＩＤ小鼠体内可建立人免疫系统的部分功能。

细胞生物学讨论课教学改革尝试

为了激发学员学习细胞生物学的积极性,加强全面素质教育,提高教学质量,我们组织了细胞生物学讨论课,并进行了问卷调查,结果显示,学员增强了对细胞生物学的学习兴趣,同时综合分析能力也得到了提高,并在学习过程中建立了互动式学习模式.

对生物医学研究生开设生物医学实验安全课程的必要性探讨

通过对当前生物医学发展与生物安全现状分析,探讨在生物医学研究生课程中设置生物医学实验安全课程的必要性.

抗肿瘤小分子靶向药物及靶点研究进展

恶性肿瘤目前仍然是全球排名第二的致死性疾病.与恶性肿瘤的常规治疗方法如手术、化疗和放疗等不同,分子靶向治疗作为肿瘤治疗的新手段,正以其高疗效,低毒副反应以及高度特异性等优势成为肿瘤治疗研究的热点.随着分子生物学机制的不断发展及生物技术产业的不断推动和支持,人们对肿瘤的探索也不断深入,越来越多的肿瘤特异性分子靶点已为人们所认识,随之而来的抗肿瘤小分子靶向药物亦发展壮大.本研究旨在依据肿瘤不同的分子生物学特性,对研究较多的肿瘤靶点及相应小分子靶向药物进行总结和综述.

不断更新教学内容深化细胞生物学教学改革

细胞生物学是生命科学的重要支柱和核心学科之一。21世纪的细胞生物学是生命科学前沿的一个活跃的、具有良好前景的一门基础必修学科。细胞生物学以细胞、亚细胞以及生物大分子的结构及其功能为研究对象，是从细胞和分子水平来研究生命本质的一门基础学科，是当前生命科学中发展较快，并正在与其他学科广泛交叉与渗透的前沿研究领域。

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究

目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。

PMA诱导的THP-1细胞分化过程中MMP-9及MMP-2的表达与细胞侵蚀性的关系

目的: 应用单核细胞THP -1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型, 并探讨THP- 1细胞分化过程中基质金属蛋白酶 9(MMP -9)及基质金属蛋白酶 2 (MMP -2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用。方法: 用乙酸肉豆蔻佛波酯 (PMA) 诱导THP- 1细胞向成熟的单核 巨噬细胞分化后, 采用倒置显微镜观察分化细胞的形态学变化。用流式细胞术测定细胞表面特异性抗原CD14的表达。采用明胶酶谱 (gelatin- zymogram)分析法测定分化前后THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达。采用侵蚀性小室 (BoydenChamber -Matrigel人工重组基底膜 )法, 观察分化前后的THP- 1细胞侵蚀性的变化。结果: THP- 1细胞向单核 巨噬细胞分化过程中, 细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁, 且出现CD14的高表达。分化后的THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达明显增多, 侵蚀性明显增强。结论:建立了THP- 1单核细胞的体外分化模型。该细胞在分化过程中, MMP- 9和MMP -2的表达增多、侵蚀性增强, 为巨噬细胞在RA发病机制的作用提供了一定的实验依据。

PBL模式在医学四年制护理专业细胞生物学教学中的应用

细胞是生命活动基本单元,细胞生物学内容是人类不断应用当代科技解决细胞科学问题而积累形成的,它涉及所有生命活动。细胞生物学是医学护理专业的基础课,在细胞生物学课程教学引入"以问题为导向的学习(problem-based learning,PBL)"教学模式,能培养学生的自学能力、团队协作能力、语言表达能力、分析问题和解决问题的能力等素质并提高学习效果。同时也能督促教师不断提升自身的教学技能,这对于深化教学改革、全面提升教学质量有重要意义。形成一种具有医学细胞生物学自身学科特色的PBL教学模式。

人免疫重建SCID小鼠的研究

４２只不渗漏ＳＣＩＤ小鼠分别腹腔注射经冷冻、复苏的胎肝或胎肝加胎胸腺细胞，每鼠２×１０７活细胞，建立人胎肝细胞ＳＣＩＤ小鼠模型Ⅰ和Ⅱ，研究人免疫系统。用人肝癌细胞（ＨＨＣＣ）免疫，ＳＣＩＤ鼠出现初始免疫答应，血清人ＩｇＧ平均滴度分别达到５１３．０±８４．２ｎｇ／ｍｌ和７１９．７±２０１．６ｎｇ／ｍｌ，ＩｇＧ峰值分别出现在免疫重建后１０～１２和１０～１４周，特异性抗ＨＨＣＣ抗体滴度分别达到１∶７０．４±３５．０５和１∶２９４．４±１６８．５２，免疫重建后７～８周龄，ＡＢＣ法免疫组化染色，免疫鼠模型肝、脾中可检出标记人的ＣＤ３＋、ＣＤ２０＋Ｔ和Ｂ淋巴细胞克隆和细胞岛。流式细胞仪检测了抗原免疫组和模型组外周血、脾脏、肝脏的人ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋标记的淋巴细胞数，其中标记ＣＤ２０＋淋巴细胞平均值外周血３．１２±３．０３％、脾脏１．４±０．２０％、肝脏２．３２±１．４９％。而无抗原免疫的模型组在肝脏仅有微量或检测不到人标记淋巴细胞。

原发性肝细胞癌中核转录因子-κB表达增强及其意义

目的 :研究核转录因子 κB(nucleartranscriptionfactor κB ,NF κB)在原发性肝细胞癌、肝硬化组织和正常肝组织中的表达及与临床的关系 .方法 :应用免疫组织化学方法对 6 3例原发性肝细胞癌、2 0例肝硬化、1 0例正常肝组织石蜡包埋标本进行NF κB半定量检测 .结果 :6 3例原发性肝细胞癌中有 5 2例NF κB阳性表达 (82 .5 % ) ,而肝硬化中NF κB阳性表达率仅为 2 5 % ,二者存在显著性差异 (P <0 .0 1 ) ;低分化癌的NF κB阳性率明显高于高分化癌 (P <0 .0 1 ) .NF κB阳性表达率在甲胎蛋白 (alphafetoprotein ,AFP)高表达肝癌组高于AFP低表达组 (P <0 .0 1 ) .NF κB阳性表达率在有淋巴结转移肝癌组织高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 1 ) .NF κB高表达 ,患者预后不佳 .结论 :NF κB在原发性肝细胞癌组织中表达增强 ,且与癌组织的分化程度、有无淋巴结转移、患者AFP水平呈正相关 ,NF

生物技术专业细胞工程教学改革与实践

从细胞工程课程的特点和学生专业特色角度出发,根据从事细胞工程课程多年教学实践,针对教材体系、教学内容、教学方法以及考核方式等方面探讨了细胞工程教学改革的体会与经验,以期为进一步提高教学效果与教学质量提供新的思路与方法。

稳定表达肝癌相关抗原HAb18G/CD147成纤维细胞株的建立及其意义

目的 :探讨将HAb1 8G全长cDNA转染成纤维细胞NIH/ 3T3的可行性及其意义 .方法 :将含有肝癌相关抗原HAb1 8G全长cDNA的真核表达载体 pcDNA3.0 /HAb1 8G利用脂质体介导法转染小鼠成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选建立稳定表达阳性克隆细胞株t3T3;利用流式细胞仪、间接免疫荧光染色方法鉴定目的蛋白转染情况 ;RT PCR琼脂糖电泳、明胶酶谱分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后HAb1 8G刺激 3T3细胞分泌基质金属蛋白酶 (MMP 2、MMP 9)的情况 .结果 :利用脂质体介导法将HAb1 8G全长cDNA转染入成纤维细胞NIH/ 3T3,G4 1 8筛选 ,流式细胞仪分析、间接免疫荧光染色证实成功建立了稳定表达HAb1 8G的阳性克隆株 ;RT PCR琼脂糖电泳证实t3T3细胞MMP 2、MMP 9mRNA转录水平较未转染前增多 ;明胶酶谱表明t3T3分泌MMPs能力较未转染前增强 .结论 :HAb1 8G全长cDNA可以稳定转染成纤维细胞 ,并能从核酸和蛋白水平诱导基质金属蛋白酶高表达 。

肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路关键分子的筛选

目的筛选肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路中差异表达的关键分子。方法提取SMMC-7721细胞和T7721细胞(SMMC-7721经稳定转染并高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞),应用信号转导相关基因芯片筛选两种肝癌细胞内差异表达的关键分子。结果基因芯片结果显示共有13个差异表达的基因,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞系中,表达下调的基因包括:骨形成蛋白(BMP)家族的BMP-2、BMP-5,内皮素1(ET-1),结缔组织生长因子-富含半胱氨酸血管生成诱导物61-肾母细胞瘤过表达基因(CCN)蛋白家族的WISP-2(Wnt1-induced signaling proteins-2/CCN5)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61/CCN1),前列腺干细胞抗原(PSCA);表达上调的基因包括:白细胞介素10受体α(IL-10Rα),趋化因子家族的IL-6、IL-8和CXC趋化因子配体2(CXCL2/GROβ),线粒体超氧化物歧化酶2(SOD2),B因子(B factor)和转化生长因子β(TGF-β)诱导基因克隆3(βig-h3)的表达。结论共筛选出HAb18G/CD147信号转导通路相关的13个差异表达基因,这些基因与肝癌细胞免疫微环境重塑、血管形成、增殖、侵袭和迁移等生物学过程相关。

医学细胞生物学实验教学中的问题及对策

细胞生物学实验教学分为基础型和创新型两种,在教学过程中需处理好两者间的关系。同时,为了充分激发学生的主动性和积极性,还要开展多种形式的教学方式,以不同层次的学生作为基础,一步一步开展锻炼学生科研及创新能力。因此,在这一背景下,分析了细胞生物学课程中实验教学改革中存在的一些问题,并针对这些问题提出相应的解决对策。

βig-h_3基因的真核表达及其对人7721肝癌细胞基质金属蛋白酶表达水平的影响

目的:构建βig-h3基因真核表达载体pEGFP-C2/βig-h3并转染人7721肝癌细胞,检测转染后细胞MMPs表达水平的变化。方法:用RT-PCR方法获得βig-h3基因,以pEGFP-C2为载体,构建重组表达质粒pEGFP-C2/βig-h3。重组质粒用脂质体转染人7721肝癌细胞,明胶酶谱法检测转染后细胞MMPs表达水平的变化。结果:正确构建了pEGFP-C2/βig-h3重组质粒,并且在人7721肝癌细胞达到高转染效率,转染后细胞MMPs表达水平明显升高。结论:成功构建了pEGFP-C2/βig-h3真核表达质粒,βig-h3促进人7721肝癌细胞分泌MMPs,提示βig-h3与肝癌的侵袭和转移密切相关。

综述-讨论互动教学在八年制细胞生物学中的应用

在医学八年制学生细胞生物学教学实践中引入综述-讨论互动教学模式,通过引导学生查阅文献、撰写综述、演讲讨论等过程,充分调动学生学习的主动性,扩展学生的知识面,培养学生的科研创新思维和团队协作能力,得到了较好的教学质量和效果。

βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响

目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、MMP-9的分泌量,均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞。结论:βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的促进因子。